| 摘要 | 第1-16页 |
| ABSTRACT | 第16-20页 |
| 第一章 前言 | 第20-36页 |
| 1. 银杏种仁蛋白的研究进展 | 第20-21页 |
| 2. 蛋白溶液构象的研究进展 | 第21-34页 |
| ·维系蛋白质结构的作用力 | 第21-22页 |
| ·蛋白质的变性 | 第22-25页 |
| ·变性理论 | 第22-23页 |
| ·变性因素 | 第23页 |
| ·折叠态和去折叠态 | 第23-25页 |
| ·研究蛋白质溶液构象的方法 | 第25-34页 |
| ·蛋白质在溶液中三级结构的研究 | 第26-27页 |
| ·蛋白质在溶液中二级结构的研究 | 第27-30页 |
| ·蛋白质基团微环境研究 | 第30-31页 |
| ·热特性研究 | 第31-32页 |
| ·其他研究手段 | 第32-34页 |
| 3. 本课题的选题思想和目的意义 | 第34-36页 |
| 第二章 银杏种仁清蛋白的级分分析及GAP2A的纯化 | 第36-67页 |
| 1. 引言 | 第36页 |
| 2. 材料和方法 | 第36-42页 |
| ·实验材料和实验动物 | 第36-37页 |
| ·实验试剂 | 第37页 |
| ·实验设备及仪器 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-42页 |
| ·银杏种仁清蛋白GAP的分级与分析 | 第38-41页 |
| ·GAP2a的纯化 | 第41页 |
| ·GAP2a纯度鉴定 | 第41页 |
| ·GAP2a理化特性分析 | 第41页 |
| ·RP-HPLC分析 | 第41-42页 |
| ·GAP2a生物活性测定 | 第42页 |
| ·数据统计 | 第42页 |
| 3. 结果与分析 | 第42-65页 |
| ·GAP级分分析 | 第42-54页 |
| ·GAP在DEAE柱上的分级 | 第43页 |
| ·级分分子量分布 | 第43-44页 |
| ·级分紫外扫描图谱 | 第44-45页 |
| ·级分化学成分 | 第45-46页 |
| ·级分中S-S键和-SH含量 | 第46页 |
| ·氨基酸组成分析 | 第46-48页 |
| ·表面疏水性测定 | 第48-49页 |
| ·RP-HPLC分析 | 第49-52页 |
| ·抗氧化活性 | 第52-54页 |
| ·GAP2a纯化方法的优化 | 第54-55页 |
| ·GAP2a纯度的鉴定 | 第55-57页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第55-56页 |
| ·凝胶过滤色谱分析 | 第56页 |
| ·紫外光谱特征 | 第56-57页 |
| ·GAP2b和GAP2a的理化特性分析 | 第57-61页 |
| ·化学组成 | 第57-58页 |
| ·巯基和二硫键含量 | 第58-59页 |
| ·氨基酸组成 | 第59页 |
| ·表面疏水性 | 第59-60页 |
| ·RP-HPLC分析 | 第60-61页 |
| ·等电点 | 第61页 |
| ·GAP2a和GAP2b的生物活性分析 | 第61-65页 |
| ·抗氧化活性及对DNA损伤的保护作用 | 第61-63页 |
| ·GAP2a体外免疫调节作用 | 第63-64页 |
| ·GAP2a体外对S180肿瘤细胞的抑制作用 | 第64-65页 |
| 4. 小结与讨论 | 第65-67页 |
| 第三章 银杏种仁清蛋白GAP2A的一级结构及生物信息学分析 | 第67-98页 |
| 1. 引言 | 第67页 |
| 2. 材料和方法 | 第67-69页 |
| ·试验材料 | 第67页 |
| ·试验试剂 | 第67-68页 |
| ·主要实验设备及仪器 | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-69页 |
