苏云金芽孢杆菌分离与新型cry基因资源的挖掘
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-17页 |
| 第一章 前言 | 第17-39页 |
| ·Bt菌基本特征 | 第17-18页 |
| ·Bt菌基因组 | 第18-20页 |
| ·Bt菌株收集 | 第20-21页 |
| ·Cry毒素 | 第21-28页 |
| ·Cry蛋白分类 | 第22-25页 |
| ·Cry蛋白的结构与功能 | 第25-26页 |
| ·Cry蛋白作用机理 | 第26-28页 |
| ·鉴定克隆cry基因 | 第28-30页 |
| ·蚊媒介疾病及蚊控制 | 第30-34页 |
| ·Bt生物农药 | 第34-36页 |
| ·转Bt基因作物 | 第36-39页 |
| 第二章 Bt菌株资源收集 | 第39-71页 |
| 引言 | 第39-41页 |
| 材料与方法 | 第41-53页 |
| ·菌株培养基与无菌技术 | 第41-43页 |
| ·土壤样品采集 | 第43-44页 |
| ·光学显微镜观察 | 第44-46页 |
| ·扫描电子显微镜 | 第46页 |
| ·芽孢杆菌和Bt菌株的分离 | 第46-47页 |
| ·菌种保藏 | 第47-48页 |
| ·生长曲线 | 第48-49页 |
| ·伴胞晶体蛋白制备 | 第49页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第49-50页 |
| ·Bt大质粒DNA提取 | 第50-51页 |
| ·脉冲场电泳分析 | 第51页 |
| ·生物测定靶标昆虫饲养 | 第51-52页 |
| ·生物活性定性分析 | 第52-53页 |
| 结果与分析 | 第53-70页 |
| ·土壤样品收集与Bt分离 | 第53-57页 |
| ·Bt菌株的分布 | 第57-64页 |
| ·Bt菌株特征分析 | 第64-70页 |
| ·Bt菌伴胞晶体形态 | 第64-65页 |
| ·Bt菌株生长曲线 | 第65页 |
| ·脉冲场琼脂糖电泳分析Bt菌大质粒 | 第65-66页 |
| ·伴胞晶体蛋白SDS-PAGE电泳分析 | 第66-67页 |
| ·Bt菌株杀虫活性测定 | 第67-70页 |
| 小结 | 第70-71页 |
| 第三章 鉴定、克隆和表达新型cry基因 | 第71-107页 |
| 引言 | 第71-72页 |
| 材料与方法 | 第72-88页 |
| ·菌株与质粒 | 第72页 |
| ·生物信息学分析工具 | 第72-73页 |
| ·通用引物设计 | 第73-77页 |
| ·Bt基因组DNA提取 | 第77页 |
| ·E.coli质粒DNA少量提取 | 第77-78页 |
| ·亚克隆 | 第78-82页 |
| ·PCR-RFLP方法鉴定cry基因 | 第82页 |
| ·琼脂糖电泳快速鉴定重组DNA方法 | 第82-83页 |
| ·菌落PCR | 第83-84页 |
| ·质粒DNA文库构建 | 第84-85页 |
| ·反向PCR | 第85页 |
| ·SON PCR | 第85-86页 |
| ·cry基因表达及活性测定 | 第86-88页 |
| 结果与分析 | 第88-105页 |
| ·鉴定克隆cry1-like基因 | 第88-93页 |
| ·鉴定克隆cry4-like基因 | 第93-95页 |
| ·鉴定克隆cry30-like基因 | 第95-97页 |
| ·鉴定克隆cry39/40-like基因 | 第97-99页 |
| ·Cry蛋白生物信息学分析 | 第99-102页 |
| ·cry基因表达与活性测定 | 第102-105页 |
| 小结 | 第105-107页 |
| 第四章 利用Bt进行蚊虫生物防治 | 第107-133页 |
| 引言 | 第107-109页 |
| 材料与方法 | 第109-117页 |
| ·菌株、质粒和引物序列 | 第109-112页 |
| ·扫描电镜 | 第112页 |
| ·Bt大质粒分析 | 第112页 |
| ·伴胞晶体蛋白分析 | 第112-113页 |
| ·对蚊和小菜蛾活性测定 | 第113页 |
| ·杀蚊cry基因鉴定 | 第113-114页 |
| ·杀蚊cry基因克隆 | 第114-115页 |
| ·伴胞晶体蛋白质谱分析 | 第115-116页 |
| ·cry基因表达及杀蚊活性测定 | 第116-117页 |
| 结果与分析 | 第117-131页 |
| ·伴胞晶体扫描电镜观察及SDS-PAGE分析 | 第117-119页 |
| ·BtS2160-1大质粒分析 | 第119-121页 |
| ·伴胞晶体蛋白活性测定 | 第121-123页 |
| ·BtS2160-1中的cry基因的鉴定 | 第123-124页 |
| ·新型杀蚊cry基因克隆与序列分析 | 第124-127页 |
| ·质谱分析鉴定伴胞晶体蛋白 | 第127-129页 |
| ·杀蚊Cry蛋白的表达与纯化 | 第129-131页 |
| 小结 | 第131-133页 |
| 参考文献 | 第133-149页 |
| 附录 | 第149-172页 |
| 致谢 | 第172-174页 |
| 攻读博士学位期间发表论文 | 第174-175页 |
