| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-29页 |
| 1 植物病原真菌毒素 | 第14-18页 |
| ·植物病原真菌毒素致病机理 | 第14-16页 |
| ·毒素对细胞质膜的影响 | 第14-15页 |
| ·毒素对线粒体和叶绿体的影响 | 第15-16页 |
| ·真菌毒素对人类健康及动物的危害 | 第16-17页 |
| ·玉米赤霉烯酮 | 第16页 |
| ·脱氧雪腐镰刀菌烯醇 | 第16-17页 |
| ·真菌毒素的防治措施 | 第17-18页 |
| ·中和植物病原真菌毒素 | 第17页 |
| ·外源物质对毒素的消除或减轻作用 | 第17-18页 |
| 2 小麦赤霉病 | 第18-19页 |
| 3 植物抗体研究进展 | 第19-24页 |
| ·表达植物抗体的方法 | 第19-20页 |
| ·用植物产生抗体的优势 | 第20页 |
| ·植物抗体的主要应用 | 第20-23页 |
| ·植物生理学研究中的应用 | 第23页 |
| ·以植物为表达体系生产抗体存在的问题及展望 | 第23-24页 |
| 4 小麦遗传转化研究进展 | 第24-28页 |
| ·原生质体转化 | 第24-25页 |
| ·基因枪轰击法遗传转化 | 第25-26页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第26页 |
| ·花粉管通道介导的遗传转化 | 第26-28页 |
| 5 本研究的意义 | 第28-29页 |
| 第二章 DONsCFv单链抗体基因导入烟草及其功能分析 | 第29-43页 |
| 1.材料与方法 | 第29-37页 |
| ·植物材料 | 第29页 |
| ·菌株材料及载体 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·农杆菌介导的烟草叶盘转化法 | 第29-30页 |
| ·烟草外植体的预培养 | 第29页 |
| ·农杆菌的培养 | 第29页 |
| ·烟草的转化 | 第29-30页 |
| ·脱菌培养与选择分化培养 | 第30页 |
| ·转基因植株的移栽 | 第30页 |
| ·转基因烟草总DNA的小量提取 | 第30-31页 |
| ·转基因烟草PCR检测 | 第31页 |
| ·ELISA和Westernblot检测转基因烟草中DONscFv的表达 | 第31-37页 |
| ·烟草总蛋白的提取 | 第31页 |
| ·ELISA检测转基因烟草DONscFv的表达 | 第31-32页 |
| ·Westernblot检测DONscFv的表达 | 第32-37页 |
| ·SDS-PAGE | 第32-33页 |
| ·Westernblot | 第33-37页 |
| ·转DONscFv基因烟草种子对真菌毒素DON的耐受分析 | 第37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-41页 |
| ·转化植株的获得 | 第37-38页 |
| ·初筛转基因烟草PCR检测 | 第38-39页 |
| ·转基因烟草ELISA检测 | 第39页 |
| ·Westernblot检测DONscFv的表达 | 第39-40页 |
| ·转DONscFv基因烟草种子对真菌毒素DON的耐受分析 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 DONscFv小麦高效表达载体的构建 | 第43-54页 |
| 1 材料 | 第43页 |
| ·菌株 | 第43页 |
| ·质粒载体 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·主要生化试剂 | 第43页 |
| ·其它试剂 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-47页 |
| ·质粒的小量提取(碱裂解法) | 第43-44页 |
| ·DONScFv基因的PCR扩增 | 第44页 |
| ·切胶回收 | 第44-45页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第45页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第45-46页 |
| ·连接产物转化JM109感受态细胞 | 第46页 |
| ·限制性内切酶反应体系 | 第46页 |
| ·连接反应 | 第46-47页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第47页 |
| ·质粒转化农杆菌 | 第47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-54页 |
| ·DONScFv小麦表达载体的构建 | 第47-54页 |
| ·构建过程 | 第47页 |
| ·Pfu扩增DONScFv基因的结果 | 第47-48页 |
| ·PCR产物的T-A克隆 | 第48-49页 |
| ·序列测定和分析 | 第49-50页 |
| ·pAHC25和pDON-TVector的双酶切 | 第50-51页 |
| ·DONscFv基因与去除gus的pAHC25大片段的连接 | 第51页 |
| ·pAHC-DON转化子的酶切验证 | 第51页 |
| ·HindⅢ酶切质粒pAHC-DON、pZP212 | 第51-52页 |
| ·pZP-DON重组子的筛选及酶切鉴定 | 第52-54页 |
| 第四章 转DONscFv单链抗体基因小麦的获得及赤霉病抗性鉴定 | 第54-66页 |
| 1 材料与方法 | 第54页 |
| ·实验材料 | 第54页 |
| ·受体小麦品种 | 第54页 |
| ·质粒载体及农杆菌菌株 | 第54页 |
| ·试剂及耗材 | 第54页 |
| 2 研究方法 | 第54-58页 |
| ·农杆菌介导法转化小麦 | 第54-56页 |
| ·小麦转化组织培养的相关培养基 | 第54-55页 |
| ·胚性愈伤组织的获得 | 第55页 |
| ·农杆菌的准备 | 第55页 |
| ·农杆菌侵染愈伤组织 | 第55页 |
| ·抗性愈伤组织的获得和转基因苗的获得 | 第55-56页 |
| ·转基因小麦的分子检测 | 第56-57页 |
| ·小麦基因组DNA的小量提取 | 第56页 |
| ·转基因小麦PCR检测 | 第56页 |
| ·ELISA检测转基因小麦中DONscFv的表达 | 第56-57页 |
| ·转基因植株的赤霉病抗性鉴定 | 第57-58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-64页 |
| ·愈伤组织分化时G418筛选浓度的确定 | 第58-59页 |
| ·转DONscFv基因小麦的获得 | 第59-61页 |
| ·T_0代转DONscFv基因小麦的PCR检测 | 第61-62页 |
| ·T_1代转DONscFv基因小麦的PCR检测 | 第62-63页 |
| ·ELISA检测T_1代转基因植株DONScFv | 第63页 |
| ·T_1代转基因小麦对赤霉病的抗性鉴定 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| ·农杆菌介导法转化小麦存在的问题 | 第64页 |
| ·转基因的遗传分离和外源基因的稳定性分析 | 第64-65页 |
| ·T_1代转基因植株的抗赤霉病分析 | 第65-66页 |
| 第五章 小麦成熟胚再生体系及基因枪转化 | 第66-71页 |
| 1 材料与方法 | 第66-68页 |
| ·实验材料 | 第66页 |
| ·小麦成熟胚再生体系的建立 | 第66-67页 |
| ·小麦种子的消毒 | 第66-67页 |
| ·成熟胚愈伤组织的诱导 | 第67页 |
| ·胚状体成熟和植株再生 | 第67页 |
| ·用PDS-1000/He基因枪将gus基因导入小麦 | 第67-68页 |
| ·gus基因的酶切鉴定 | 第67页 |
| ·基因枪法转化小麦成熟胚愈伤组织 | 第67-68页 |
| ·gus基因的表达检测 | 第68页 |
| 2 结果和分析 | 第68-69页 |
| ·成熟胚愈伤组织的诱导 | 第68页 |
| ·胚状体成熟和植株再生 | 第68-69页 |
| ·gus基因的酶切鉴定 | 第69页 |
| ·gus基因表达的检测 | 第69页 |
| 3 讨论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