| ·N端序列分析 | 第68-69页 |
| ·ESI-MS/MS测定GAP2a部分序列 | 第69页 |
| ·GAP2a双链的拆分 | 第69页 |
| ·生物信息学分析 | 第69页 |
| 3. 结果与分析 | 第69-97页 |
| ·GAP2a的N端序列分析 | 第70-75页 |
| ·GAP2a部分蛋白序列分析 | 第75-85页 |
| ·GAP2a肽链的拆分 | 第85-87页 |
| ·GAP2a的生物信息学软件分析 | 第87-97页 |
| ·理化特性 | 第87-88页 |
| ·理论疏水性/亲水性分析 | 第88页 |
| ·亚细胞定位 | 第88页 |
| ·预测蛋白质序列的跨膜区 | 第88-92页 |
| ·蛋白的二级结构预测 | 第92-94页 |
| ·蛋白质的鉴定 | 第94-97页 |
| 4. 小结与讨论 | 第97-98页 |
| 第四章 银杏种仁清蛋白GAP2A的溶液构象及微环境效应对抗氧化活性的影响 | 第98-136页 |
| 第一节 GAP2A的溶液构象及溶液环境PH值对蛋白质构象和抗氧化活性的影响 | 第98-125页 |
| 1. 引言 | 第98-99页 |
| 2. 材料和方法 | 第99-101页 |
| ·材料和试剂 | 第99页 |
| ·主要实验设备及仪器 | 第99页 |
| ·实验方法 | 第99-101页 |
| ·荧光光谱 | 第99-100页 |
| ·圆二色谱 | 第100-101页 |
| ·差示扫描量热仪研究GAP2a的热特性 | 第101页 |
| ·GAP2a在不同pH值溶液中抗氧化活性的变化 | 第101页 |
| ·数据统计 | 第101页 |
| 3. 结果与分析 | 第101-122页 |
| ·荧光光谱 | 第101-109页 |
| ·GAP2a在水溶液中的内源荧光光谱 | 第101-103页 |
| ·pH值对GAP2a内源荧光的影响 | 第103-106页 |
| ·ANS荧光探针研究pH值对GAP2a构象的影响 | 第106-108页 |
| ·荧光各向异性 | 第108-109页 |
| ·圆二色谱分析 | 第109-113页 |
| ·DSC研究GAP2a在不同pH值下热力学特性的变化 | 第113-117页 |
| ·GAP2a的热力学特性 | 第113-115页 |
| ·GAP2a在不同pH值环境中的热力学特性 | 第115-117页 |
| ·化学发光法研究在不同pH值下抗氧化活性的变化 | 第117-122页 |
| ·化学发光测定体系的筛选 | 第118-119页 |
| ·邻苯三酚-鲁米诺化学发光体系测定pH环境对GAP2a清除超氧阴离子活性的影响 | 第119-122页 |
| 4. 小结与讨论 | 第122-125页 |
| 第二节 温度场对GAP2A蛋白质溶液构象的影响 | 第125-136页 |
| 1. 引言 | 第125页 |
| 2. 材料和方法 | 第125-126页 |
| ·试验材料和试剂 | 第125页 |
| ·主要试验设备和仪器 | 第125页 |
| ·试验方法 | 第125-126页 |
| ·内源荧光光谱 | 第125-126页 |
| ·荧光各向异性 | 第126页 |
| ·ANS外源荧光 | 第126页 |
| ·园二色谱 | 第126页 |
| ·抗氧化活性的变化 | 第126页 |
| ·数据统计 | 第126页 |
| 3. 结果与分析 | 第126-132页 |
| ·内源荧光光谱研究 | 第126-128页 |
| ·荧光各向异性研究 | 第128-129页 |
| ·ANS外源荧光研究 | 第129页 |
| ·园二色谱研究 | 第129-131页 |
| ·抗氧化活性研究 | 第131-132页 |
| 4. 小结与讨论 | 第132-136页 |
| 第五章 银杏种仁清蛋白的免疫药理活性研究 | 第136-176页 |
