| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-12页 |
| 1 引言 | 第12-19页 |
| ·锌指蛋白 | 第12-14页 |
| ·锌指蛋白的结构 | 第12-13页 |
| ·锌指蛋白功能阐述 | 第13-14页 |
| ·基因功能的研究方法 | 第14-17页 |
| ·微阵列及DNA芯片技术 | 第14-15页 |
| ·基因转导技术 | 第15页 |
| ·反义技术 | 第15页 |
| ·基因敲除与基因敲入技术 | 第15-16页 |
| ·人工染色体转导 | 第16页 |
| ·RNA干涉 | 第16-17页 |
| ·基因诱捕技术 | 第17页 |
| ·启动子 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 2 拟南芥锌指蛋白AtZFN1基因及其启动子克隆与序列分析 | 第19-38页 |
| ·试验材料 | 第19-20页 |
| ·材料 | 第19页 |
| ·酶、菌株及生化试剂 | 第19页 |
| ·溶液配制 | 第19-20页 |
| ·培养基的配制 | 第20页 |
| ·试验方法 | 第20-25页 |
| ·引物设计 | 第20页 |
| ·提取基因组DNA | 第20-21页 |
| ·拟南芥总RNA提取 | 第21页 |
| ·合成cDNA第一链 | 第21-22页 |
| ·AtZFN1基因cDNA序列的PCR扩增 | 第22页 |
| ·AtZFN1基因启动子序列的扩增 | 第22-23页 |
| ·PCR产物的目的片段回收 | 第23页 |
| ·回收产物的连接和转化 | 第23-24页 |
| ·单克隆的挑取及蹄选 | 第24页 |
| ·测序结果的分析及命名 | 第24-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-36页 |
| ·拟南芥基因组DNA提取 | 第25页 |
| ·拟南芥总RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·AtZFN1基因序列及其启动子序列的克隆 | 第26-29页 |
| ·AtZFN1基因的编码区分析 | 第29-32页 |
| ·AtZFN1蛋白序列分析 | 第32-34页 |
| ·密码子统计与分析 | 第34-36页 |
| ·讨论 | 第36页 |
| ·小结 | 第36-38页 |
| 3 表达载体的构建及转化 | 第38-51页 |
| ·材料 | 第38-40页 |
| ·植物材料与菌株 | 第38页 |
| ·质粒载体和生化试剂 | 第38页 |
| ·培养基的配制 | 第38-40页 |
| ·启动子的表达载体构建和转化 | 第40-42页 |
| ·引物设计 | 第40页 |
| ·质粒提取及PCR | 第40页 |
| ·回收PCR产物的目的基因片段 | 第40页 |
| ·回收目的产物的连接、转化 | 第40-41页 |
| ·单克隆的挑取及筛选 | 第41页 |
| ·质粒提取及双酶切 | 第41页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第41页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第41-42页 |
| ·农杆菌转化及其鉴定 | 第42页 |
| ·烟草转化(采用叶盘转化法) | 第42页 |
| ·AtZFN1基因地超表达载体构建和转化 | 第42-44页 |
| ·引物设计 | 第42-43页 |
| ·质粒提取及PCR | 第43页 |
| ·回收PCR产物的目的基因片段 | 第43页 |
| ·回收产物的连接和转化 | 第43页 |
| ·单克隆的挑取及筛选 | 第43页 |
| ·提取质粒和质粒双酶切 | 第43页 |
| ·构建表达载体 | 第43-44页 |
| ·制备农杆菌感受态 | 第44页 |
| ·农杆菌转化及其鉴定 | 第44页 |
| ·花器官农杆菌浸泡法转化拟南芥 | 第44页 |
| ·AtZFN1基因RNAi表达载体的构建及转化 | 第44-46页 |
| ·引物设计 | 第44-45页 |
| ·质粒提取及PCR | 第45页 |
| ·PCR产物的目的片段回收 | 第45页 |
| ·回收产物的连接和转化 | 第45页 |
| ·单克隆的挑取及筛选 | 第45页 |
