| 目录 | 第1-7页 |
| 图表索引 | 第7-9页 |
| 中英文缩略词对照 | 第9-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 第一部分 NAIF1的原核表达、纯化及多克隆抗体制备 | 第15-40页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 材料与方法 | 第16-32页 |
| 一. 实验材料 | 第16-21页 |
| 1 菌种与质粒 | 第16页 |
| 2 主要试剂 | 第16-17页 |
| 3 重要试剂的配制 | 第17-20页 |
| 4 实验动物 | 第20页 |
| 5 主要仪器 | 第20-21页 |
| 二. 实验方法 | 第21-32页 |
| 1 pET32a-NAIF1表达载体的构建和鉴定 | 第21-27页 |
| 2 NAIF1蛋白的诱导表达及分离提纯与鉴定 | 第27-29页 |
| 3 NAIF1多克隆抗体的制备及纯化 | 第29-32页 |
| 结果 | 第32-37页 |
| 一. pET32a-NAIF1重组质粒的构建及鉴定 | 第32-33页 |
| 二. pET32a-NAIF1融合蛋白在大肠杆菌中的表达及可溶性分析 | 第33-34页 |
| 三. 包涵体的变性、纯化、复性及鉴定 | 第34-35页 |
| 四. 兔抗人NAIF1多克隆抗血清ELISA法检测效价 | 第35页 |
| 五. 兔抗人NAIF1多克隆抗体的鉴定 | 第35-37页 |
| 小结 | 第37-38页 |
| 讨论 | 第38-40页 |
| 第二部分 NAIF1在人正常及肿瘤组织中的表达研究 | 第40-60页 |
| 前言 | 第40-41页 |
| 材料与方法 | 第41-53页 |
| 一. 实验材料 | 第41-51页 |
| 1 试剂盒 | 第41页 |
| 2 抗体 | 第41页 |
| 3 组织芯片及病理切片 | 第41-51页 |
| ·人多种肿瘤及正常配对组织芯片病理资料 | 第41-43页 |
| ·人胃癌及胃正常组织切片病理资料 | 第43-46页 |
| ·人乳腺正常及乳腺癌配对芯片病理资料 | 第46-51页 |
| 二、实验方法 | 第51-53页 |
| 1 免疫组化 | 第51-52页 |
| 2 统计学分析 | 第52-53页 |
| 结果 | 第53-59页 |
| 一. 人多种正常及肿瘤组织芯片检测NAIF1的表达 | 第53-54页 |
| 二. NAIF1在正常胃组织中的表达明显高于胃癌组织 | 第54-55页 |
| 三. NAIF1的表达与胃癌分化程度、T分期的进展程度相关 | 第55-57页 |
| 四. NAIF1在乳腺癌中表达低于乳腺正常组织 | 第57-59页 |
| 小结 | 第59-60页 |
| 第三部分 NAIF1在胃癌及乳腺癌细胞系中的作用及其机制研究 | 第60-95页 |
| 前言 | 第60-61页 |
| 材料与方法 | 第61-75页 |
| 一. 实验材料 | 第61-65页 |
| 1 菌株、质粒与细胞株 | 第61页 |
| 2 主要试剂 | 第61-63页 |
| 3 主要仪器及用品 | 第63页 |
| 4 重要试剂的配制 | 第63-64页 |
| 5 PCR引物 | 第64页 |
| 6 计算机分析软件 | 第64-65页 |
| 二. 实验方法 | 第65-75页 |
| 1 pEGFP-N1-GRR,pEGFP-N1-NLS及pcDNA3.1-NAIFl重组载体的构建 | 第65页 |
| 2 细胞培养和冻存 | 第65页 |
| 3 半定量RT-PCR | 第65-67页 |
| 4 Western blot | 第67-69页 |
| 5 质粒DNA的制备及纯化 | 第69页 |
| 6 质粒DNA的浓度测定及纯度鉴定 | 第69-70页 |
| 7 脂质体介导的真核细胞转染 | 第70页 |
| 8 细胞免疫荧光 | 第70页 |
| 9 流式细胞术分析基因对细胞周期的影响及凋亡率的检测 | 第70-71页 |
| 10 DAPI染色分析凋亡细胞形态变化 | 第71-72页 |
| 11 肿瘤细胞生物学功能分析 | 第72-74页 |
| 12 流式细胞仪检测细胞凋亡(FACS) | 第74页 |
| 13 统计学分析 | 第74-75页 |
| 结果 | 第75-94页 |
| 一. pEGFP-N1-GRR、pEGFP-N1-NLS和pcDNA3.1-NAIF1重组真核载体的构建 | 第75-76页 |
| 二. NAIF1在胃癌和乳腺癌细胞系的表达情况检测 | 第76-77页 |
| 三. NAIF1对胃癌细胞系MKN45的影响及机制探讨 | 第77-86页 |
| ·NAIF1在MKN45细胞中的定位 | 第77-78页 |
| ·NAIF1抑制MKN45细胞的增值(MTT法检测) | 第78-79页 |
| ·NAIF1高表达降低MKN45细胞的克隆形成能力 | 第79-80页 |
| ·NAIF1降低MKN45细胞的体外迁移能力 | 第80-81页 |
| ·NAIF1能导致MKN45细胞周期阻滞并诱导凋亡 | 第81-82页 |
| ·NAIF1对MKN45细胞诱导凋亡的形态学检测(DAPI检测) | 第82-83页 |
| ·NAIF1对凋亡通路相关蛋白的影响 | 第83-86页 |
| ·NAIF1核心功能区的研究 | 第86页 |
| 四. NAIF1对乳腺癌细胞MCF7的影响及其机制探讨 | 第86-94页 |
| ·NAIF1不影响乳腺癌细胞MCF7的增值(MTT法) | 第87页 |
| ·NAIF1高表达不能诱导MCF7细胞凋亡 | 第87-88页 |
| ·NAIF1能抑制MCF7细胞体外迁移的能力 | 第88-90页 |
| ·NAIF1能抑制MCF7细胞的体外侵袭能力 | 第90-91页 |
| ·NAIF1对侵袭相关通路蛋白的影响 | 第91-94页 |
| 小结 | 第94-95页 |
| 讨论 | 第95-100页 |
| 参考文献 | 第100-105页 |
| 论文综述 | 第105-125页 |
| 参考文献 | 第120-125页 |
| 致谢 | 第125-127页 |
