| 致谢 | 第1-17页 |
| 英文缩略词 | 第17-20页 |
| 中文摘要 | 第20-23页 |
| 英文摘要 | 第23-27页 |
| 第一章 卵巢恶性肿瘤浸润转移诊断治疗进展(文献综述) | 第27-101页 |
| 1.卵巢恶性肿瘤浸润转移的主要步骤 | 第27-32页 |
| ·原发恶性肿瘤的浸润 | 第27-30页 |
| ·细胞的转化和肿瘤细胞的增殖 | 第27-28页 |
| ·肿瘤细胞的分离 | 第28页 |
| ·粘附并破坏细胞外基质和基底膜 | 第28-29页 |
| ·肿瘤细胞运动 | 第29-30页 |
| ·恶性肿瘤细胞的迁移 | 第30页 |
| ·恶性肿瘤细胞粘附到脉管基底膜 | 第30页 |
| ·穿过脉管壁进入循环系统 | 第30页 |
| ·恶性肿瘤细胞的转移 | 第30-32页 |
| ·逃脱免疫监视在循环系统中生长 | 第30-31页 |
| ·锚定粘附并破坏脉管壁 | 第31-32页 |
| ·锚定粘附 | 第31页 |
| ·肿瘤细胞逸出循环系统 | 第31-32页 |
| ·转移灶的形成 | 第32页 |
| ·转移的休眠 | 第32页 |
| ·肿瘤转移的器官选择性 | 第32页 |
| 2 卵巢恶性肿瘤浸润转移的主要途径 | 第32-35页 |
| ·腹腔种植 | 第32-33页 |
| ·淋巴转移 | 第33-34页 |
| ·卵巢的淋巴系统 | 第33页 |
| ·恶性卵巢肿瘤的淋巴转移机制 | 第33页 |
| ·卵巢恶性肿瘤的淋巴转移规律 | 第33-34页 |
| ·影响卵巢肿瘤淋巴结转移的相关因素 | 第34-35页 |
| ·临床期别 | 第34页 |
| ·病理分型 | 第34页 |
| ·细胞分化程度 | 第34页 |
| ·原发病灶大小 | 第34-35页 |
| ·腹水性状 | 第35页 |
| 3 卵巢恶性肿瘤浸润转移主要分子机理 | 第35-52页 |
| ·基因调控与卵巢恶性肿瘤的浸润转移 | 第35-39页 |
| ·肿瘤转移基因 | 第35-36页 |
| ·肿瘤转移抑制基因 | 第36-39页 |
| ·黏附因子与卵巢恶性肿瘤的浸润转移 | 第39-45页 |
| ·钙粘蛋白家族 | 第39-41页 |
| ·整合素 | 第41-42页 |
| ·免疫球蛋白超家族 | 第42-43页 |
| ·选择素家族 | 第43-44页 |
| ·CD44 | 第44-45页 |
| ·血管的生成与卵巢恶性肿瘤的浸润转移 | 第45-47页 |
| ·血管内皮生长因子 | 第46-47页 |
| ·碱性成纤维细胞生长因子 | 第47页 |
| ·蛋白溶解酶与卵巢恶性肿瘤 | 第47-52页 |
| ·基质金属蛋白酶 | 第48-49页 |
| ·纤维蛋白溶解酶及其调节因子 | 第49-50页 |
| ·组织蛋白酶 | 第50-52页 |
| ·乙酰肝素酶 | 第52页 |
| 4 卵巢恶性肿瘤浸润转移的临床表现及特点 | 第52-54页 |
| ·盆、腹腔种植转移 | 第52-54页 |
| ·子宫及附件 | 第53页 |
| ·腹膜 | 第53页 |
| ·肠道 | 第53页 |
| ·肝、脾 | 第53页 |
| ·大网膜 | 第53-54页 |
| ·淋巴结转移 | 第54页 |
| 5 卵巢恶性肿瘤浸润转移的物理诊断 | 第54-58页 |
| ·超声检查在卵巢恶性肿瘤浸润转移诊断中的价值 | 第54-55页 |
| ·CT在卵巢恶性肿瘤浸润转移诊断中的价值 | 第55-56页 |
| ·MRI在卵巢恶性肿瘤浸润转移诊断中的价值 | 第56-57页 |
| ·PET-CT在卵巢恶性肿瘤浸润转移诊断中的价值 | 第57-58页 |
| ·PET-CT的原理 | 第57页 |
| ·PET-CT与卵巢恶性肿瘤浸润转移的诊断 | 第57-58页 |
| 6 卵巢恶性肿瘤浸润转移的分子诊断 | 第58-63页 |
| ·卵巢恶性肿瘤浸润转移的基因诊断 | 第58-60页 |
