产几丁质酶海洋放线菌C203的分离鉴定及其酶基因的克隆
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 1 前言 | 第11-35页 |
| ·几丁质及其降解产物 | 第11-15页 |
| ·几丁质的理化性质 | 第11-12页 |
| ·几丁质及其降解产物的应用 | 第12-15页 |
| ·几丁质酶及其应用研究 | 第15-19页 |
| ·微生物几丁质酶 | 第15-18页 |
| ·微生物几丁质酶的应用 | 第18-19页 |
| ·海洋微生物研究进展 | 第19-27页 |
| ·海洋微生物 | 第19-21页 |
| ·海洋微生物多样性 | 第21-23页 |
| ·海洋微生物酶 | 第23-27页 |
| ·TAIL－PCR 技术 | 第27-34页 |
| ·TAIL－PCR 技术的原理 | 第28-30页 |
| ·引物设计 | 第30-31页 |
| ·TAIL－PCR 的反应程序 | 第31-32页 |
| ·反应条件（各成分组成） | 第32-33页 |
| ·优缺点 | 第33页 |
| ·研究现状及应用前景 | 第33-34页 |
| ·本课题的研究目的及意义 | 第34-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-57页 |
| ·主要试剂与溶液 | 第35-37页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要溶液 | 第35-37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37-40页 |
| ·产几丁质酶微生物的分离与发酵培养基 | 第37-38页 |
| ·放线菌分类鉴定培养基（培养特征） | 第38-39页 |
| ·放线菌分类鉴定培养基（生理生化特征） | 第39-40页 |
| ·其它培养基 | 第40页 |
| ·试剂制备方法 | 第40-41页 |
| ·胶体几丁质的制备 | 第40页 |
| ·DNS 试剂的制备 | 第40页 |
| ·非变性凝胶的配方 | 第40-41页 |
| ·SDS－PAGE 胶的配方 | 第41页 |
| ·海洋产几丁质酶菌株的分离筛选 | 第41-43页 |
| ·样品的采集与处理 | 第41页 |
| ·产几丁质酶微生物的富集培养 | 第41-42页 |
| ·产几丁质酶菌株的筛选 | 第42页 |
| ·酶活力测定 | 第42-43页 |
| ·活性菌株保存 | 第43页 |
| ·放线菌的分类鉴定 | 第43-48页 |
| ·形态学特征 | 第43页 |
| ·生理生化特征 | 第43-44页 |
| ·16S rDNA 序列测定及系统发育分析 | 第44-48页 |
| ·放线菌C203 发酵生产几丁质酶条件的优化 | 第48-51页 |
| ·培养条件 | 第48页 |
| ·测定方法 | 第48页 |
| ·培养基组成对菌株C203 产酶活性的影响 | 第48-49页 |
| ·培养条件对菌株C203 产酶活性的影响 | 第49-51页 |
| ·几丁质酶的研究 | 第51-52页 |
| ·几丁质酶的分离与鉴定 | 第51-52页 |
| ·几丁质酶理化性质的研究 | 第52页 |
| ·几丁质酶基因的克隆 | 第52-56页 |
| ·几丁质酶基因保守区段的克隆 | 第52-53页 |
| ·几丁质酶基因侧翼序列的克隆 | 第53-55页 |
| ·几丁质酶基因克隆片段的验证 | 第55-56页 |
| ·几丁质酶的分子生物学软件分析 | 第56-57页 |
| 3. 结果与分析 | 第57-86页 |
| ·菌株筛选结果 | 第57-62页 |
| ·N－乙酰氨基葡萄糖标准曲线 | 第57页 |
| ·细菌筛选结果 | 第57-59页 |
| ·放线菌筛选结果 | 第59-60页 |
| ·真菌筛选结果 | 第60页 |
| ·目的菌株的选定及其活性稳定性 | 第60-62页 |
| ·菌株C203 的分类鉴定 | 第62-66页 |
| ·形态学特征 | 第62-63页 |
| ·培养特征与生理生化特征 | 第63页 |
| ·16S rDNA 序列测定及其系统发育分析 | 第63-65页 |
| ·菌株C203 鉴定结果 | 第65-66页 |
| ·菌株C203 发酵条件的优化 | 第66-74页 |
| ·培养基组成对菌株C203 产酶活性的影响 | 第66-70页 |
| ·培养条件对菌株C203 产酶活性的影响 | 第70-74页 |
| ·几丁质酶的分离与鉴定 | 第74-75页 |
| ·几丁质酶的分离 | 第74页 |
| ·酶蛋白分子量的确定 | 第74-75页 |
| ·几丁质酶理化性质的研究 | 第75-77页 |
| ·胶体几丁质浓度对几丁质酶活的影响 | 第75-76页 |
| ·不同金属离子对酶活性的影响 | 第76页 |
| ·不同的反应温度对酶活力的影响 | 第76-77页 |
| ·不同的反应pH 值对酶活力的影响 | 第77页 |
| ·几丁质酶基因的克隆 | 第77-79页 |
| ·几丁质酶基因克隆片段的验证 | 第79页 |
| ·几丁质酶的分子生物学软件分析 | 第79-86页 |
| 4 讨论 | 第86-91页 |
| ·海洋产几丁质酶菌株的筛选 | 第86-87页 |
| ·分子分类在海洋放线菌多相分类中的应用 | 第87-88页 |
| ·C203 发酵工艺的优化 | 第88-89页 |
| ·利用TAIL－PCR 克隆基因侧翼序列 | 第89页 |
| ·酶的分离与纯化 | 第89-91页 |
| 5 结论 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-101页 |
| 缩略词 | 第101-102页 |
| 附录 | 第102-104页 |
| 致谢 | 第104页 |
