| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩语表 | 第13-14页 |
| 1 前言 | 第14-27页 |
| ·哺乳动物卵泡发育和闭锁 | 第14-20页 |
| ·卵泡的发育 | 第14-15页 |
| ·卵泡发育和闭锁的调控 | 第15-20页 |
| ·颗粒细胞凋亡 | 第16页 |
| ·死亡配体受体系统 | 第16-17页 |
| ·Bcl-2家族成员与颗粒细胞凋亡 | 第17页 |
| ·细胞因子与颗粒细胞凋亡 | 第17-18页 |
| ·p53与细胞凋亡 | 第18-20页 |
| ·P53家族及其活性调节 | 第20-24页 |
| ·p53家族 | 第20-21页 |
| ·p53翻译后修饰对其活性的影响 | 第21-24页 |
| ·乙酰化修饰 | 第21-22页 |
| ·磷酸化修饰 | 第22-23页 |
| ·第120为赖氨酸残基的乙酰化修饰 | 第23页 |
| ·单泛素化与多聚泛素化 | 第23-24页 |
| ·P53与SUMOylation | 第24-27页 |
| ·类泛素化SUMO系统 | 第24-25页 |
| ·p53的SUMO化修饰 | 第25-27页 |
| 2 研究目的与意义 | 第27-28页 |
| 3 材料和方法 | 第28-49页 |
| ·P53真核表达载体构建 | 第28-35页 |
| ·材料、试剂 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·仪器 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-35页 |
| ·模板制备 | 第29-30页 |
| ·小鼠卵巢组织总RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·反转录cDNA | 第30页 |
| ·p53a、p53b和p53b~(K375R)基因PCR扩增和鉴定 | 第30-33页 |
| ·p53a基因的PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·p53b基因的PCR扩增 | 第31页 |
| ·p53b~(K375R)基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·PCR产物电泳检测和胶回收 | 第32页 |
| ·PCR回收片段同T载体连接 | 第32-33页 |
| ·连接产物转化、筛选阳性克隆并测序验证 | 第33页 |
| ·目的基因与表达质粒的双酶切、回收 | 第33-34页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34页 |
| ·重组子的筛选和鉴定 | 第34-35页 |
| ·大提质粒 | 第35页 |
| ·小鼠颗粒细胞分离和培养 | 第35-37页 |
| ·试剂、溶液、实验动物 | 第35-36页 |
| ·仪器 | 第36页 |
| ·颗粒细胞分离和培养方法 | 第36-37页 |
| ·排卵前期颗粒细胞 | 第36-37页 |
| ·围排卵期颗粒细胞 | 第37页 |
| ·颗粒细胞传代 | 第37页 |
| ·颗粒细胞转染 | 第37-38页 |
| ·试剂、溶液 | 第37页 |
| ·仪器 | 第37-38页 |
| ·转染方法 | 第38页 |
| ·流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第38-39页 |
| ·试剂、溶液 | 第38页 |
| ·仪器 | 第38-39页 |
| ·操作方法 | 第39页 |
| ·细胞增殖检测 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·仪器 | 第39页 |
| ·检测方法 | 第39页 |
| ·Western Blot | 第39-44页 |
| ·材料、试剂 | 第39-40页 |
| ·溶液、缓冲液的配制 | 第40-41页 |
| ·1.5mol/L Tris(PH 8.8) | 第40页 |
| ·1.0mol/L Tris(PH 6.8) | 第40页 |
| ·30%丙烯酰胺 | 第40页 |
| ·10%SDS | 第40页 |
| ·10%过硫酸铵 | 第40页 |
| ·2X SDS loading buffer | 第40页 |
| ·5X电泳缓冲液 | 第40-41页 |
| ·10X转膜缓冲液 | 第41页 |
| ·10XTBS | 第41页 |
| ·封闭液 | 第41页 |
| ·仪器 | 第41页 |
| ·操作步骤 | 第41-44页 |
| ·清洗玻璃板 | 第41页 |
| ·灌胶与上样 | 第41-42页 |
| ·制胶 | 第41-42页 |
| ·上样 | 第42页 |
| ·电泳 | 第42页 |
| ·转膜 | 第42-43页 |
| ·封闭 | 第43页 |
| ·一抗孵育 | 第43页 |
| ·二抗孵育 | 第43页 |
| ·化学发光,显影、定影 | 第43-44页 |
| ·凝胶图象分析 | 第44页 |
| ·免疫荧光细胞化学 | 第44-45页 |
| ·材料、试剂 | 第44页 |
| ·操作方法 | 第44-45页 |
| ·制备细胞爬片 | 第44页 |
| ·免疫荧光细胞化学 | 第44-45页 |
| ·实时荧光定量PCR(QPCR) | 第45-48页 |
| ·试剂 | 第45页 |
| ·仪器 | 第45页 |
| ·具体步骤 | 第45-48页 |
| ·总RNA提取 | 第45-46页 |
| ·反转录 | 第46页 |
| ·基因组DNA的去除 | 第46页 |
| ·反转录 | 第46页 |
| ·QPCR | 第46-48页 |
| ·引物设计 | 第46-48页 |
| ·预实验 | 第48页 |
| ·QPCR | 第48页 |
| ·统计学分析 | 第48-49页 |
| 4 结果与分析 | 第49-62页 |
| ·p53真核表达载体的构建 | 第49-51页 |
| ·小鼠p53基因cDNA的扩增 | 第49页 |
| ·小鼠p53基因真核表达载体的构建和鉴定 | 第49-51页 |
| ·小鼠P53b的SUMO-1修饰及其对P53b稳定性和细胞内定位的影响 | 第51-56页 |
| ·SUMO化修饰维持小鼠p53蛋白高表达 | 第51-53页 |
| ·小鼠p53b的SUMO-1修饰验证及修饰位点检测 | 第53-54页 |
| ·小鼠p53b的SUMO-1修饰促进其蛋白稳定 | 第54-55页 |
| ·p53b在颗粒细胞内的定位受其SUMO-1修饰影响 | 第55-56页 |
| ·P53b的SUMO-1修饰对其调节颗粒细胞的影响 | 第56-62页 |
| ·p53b的SUMO-1修饰不影响颗粒细胞增殖 | 第56-57页 |
| ·p53b的SUMO-1修饰促进颗粒细胞凋亡 | 第57-58页 |
| ·实时荧光定量PCR(QPCR) | 第58-62页 |
| ·增殖相关基因的定量检测 | 第58-60页 |
| ·凋亡相关基因的定量检测 | 第60-62页 |
| 5 讨论 | 第62-67页 |
| ·P53的SUMO-1修饰 | 第62页 |
| ·P53的SUMO-1修饰对其稳定性影响 | 第62-64页 |
| ·P53的SUMO-1修饰对其定位影响 | 第64-65页 |
| ·P53的SUMO-1修饰对其调控细胞生长发育的影响 | 第65-67页 |
| 6 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