| ·ihpRNA表达载体的构建 | 第45页 |
| ·制备农杆菌感受态 | 第45页 |
| ·农杆菌转化及其鉴定 | 第45-46页 |
| ·花器官农杆菌浸泡法转化拟南芥 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-51页 |
| ·拟南芥AtZFN1基因的超表达载体构建和转化 | 第46-47页 |
| ·构建拟南芥AtZFN1基因启动子的表达载体并转化 | 第47-48页 |
| ·拟南芥AtZFN1基因RNAi表达载体构建及转化 | 第48-51页 |
| ·讨论 | 第51页 |
| ·小结 | 第51页 |
| 4 再生植株的转基因检测 | 第51-56页 |
| ·材料 | 第51-52页 |
| ·植物材料 | 第51页 |
| ·生化试剂 | 第51-52页 |
| ·溶液的配制 | 第52页 |
| ·方法 | 第52-53页 |
| ·基因组DNA提取 | 第52页 |
| ·总RNA提取及反转录 | 第52页 |
| ·转基因拟南芥PCR检测 | 第52页 |
| ·RT-PCR检测获取的转基因植株 | 第52页 |
| ·转基因拟南芥GUS检测 | 第52-53页 |
| ·结果与分析 | 第53-55页 |
| ·PCR检测拟南芥的抗性苗 | 第53-54页 |
| ·拟南芥抗性植株RT-PCR检测 | 第54-55页 |
| ·GUS组织化学染色检测 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56页 |
| 5 AtZFN1基因的表达分析 | 第56-59页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-57页 |
| ·引物设计 | 第56页 |
| ·材料的获取 | 第56-57页 |
| ·AtZFN1基因的定量PCR检测 | 第57页 |
| ·结果与分析 | 第57-58页 |
| ·AtZFN1基因在根茎叶花中的差异表达 | 第57-58页 |
| ·赤霉素的处理对于AtZFN1基因表达量的影响 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 6 拟南芥AtZFN1基因的亚细胞定位与原核表达 | 第59-67页 |
| ·材料 | 第59-60页 |
| ·载体与菌株 | 第59页 |
| ·质粒载体及生化试剂 | 第59页 |
| ·溶液的配制 | 第59-60页 |
| ·构建亚细胞定位载体 | 第60-62页 |
| ·引物设计 | 第60页 |
| ·质粒提取及PCR | 第60页 |
| ·PCR产物的目的片段回收 | 第60-61页 |
| ·回收产物的连接和转化 | 第61页 |
| ·单克隆的挑取及筛选 | 第61页 |
| ·质粒提取及双酶切 | 第61页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第61页 |
| ·金粉的制备 | 第61-62页 |
| ·子弹的制备 | 第62页 |
| ·转化融合载体及其检测 | 第62页 |
| ·AtZFN1基因原核表达载体的构建 | 第62-63页 |
| ·引物设计 | 第62页 |
| ·质粒提取及PCR | 第62页 |
| ·PCR产物的目的片段回收 | 第62页 |
| ·回收产物的连接和转化 | 第62-63页 |
| ·挑取单克隆及筛选 | 第63页 |
| ·质粒提取及双酶切 | 第63页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-66页 |
| ·AtZFN1基因原核表达载体pET-ZFN1构建及鉴定 | 第63-64页 |
| ·AtZFN1融合蛋白诱导表达 | 第64-65页 |
| ·AtZFN1基因亚细胞定位瞬时表达载体构建及鉴定 | 第65页 |
| ·AtZFN1-GFP转化洋葱表皮细胞 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-67页 |
| 7 结论与展望 | 第67-69页 |
| ·结论 | 第67-68页 |
| ·创新点 | 第68页 |
| ·后续研究工作展望 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-73页 |
| 作者简介 | 第73页 |