| ·C-erbB-2 | 第59页 |
| ·nm23基因 | 第59-60页 |
| ·p53基因 | 第60页 |
| ·肿瘤标志物 | 第60-63页 |
| ·肿瘤相关抗原 | 第61-62页 |
| ·激肽释放酶家族 | 第62-63页 |
| 7 卵巢恶性肿瘤浸润转移的治疗 | 第63-90页 |
| ·手术 | 第63-74页 |
| ·原发卵巢恶性肿瘤FIGO分期 | 第63-65页 |
| ·术后残余灶与预后的关系 | 第65页 |
| ·大网膜切除术在卵巢癌治疗中的价值 | 第65-66页 |
| ·卵巢癌大网膜转移的发生率 | 第65页 |
| ·卵巢癌大王膜切除与预后的关系 | 第65-66页 |
| ·大网膜切除范围 | 第66页 |
| ·腹后腔淋巴结清扫在卵巢癌治疗中的价值 | 第66-68页 |
| ·卵巢癌腹后腔淋巴结转移率 | 第66页 |
| ·卵巢癌腹后腔淋巴结转移与预后 | 第66页 |
| ·腹后腔淋巴结清扫的意义 | 第66-68页 |
| ·阑尾切除在卵巢癌治疗中的意义 | 第68-70页 |
| ·卵巢癌阑尾转移率 | 第68-69页 |
| ·卵巢癌阑尾切除与预后 | 第69-70页 |
| ·脾等远处转移灶切除在卵巢癌治疗中的价值 | 第70-74页 |
| ·脾切除术 | 第70-72页 |
| ·横膈膜手术 | 第72页 |
| ·卵巢癌肠道转移瘤手术 | 第72-74页 |
| ·卵巢癌的化学治疗 | 第74-82页 |
| ·晚期卵巢癌化疗的适应症 | 第74-76页 |
| ·先期化疗 | 第74-75页 |
| ·术后化疗 | 第75页 |
| ·腹腔化疗 | 第75-76页 |
| ·化疗药物、方案及途径 | 第76-82页 |
| ·化疗药物 | 第76-79页 |
| ·化疗方案及给药途径 | 第79-82页 |
| ·晚期卵巢癌化疗前瞻性多中心随机的临床验证 | 第82-83页 |
| ·铂类+紫杉醇 | 第82-83页 |
| ·多西紫杉醇与紫杉醇 | 第83页 |
| ·表柔比星 | 第83页 |
| ·拓扑替肯 | 第83页 |
| ·晚期卵巢癌的靶向治疗 | 第83-90页 |
| ·抗体介导的靶向治疗 | 第84-85页 |
| ·信号传导通路抑制剂 | 第85页 |
| ·酪氨酸激酶抑制剂 | 第85-86页 |
| ·抗血管生成药物 | 第86-87页 |
| ·基因治疗 | 第87-89页 |
| ·多重耐药基因 | 第87-88页 |
| ·启动子 | 第88页 |
| ·抑癌基因 | 第88-89页 |
| ·分子化疗 | 第89页 |
| ·光动力学治疗 | 第89-90页 |
| 8 乙酰肝素酶在恶性肿瘤浸润转移中的作用 | 第90-97页 |
| ·乙酰肝素酶的分子结构 | 第91-92页 |
| ·HPSE基因结构及定位 | 第91-92页 |
| ·HPSE蛋白质结构 | 第92页 |
| ·乙酰肝素酶的主要生物学作用 | 第92-93页 |
| ·细胞外基质的结构 | 第92-93页 |
| ·HPSE的生物学功能 | 第93页 |
| ·乙酰肝素酶的分子调节机制 | 第93-95页 |
| ·细胞因子调节 | 第94页 |
| ·启动子去甲基化 | 第94页 |
| ·转录因子调控 | 第94页 |
| ·微环境的PH值 | 第94-95页 |
| ·HSPG内化调控 | 第95页 |
| ·激素 | 第95页 |
| ·乙酰肝素酶在恶性肿瘤浸润转移中的生物学作用 | 第95-97页 |
| ·HPSE在各种恶性肿瘤的表达情况 | 第95-96页 |
| ·HPSE在肿瘤浸润转移中的作用 | 第96-97页 |
| 9 乙酰肝素酶在卵巢癌浸润转移中的作用机理 | 第97-99页 |
| ·HPSE在卵巢癌中的表达 | 第97-98页 |
| ·HPSE表达与卵巢癌组织学类型和组织分化的关系 | 第98页 |
