| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 1 绪论 | 第12-23页 |
| ·立题依据 | 第12-13页 |
| ·国内外研究进展 | 第13-20页 |
| ·肠道微生物传统分离、纯化、鉴定方法的发展 | 第14页 |
| ·现代分子生物学方法对肠道微生物种类分类鉴定的研究 | 第14-17页 |
| ·昆虫及其它动植物内生微生物的微生态学研究进展 | 第17-18页 |
| ·苏云金杆菌及其转基因杀虫剂的研究、利用进展 | 第18-20页 |
| ·研究目的 | 第20页 |
| ·研究内容和技术路线 | 第20-22页 |
| ·研究内容 | 第20页 |
| ·技术路线 | 第20-22页 |
| ·本研究的创新点 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-39页 |
| ·供试昆虫、菌株与质粒 | 第23页 |
| ·培养基及主要试剂 | 第23-27页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·微生物传统鉴定试剂 | 第24页 |
| ·克隆和转化所用试剂 | 第24-25页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用试剂 | 第25-26页 |
| ·转化菌株筛选和伴孢晶体蛋白观察、提取所用试剂 | 第26页 |
| ·变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)所用试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27-28页 |
| ·桑粒肩天牛幼虫肠道微生物的分离、纯化、鉴定 | 第28-31页 |
| ·肠道微生物样品制备 | 第28页 |
| ·肠道微生物的分离、纯化 | 第28页 |
| ·肠道微生物的生理生化鉴定 | 第28-29页 |
| ·肠道微生物的分子生物学鉴定 | 第29-31页 |
| ·转化宿主菌株的筛选 | 第31-34页 |
| ·野生菌株内生质粒的消除 | 第31-33页 |
| ·红霉素抗性缺陷型菌株的筛选 | 第33页 |
| ·Cry3A 缺陷型菌株的筛选 | 第33-34页 |
| ·桑粒肩天牛肠道内生优势菌和常驻菌转化系统的建立 | 第34-35页 |
| ·转化宿主菌株对数生长早期的确定和感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·肠道内生菌的转化系统的建立和优化 | 第34-35页 |
| ·转化子的检测 | 第35页 |
| ·转化子中Cry3A 基因的检测 | 第35页 |
| ·转化子中重组质粒抽提及酶切图谱分析 | 第35页 |
| ·外源基因在天牛肠道优势菌和常驻菌中的稳定性及对宿主菌生长特性影响的测试 | 第35-36页 |
| ·外源基因在转化子中的稳定性测试 | 第35-36页 |
| ·外源基因对宿主菌生长特性影响的测试 | 第36页 |
| ·表达宿主菌株和培养基的筛选与工程菌发酵培养 | 第36页 |
| ·宿主菌株胞外蛋白酶活性检测 | 第36页 |
| ·发酵培养基的筛选 | 第36页 |
| ·工程菌的发酵培养 | 第36页 |
| ·伴胞晶体的提取纯化与检测分析 | 第36-38页 |
| ·伴胞晶体蛋白的观察和提取纯化 | 第36-37页 |
| ·伴孢晶体蛋白的SDS-PAGE 胶电泳分析 | 第37-38页 |
| ·工程菌在天牛肠道内的定殖和生物活性初步测试 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-56页 |
| ·桑粒肩天牛幼虫肠道可培养菌种类及多样性 | 第39-44页 |
| ·桑天牛幼虫肠道可培养菌群的种类和丰度 | 第39-43页 |
| ·桑天牛幼虫肠道的常驻菌群和优势菌群 | 第43-44页 |
| ·转化宿主菌株的确定 | 第44-46页 |
| ·桑粒肩天牛肠道优势菌和常驻菌转化系统的建立 | 第46-50页 |
| ·转化宿主菌株指数生长期的确定和感受态细胞的制备 | 第46-48页 |
| ·肠道内生菌的转化系统的建立 | 第48页 |
| ·转化子检验 | 第48-50页 |
| ·工程菌中外源基因的稳定性及生长特性 | 第50-51页 |
| ·杀虫毒蛋白最适表达宿主菌株和发酵培养基的确定 | 第51-53页 |
| ·工程菌伴胞晶体蛋白的形态、提取和分析 | 第53-54页 |
| ·工程菌在天牛幼虫肠道内的定殖能力和生物活性 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-60页 |
| ·桑粒肩天牛幼虫肠道的优势菌群和常驻菌群 | 第56页 |
| ·16S rDNA 序列分析法是对传统微生物分离、鉴定方法的不可或缺的补充 | 第56-57页 |
| ·肠道内生菌工程菌出发菌株的筛选 | 第57-58页 |
| ·影响受体菌转化效率的因素 | 第58页 |
| ·外源CRY3A 基因的表达促进机制 | 第58-59页 |
| ·伴孢晶体蛋白的提取、纯化 | 第59页 |
| ·工程菌在天牛肠道内的定殖能力和生物活性 | 第59-60页 |
| 5 结论与展望 | 第60-62页 |
| ·主要结论 | 第60-61页 |
| ·后续研究工作的展望 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
| A.作者在攻读硕士学位期间发表的论文目录 | 第68页 |
| B. 作者在攻读硕士学位期间参加的科研项目及得奖情况 | 第68-70页 |