| 第一节 银杏种仁清蛋白对正常小鼠的免疫调节作用 | 第137-147页 |
| 1. 引言 | 第137页 |
| 2. 材料和方法 | 第137-141页 |
| ·试剂 | 第137-138页 |
| ·仪器 | 第138页 |
| ·细胞、实验动物及实验场所 | 第138页 |
| ·GAP的急性毒性实验 | 第138页 |
| ·灌胃给药 | 第138页 |
| ·腹腔给药: Horn法 | 第138页 |
| ·GAP的免疫原性研究 | 第138-139页 |
| ·碳粒廓清实验 | 第139页 |
| ·迟发型超敏反应实验 | 第139页 |
| ·半数溶血值(HC50)实验 | 第139-140页 |
| ·腹腔注射给药 | 第139-140页 |
| ·灌胃给药 | 第140页 |
| ·半体内半体外实验 | 第140-141页 |
| ·对小鼠免疫器官的影响 | 第140页 |
| ·对T、B淋巴细胞增殖的影响 | 第140页 |
| ·对小鼠脾细胞产生IL-2的影响 | 第140页 |
| ·对NK细胞活性的影响 | 第140-141页 |
| ·脾脏T细胞亚型的测定 | 第141页 |
| ·数据统计 | 第141页 |
| 3. 结果及分析 | 第141-146页 |
| ·银杏种仁清蛋白对小鼠的急性毒性 | 第141页 |
| ·银杏种仁清蛋白的免疫原性研究 | 第141-142页 |
| ·对小鼠巨噬细胞吞噬能力的影响 | 第142页 |
| ·对小鼠迟发型超敏反应的影响 | 第142-143页 |
| ·对半数溶血值(HC50)的影响 | 第143页 |
| ·对正常小鼠免疫器官的影响 | 第143-144页 |
| ·对T、B淋巴细胞增殖的影响 | 第144-145页 |
| ·对IL-2活性的影响 | 第145页 |
| ·对NK细胞杀伤活性的影响 | 第145-146页 |
| ·对小鼠脾脏T细胞亚群的影响 | 第146页 |
| 4. 小结与讨论 | 第146-147页 |
| 第二节 银杏种仁清蛋白对免疫功能低下小鼠的调节作用 | 第147-155页 |
| 1. 引言 | 第147-148页 |
| 2. 材料和方法 | 第148-149页 |
| ·试剂和药品 | 第148页 |
| ·仪器 | 第148页 |
| ·实验动物及实验场所 | 第148页 |
| ·方法 | 第148-149页 |
| ·对小鼠体重及免疫器官的影响 | 第148页 |
| ·对脾脏T、B淋巴细胞、胸腺T淋巴细胞活性的影响 | 第148-149页 |
| ·对脾脏NK细胞杀伤活性的影响 | 第149页 |
| ·对脾脏分泌IL-2能力的影响 | 第149页 |
| ·骨髓有核细胞数测定 | 第149页 |
| ·骨髓DNA含量测定 | 第149页 |
| ·数理统计 | 第149页 |
| 3. 结果与分析 | 第149-155页 |
| ·对模型小鼠表观情况的影响 | 第149页 |
| ·对模型小鼠体重的影响 | 第149-150页 |
| ·对模型小鼠免疫器官的影响 | 第150页 |
| ·对模型小鼠脾脏ConA活化和未活化的T淋巴细胞、LPS活化的B淋巴细胞增殖的影响 | 第150-151页 |
| ·对模型小鼠胸腺淋巴细胞增殖的影响 | 第151-152页 |
| ·对模型小鼠NK细胞杀伤活性的影响 | 第152页 |
| ·对模型小鼠脾脏分泌IL-2能力的的影响 | 第152-153页 |
| ·对模型小鼠血象的影响 | 第153页 |
| ·对模型小鼠强化后骨髓有核细胞和DNA含量的影响 | 第153-154页 |
| ·对模型小鼠强化后抗氧化能力的影响 | 第154-155页 |
| 4. 小结与讨论 | 第155页 |
| 第三节 银杏种仁清蛋白对衰老小鼠的免疫调节作用 | 第155-164页 |
| 1. 引言 | 第155-156页 |