| ·HPSE在卵巢癌浸润转移中可能的作用机理 | 第98-99页 |
| ·HPSE降解细胞外基质 | 第98-99页 |
| ·HPSE促进卵巢癌血管生成 | 第99页 |
| 10 本研究的目的和意义 | 第99-101页 |
| 第二章 乙酰肝素酶基因全长扩增和真核表达载体的构建 | 第101-127页 |
| 1 材料与方法 | 第101-115页 |
| ·材料 | 第101-105页 |
| ·标本 | 第101页 |
| ·质粒与菌株 | 第101-102页 |
| ·主要试剂及配制 | 第102-104页 |
| ·试剂 | 第102-104页 |
| ·试剂的配制 | 第104页 |
| ·仪器 | 第104页 |
| ·器具的处理 | 第104-105页 |
| ·引物的设计与合成 | 第105页 |
| ·HPSE引物 | 第105页 |
| ·内参基因β-actin引物 | 第105页 |
| ·实验方法 | 第105-115页 |
| ·卵巢癌组织总RNA的提取 | 第105-106页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第106-108页 |
| ·HPSE全长扩增 | 第108-109页 |
| ·PCR产物的纯化与回收 | 第109-110页 |
| ·感受态大肠杆菌的制备 | 第110页 |
| ·PCR产物的酶切反应及回收 | 第110-111页 |
| ·质粒的制备 | 第111-112页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第112页 |
| ·连接产物转化感受态大肠杆菌 | 第112-113页 |
| ·挑选阳性克隆 | 第113页 |
| ·质粒的快速提取 | 第113-114页 |
| ·PCR鉴定 | 第114页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第114页 |
| ·重组质粒测序 | 第114页 |
| ·测序结果的序列分析 | 第114-115页 |
| 2 结果 | 第115-124页 |
| ·卵巢癌组织总RNA琼脂糖凝胶电泳结果 | 第115页 |
| ·β-actin内参检测cDNAPCR反应产物琼脂糖凝胶电泳结果 | 第115-116页 |
| ·HPSE全长扩增产物琼脂糖凝胶电泳结果 | 第116页 |
| ·HPSE全长PCR产物测序结果 | 第116-120页 |
| ·携带HPSE基因的pcDNA3.1与原质粒pcDNA3.1琼脂糖凝胶电泳结果 | 第120页 |
| ·重组质粒HPSE-pcDNA3.1的PCR鉴定及酶切鉴定结果 | 第120-121页 |
| ·携带HPSE基因的pcDNA.1测序结果 | 第121-124页 |
| 3 讨论 | 第124-127页 |
| ·HPSE基因的结构特点及测序结果分析 | 第124-125页 |
| ·pcDNA3.1载体选择的意义 | 第125-126页 |
| ·HPSE-pcDNA3.1真核载体构建的意义 | 第126-127页 |
| 第三章 乙酰肝素酶介导的卵巢癌上皮细胞系浸润转移体外实验研究 | 第127-153页 |
| 1 材料和方法 | 第127-144页 |
| ·材料 | 第127-132页 |
| ·质粒、菌株与细胞株 | 第127-128页 |
| ·主要试剂及配制 | 第128-131页 |
| ·试齐 | 第128-129页 |
| ·试剂的配制 | 第129-131页 |
| ·仪器 | 第131-132页 |
| ·实验方法 | 第132-144页 |
| ·转染细胞系的选择 | 第132页 |
| ·脂质体介导的HPSE-pcDNA3.1质粒的转染 | 第132-134页 |
| ·携带HPSE基因的A2780细胞的筛选 | 第134-135页 |
| ·携带HPSE基因的A2780细胞的克隆 | 第135-136页 |
