| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-26页 |
| ·水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)的基因组结构及功能 | 第11-15页 |
| ·RSV的分类地位 | 第11页 |
| ·RSV的粒体形态 | 第11页 |
| ·RSV的基因组结构及其编码蛋白 | 第11-14页 |
| ·RdRp(RNA1区段) | 第12页 |
| ·NS2、NSvc2(RNA2区段) | 第12-13页 |
| ·CP、NS3(RNA3区段) | 第13-14页 |
| ·SP、NSvc4(RNA4区段) | 第14页 |
| ·RSV的分子变异 | 第14-15页 |
| ·实时荧光定量PCR技术在植物病毒学中的应用 | 第15-25页 |
| ·Real-time PCR技术的概述 | 第15-21页 |
| ·Real-time PCR技术的基本原理 | 第16-17页 |
| ·Real-time PCR常用方法 | 第17-21页 |
| ·Real-time PCR在植物病毒学中的应用 | 第21-25页 |
| ·植物病毒的检测 | 第21-23页 |
| ·植物病毒与寄主植物以及介体昆虫的互作研究 | 第23-24页 |
| ·植物病毒与寄主互作中的基因表达差异分析 | 第24-25页 |
| ·本实验的研究目的及意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-39页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·供试毒源 | 第26页 |
| ·供试昆虫 | 第26页 |
| ·供试水稻品种 | 第26页 |
| ·试剂与仪器 | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27-39页 |
| ·RSV 7个基因在水稻悬浮细胞内的表达 | 第27-36页 |
| ·毒源繁殖 | 第27页 |
| ·病毒提纯及提纯病毒的紫外吸收测定 | 第27-28页 |
| ·水稻悬浮系的建立与RSV侵染 | 第28-31页 |
| ·水稻愈伤组织的诱导 | 第28-29页 |
| ·水稻悬浮系的建立 | 第29页 |
| ·水稻悬浮系的活力测定 | 第29-30页 |
| ·RSV接种水稻悬浮细胞 | 第30页 |
| ·荧光抗体染色统计病毒侵染悬浮细胞的百分比 | 第30-31页 |
| ·引物设计 | 第31-32页 |
| ·RSV接种的悬浮细胞总RNA的提取及其质量检测 | 第32-33页 |
| ·反转录合成cDNA | 第33-34页 |
| ·Real-time PCR检测及目的基因和内参基因标准曲线的建立 | 第34-36页 |
| ·最佳退火温度的确定 | 第34页 |
| ·目的基因和内参基因标准曲线的建立 | 第34-36页 |
| ·Real-time PCR检测不同样品中目的基因及内参基因的表达量 | 第36页 |
| ·数据分析 | 第36页 |
| ·RSV 7个基因在不同传毒效率灰飞虱体内的mRNA表达 | 第36-39页 |
| ·高、低传毒效率和带毒不传毒灰飞虱群体的构建 | 第36-37页 |
| ·灰飞虱个体和群体的传毒效率检测 | 第37页 |
| ·Real-time PCR的引物设计 | 第37-38页 |
| ·灰飞虱总RNA的提取及其质量检测 | 第38页 |
| ·反转录合成第一链cDNA | 第38页 |
| ·目的基因及内参基因Actin的最佳退火温度的确定 | 第38页 |
| ·目的基因和内参基因标准曲线的建立 | 第38-39页 |
| ·Real-time PCR检测不同传毒效率灰飞虱体内目的基因及内参基因的表达量 | 第39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-68页 |
| ·RSV 7个基因在水稻悬浮细胞内的表达 | 第39-58页 |
| ·病毒的提纯与鉴定 | 第39-40页 |
| ·水稻悬浮系的建立 | 第40-42页 |
| ·水稻愈伤组织的诱导 | 第40-41页 |
| ·水稻悬浮系的建立 | 第41-42页 |
| ·水稻悬浮细胞活性测定 | 第42页 |
| ·荧光抗体染色统计病毒侵染悬浮细胞的百分比 | 第42-43页 |
| ·RSV接种的悬浮细胞总RNA的提取与Real-time PCR检测 | 第43-58页 |
| ·样品总RNA的质量检测 | 第43-44页 |
| ·最佳退火温度的确定 | 第44-46页 |
| ·目的基因和内参基因的扩增曲线 | 第46-49页 |
| ·目的基因和内参基因的融解曲线分析 | 第49-52页 |
| ·目的基因和内参基因的Real-time PCR产物的琼脂糖凝胶电泳分析 | 第52-53页 |
| ·目的基因和内参基因的标准曲线 | 第53-55页 |
| ·RSV 7个基因在水稻悬浮细胞内的mRNA表达量分析 | 第55-57页 |
| ·RSV基因在水稻悬浮细胞内的mRNA表达量变化显著性分析 | 第57-58页 |
| ·RSV 7个基因在不同传毒效率灰飞虱体内的mRNA表达 | 第58-68页 |
| ·3种不同传毒效率灰飞虱传毒效率的测定 | 第58-59页 |
| ·3种不同传毒效率灰飞虱总RNA的提取及其质量检测 | 第59-60页 |
| ·目的基因和内参基因最佳退火温度的确定 | 第60页 |
| ·目的基和内参基因标准曲线的建立 | 第60-61页 |
| ·目的基因和内参基因的Real-time PCR产物的琼脂糖电泳分析 | 第61-62页 |
| ·目的基因和内参基因的扩增曲线 | 第62-64页 |
| ·RSV 7个基因在不同传毒效率灰飞虱体内的mRNA表达量的变化 | 第64-68页 |
| 4 小结与讨论 | 第68-76页 |
| ·RSV基因在不同寄主体内的表达 | 第68-72页 |
| ·RSV基因在水稻悬浮细胞内的表达 | 第68-70页 |
| ·RSV基因在不同传毒效率灰飞虱体内的表达 | 第70-72页 |
| ·SYBR Green I实时荧光定量法检测RSV的优势与劣势 | 第72-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 附录1 缩写词英汉对照 | 第83-85页 |
| 附录2 攻硕期间发表(投稿)的论文目录 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
