| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 符号说明及缩写词 | 第16-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-39页 |
| ·猪圆环病毒的分类地位 | 第18-19页 |
| ·Ⅱ型猪圆环病毒的分子生物学 | 第19-25页 |
| ·病毒的基因组 | 第19-20页 |
| ·病毒的复制与转录 | 第20-21页 |
| ·病毒编码的蛋白 | 第21-25页 |
| ·Ⅱ型猪圆环病毒的流行病学 | 第25-29页 |
| ·病毒的流行状况与分布 | 第25-26页 |
| ·病毒的基因型 | 第26-27页 |
| ·病毒的自然史 | 第27-29页 |
| ·Ⅱ型猪圆环病毒的致病机理研究 | 第29-30页 |
| ·病毒引起免疫抑制 | 第29页 |
| ·免疫刺激的影响 | 第29-30页 |
| ·Ⅱ型猪圆环病毒的疫苗研究进展 | 第30-31页 |
| ·以乳酸菌为载体的疫苗研究进展 | 第31-36页 |
| ·乳酸菌是理想的活疫苗载体 | 第32页 |
| ·乳酸菌活疫苗载体的构建 | 第32-35页 |
| ·乳酸菌活疫苗载体的应用 | 第35-36页 |
| ·乳酸菌活疫苗载体的展望 | 第36页 |
| ·本文的研究意义和主要研究内容 | 第36-39页 |
| 第二章 Ⅱ型猪圆环病毒山东分离株的分子流行病学研究 | 第39-49页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·方法 | 第40-41页 |
| ·病毒DNA的提取 | 第40页 |
| ·orf2基因PCR扩增 | 第40页 |
| ·PCR产物纯化、连接、转化 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的验证 | 第41页 |
| ·序列的生物信息学分析 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-46页 |
| ·orf2基因的克隆与测序 | 第41-42页 |
| ·序列同源性分析 | 第42-43页 |
| ·遗传进化分析 | 第43-44页 |
| ·基因型分析 | 第44-46页 |
| ·讨论 | 第46页 |
| ·小结 | 第46-49页 |
| 第三章 Ⅱ型猪圆环病毒乳酸菌活疫苗载体的构建 | 第49-63页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-53页 |
| ·去核定位信号orf2基因的扩增 | 第50页 |
| ·L.lactis/E.coli穿梭表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·乳酸乳球菌的电转化 | 第51页 |
| ·重组乳酸乳球菌的表达及SDS-PAGE分析 | 第51-52页 |
| ·Western blot分析 | 第52页 |
| ·分泌表达条件优化 | 第52-53页 |
| ·结果 | 第53-61页 |
| ·去核定位信号orf2基因的克隆 | 第53-54页 |
| ·重组质粒酶切验证 | 第54-55页 |
| ·dCap蛋白在乳酸乳球菌中的表达 | 第55-56页 |
| ·Western blot实验 | 第56-57页 |
| ·重组乳球菌表达条件优化 | 第57-61页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 第四章 重组乳球菌对胃肠道耐受能力检测与免疫原性分析 | 第63-77页 |
| ·引言 | 第63页 |
| ·材料 | 第63-64页 |
| ·方法 | 第64-67页 |
| ·耐渗透压能力的测定 | 第64页 |
| ·耐胆酸盐能力的测定 | 第64页 |
| ·对胃转运耐受能力测定 | 第64-65页 |
| ·对肠转运耐受能力测定 | 第65页 |
| ·口服样品的处理 | 第65页 |
| ·小鼠免疫程序 | 第65页 |
| ·小鼠平均日增重的测定 | 第65-66页 |
| ·胸腺指数、脾脏指数的测定 | 第66页 |
| ·脾淋巴细胞转化试验 | 第66页 |
| ·小鼠血清中抗体的ELISA检测 | 第66-67页 |
| ·小鼠Peyer's结的评定 | 第67页 |
| ·结果 | 第67-74页 |
| ·耐渗透压实验 | 第67-68页 |
| ·耐胆酸盐能力测定 | 第68页 |
| ·胃转运能力的测定 | 第68-69页 |
| ·肠转运能力的测定 | 第69-70页 |
| ·对小鼠生长发育的影响 | 第70-71页 |
| ·对小鼠T淋巴细胞转化效果 | 第71页 |
| ·小鼠血清抗体IgG的检测 | 第71-72页 |
| ·小肠Peyer's结的变化 | 第72-74页 |
| ·讨论 | 第74-75页 |
| ·小结 | 第75-77页 |
| 第五章 ORF3蛋白诱导大肠癌和胃癌细胞凋亡的初步研究 | 第77-91页 |
| ·引言 | 第77-78页 |
| ·材料 | 第78-79页 |
| ·方法 | 第79-82页 |
| ·肿瘤细胞复苏、传代、冻存 | 第79页 |
| ·pEGFP-ORF3载体构建 | 第79-80页 |
| ·转染用质粒的提取 | 第80页 |
| ·细胞转染 | 第80页 |
| ·RT-PCR检测ORF3 mRNA的表达 | 第80页 |
| ·倒置显微镜观察 | 第80-81页 |
| ·荧光显微镜观察 | 第81页 |
| ·激光扫描共聚焦显微镜观察 | 第81页 |
| ·流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第81页 |
| ·LDH酶活浓度测定 | 第81-82页 |
| ·结果 | 第82-89页 |
| ·pEGFP-ORF3真核荧光表达载体的构建 | 第82-83页 |
| ·细胞内荧光检测 | 第83-84页 |
| ·RT-PCR检测细胞内ORF3 mRNA的表达 | 第84页 |
| ·ORF3诱导的细胞形态学变化 | 第84-85页 |
| ·激光扫描共聚焦显微镜观察细胞荧光与凋亡 | 第85-86页 |
| ·ORF3诱导的细胞核形态学变化 | 第86-87页 |
| ·ORF3对细胞周期的影响 | 第87-88页 |
| ·LDH酶活检测 | 第88-89页 |
| ·讨论 | 第89-90页 |
| ·小结 | 第90-91页 |
| 第六章 ORF3基因的克隆表达及诱导小鼠细胞免疫的研究 | 第91-107页 |
| ·引言 | 第91页 |
| ·材料 | 第91-92页 |
| ·方法 | 第92-98页 |
| ·orf3基因的大肠杆菌表达载体构建 | 第92-93页 |
| ·orf3基因中稀有密码子的同义突变 | 第93-95页 |
| ·ORF3蛋白的纯化 | 第95-96页 |
| ·orf3基因真核表达载体的构建 | 第96-97页 |
| ·小鼠给药程序 | 第97页 |
| ·小鼠血液中DNA的提取 | 第97页 |
| ·小鼠T淋巴细胞亚群数量的检测 | 第97-98页 |
| ·结果 | 第98-104页 |
| ·orf3基因E.coli表达载体的构建 | 第98页 |
| ·orf3基因中稀有密码子的同义突变 | 第98-100页 |
| ·ORF3蛋白的诱导表达 | 第100页 |
| ·ORF3蛋白的纯化 | 第100-101页 |
| ·orf3基因真核表达载体的构建 | 第101-102页 |
| ·血液中orf3基因检测 | 第102页 |
| ·小鼠T淋巴细胞亚群数量的检测 | 第102-104页 |
| ·讨论 | 第104-105页 |
| ·小结 | 第105-107页 |
| 结语 | 第107-109页 |
| 创新点 | 第109-116页 |
| 参考文献 | 第116-127页 |
| 攻读博士学位期间发表的文章 | 第127-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
| 外文写作一 | 第129-146页 |
| 外文写作二 | 第146-164页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第164页 |