| ·RT-PCR检测转染后A2780细胞的HPSEmRNA表达 | 第136页 |
| ·western-blot检测HPSE蛋白表达 | 第136-139页 |
| ·细胞生物学特性实验 | 第139-143页 |
| ·细胞生长曲线测定(MTT法) | 第139页 |
| ·流式细胞仪检测细胞生长周期变化 | 第139-140页 |
| ·细胞集落形成实验 | 第140页 |
| ·细胞体外迁移能力测定 | 第140-141页 |
| ·细胞体外侵袭能力测定 | 第141-143页 |
| ·细胞体外黏附能力测定 | 第143页 |
| ·统计学方法 | 第143-144页 |
| 2 结果 | 第144-150页 |
| ·不同种类卵巢癌细胞的HPSE基因表达情况 | 第144页 |
| ·转染条件的确定 | 第144-145页 |
| ·绿色荧光蛋白载体pEGFP-N1阳性对照结果 | 第145页 |
| ·筛选A2780细胞的G418浓度的确定 | 第145页 |
| ·G418筛选结果 | 第145-146页 |
| ·筛选出的A2780细胞RT-PCR检测HPSE表达情况 | 第146页 |
| ·筛选出的A2780细胞western-blot检测HPSE蛋白表达结果 | 第146-147页 |
| ·筛选出的A2780细胞流式细胞仪检测细胞生长周期结果 | 第147页 |
| ·细胞集落形成实验结果 | 第147-148页 |
| ·筛选出的A2780细胞生长曲线结果 | 第148页 |
| ·细胞体外迁移能力的测定结果 | 第148-149页 |
| ·细胞体外侵袭能力测定结果 | 第149-150页 |
| ·细胞体外黏附能力测定结果 | 第150页 |
| 3 讨论 | 第150-153页 |
| 第四章 RNAi阻断乙酰肝素酶介导的卵巢上皮癌细胞系浸润转移体外实验研究 | 第153-176页 |
| 1 材料和方法 | 第153-164页 |
| ·材料 | 第153-158页 |
| ·质粒与菌株 | 第153-155页 |
| ·主要试剂及配制 | 第155-156页 |
| ·引物的设计与合成 | 第156页 |
| ·shRNA载体的设计与合成 | 第156-158页 |
| ·实验方法 | 第158-164页 |
| ·转染细胞系的选择 | 第158页 |
| ·脂质体介导的shRNA载体转染SKOV3细胞 | 第158页 |
| ·对HPSE沉默效果最佳的shRNA的筛选 | 第158-163页 |
| ·转染后SKOV3细胞总RNA提取 | 第158页 |
| ·SYBR GREE1实时定量PCR检测六种干扰载体转染SKOV3细胞后HPSE基因表达 | 第158-163页 |
| ·转染shRNA载体的SKOV3细胞的筛选 | 第163页 |
| ·筛选出的SKOV3细胞的克隆 | 第163页 |
| ·western-blot检测HPSE蛋白表达 | 第163页 |
| ·细胞生物学特性实验 | 第163-164页 |
| ·细胞生长曲线测定(MTT法) | 第163页 |
| ·细胞集落形成实验 | 第163页 |
| ·细胞体外迁移能力测定 | 第163页 |
| ·细胞体外侵袭能力测定 | 第163页 |
| ·细胞体外黏附能力测定 | 第163-164页 |
| 2 结果 | 第164-173页 |
| ·不同种类卵巢癌细胞的HPSE基因表达情况 | 第164页 |
| ·shRNA转染SKOV3细胞48小时后在荧光显微镜下结果 | 第164-165页 |
| ·构建好的GADPH-pTG-T质粒测序结果 | 第165页 |
| ·不同shRNA干扰载体对SKOV3细胞HPSE抑制效果的检测结果 | 第165-166页 |
| ·标准品QRT-PCR扩增标准曲线结果 | 第166页 |
| ·标准品测定的实时荧光扩增融解曲线结果 | 第166-167页 |
| ·转染不同shRNA载体后QRT-PCR检测HPSE基因表达情况结果 | 第167-168页 |
| ·转染不同shRNA载体后QRT-PCR检测HPSE基因表达的结果统计学分析结果 | 第168-169页 |
| ·转染后SKOV3细胞筛选后14天结果 | 第169-170页 |
| ·western-blot检测HPSE蛋白表达结果 | 第170页 |
| ·细胞生长曲线结果 | 第170-171页 |
| ·细胞集落形成实验结果 | 第171页 |
| ·细胞体外迁移能力的测定结果 | 第171-172页 |
| ·细胞体外侵袭能力测定结果 | 第172页 |
| ·细胞体外黏附能力测定结果 | 第172-173页 |
| 3 讨论 | 第173-176页 |
| 第五章 HPSE重组慢病毒转基因系统和重组慢病毒干扰系统的构建 | 第176-195页 |
| 1 材料和方法 | 第176-189页 |
| ·材料 | 第176-181页 |
| ·质粒与菌株、细胞 | 第176-180页 |
| ·主要试剂 | 第180-181页 |
| ·仪器 | 第181页 |
| ·HPSE引物的的设计与合成 | 第181-182页 |
| ·实验方法 | 第182-189页 |
| ·HPSE慢病毒表达系统的构建 | 第182-186页 |
| ·HPSE全长的扩增 | 第182页 |
| ·PCR产物的纯化和回收 | 第182-183页 |
| ·SpeI酶切PCR产物及回收 | 第183页 |
| ·PCR产物磷酸化 | 第183-184页 |
| ·载体的准备 | 第184-185页 |
| ·HPSE与pWPI的连接 | 第185页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌HB101_ | 第185页 |
| ·挑选阳性克隆 | 第185-186页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第186页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第186页 |
| ·重组质粒的测序 | 第186页 |
| ·测序结果分析 | 第186页 |
| ·HPSE-pWPI转染293T | 第186页 |
| ·转染后mRNA提取并转录为cDNA | 第186页 |
| ·HPSE-pWPI转染的293THPSE表达 | 第186页 |
| ·HPSE RNAi慢病毒载体的构建 | 第186-189页 |
| ·shRNA的设计 | 第186-187页 |
| ·插入片段的退火 | 第187页 |
| ·HpaI和XhoI双酶切pSico | 第187-188页 |
| ·连接反应 | 第188页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第188页 |
| ·挑选阳性克隆 | 第188页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第188页 |
| ·重组质粒的测序 | 第188-189页 |
| 2 结果 | 第189-193页 |
| ·HPSE全长扩增产物电泳结果 | 第189页 |
| ·HPSE和pWPI连接产物转化大肠杆菌后涂板生长结果 | 第189-190页 |
| ·阳性克隆提取的质粒电泳结果 | 第190页 |
| ·重组质粒PCR鉴定结果 | 第190页 |
| ·重组质粒的测序结果 | 第190-191页 |
| ·HPSE-pWPI转染293T结果 | 第191-192页 |
| ·HPSE-pWPI转染后HPSE表达结果 | 第192页 |
| ·RNAi重组质粒提取结果 | 第192页 |
| ·RNAi重组质粒测序结果 | 第192-193页 |
| 3 讨论 | 第193-195页 |
| 全文小结 | 第195-196页 |
| 参考文献 | 第196-217页 |