| 2. 材料与方法 | 第156-158页 |
| ·药品与试剂 | 第156页 |
| ·仪器 | 第156页 |
| ·实验动物 | 第156-157页 |
| ·实验场所 | 第157页 |
| ·D-半乳糖致衰老模型小鼠的建立和指标的测定 | 第157页 |
| ·自然衰老小鼠外观及脏器影响实验 | 第157页 |
| ·自然衰老小鼠碳粒廓清能力影响实验 | 第157页 |
| ·自然衰老小鼠迟发型超敏反应(DTH)影响实验 | 第157-158页 |
| ·自然衰老小鼠半数溶血值(HC50)影响实验 | 第158页 |
| ·统计学处理 | 第158页 |
| 3. 结果与分析 | 第158-163页 |
| ·GAP对D-半乳糖致衰老模型小鼠外观的影响 | 第158页 |
| ·GAP对D-半乳糖致衰老模型小鼠体重和脏器的影响 | 第158-159页 |
| ·对衰老模型小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响 | 第159页 |
| ·对衰老模型小鼠脾细胞产生IL-2的影响 | 第159-160页 |
| ·对衰老模型小鼠血清中GSH-Px活性、SOD活性和MDA含量的影响 | 第160页 |
| ·对衰老模型小鼠白细胞的影响 | 第160-161页 |
| ·对自然衰老小鼠外观的影响 | 第161页 |
| ·对自然衰老小鼠体重和脏器的影响 | 第161页 |
| ·对自然衰老小鼠巨噬细胞吞噬能力的影响 | 第161-162页 |
| ·对自然衰老小鼠迟发型超敏反应的影响 | 第162页 |
| ·对自然衰老小鼠半数溶血值(HC50)的影响 | 第162-163页 |
| 4. 小结与讨论 | 第163-164页 |
| 第四节 银杏种仁清蛋白对辐射损伤小鼠的免疫保护作用 | 第164-176页 |
| 1. 引言 | 第164-165页 |
| 2. 材料和方法 | 第165-167页 |
| ·实验材料 | 第165页 |
| ·主要实验仪器 | 第165页 |
| ·实验动物 | 第165页 |
| ·辐射条件 | 第165页 |
| ·对亚急性辐射损伤小鼠存活率的影响 | 第165-166页 |
| ·对亚慢性辐射损伤小鼠外周血血象的影响 | 第166页 |
| ·对辐射损伤小鼠脏器指数、血清SOD活性 | 第166页 |
| ·辐射后脏器一般病理观察 | 第166页 |
| ·碳粒廓清实验 | 第166页 |
| ·迟发型超敏反应实验 | 第166页 |
| ·血清溶血素实验 | 第166-167页 |
| ·数据处理 | 第167页 |
| 3. 结果与分析 | 第167-174页 |
| ·对辐射损伤小鼠存活率的影响 | 第167页 |
| ·对辐射损伤小鼠外周血血象的影响 | 第167-168页 |
| ·对辐射损伤小鼠免疫器官的影响 | 第168-169页 |
| ·对辐射损伤小鼠血清SOD活性的影响 | 第169页 |
| ·对辐射损伤小鼠骨髓DNA含量的影响 | 第169-170页 |
| ·对辐射小鼠脏器病理结构的影响 | 第170-173页 |
| ·对辐射损伤小鼠巨噬细胞吞噬能力的影响 | 第173页 |
| ·对辐射损伤小鼠迟发型超敏反应的影响 | 第173-174页 |
| ·对辐射损伤小鼠半数溶血值得影响 | 第174页 |
| 4. 小结与讨论 | 第174-176页 |
| 第六章 银杏种仁清蛋白的体外抗氧化活性研究 | 第176-202页 |
| 第一节 化学发光法评价银杏种仁清蛋白的抗氧化活性及对DNA损伤的保护作用 | 第176-188页 |
| 1. 引言 | 第176-177页 |
| 2. 材料和方法 | 第177-178页 |
| ·试剂 | 第177页 |
| ·仪器 | 第177页 |
| ·方法 | 第177-178页 |
| ·对超氧阴离子的清除作用 | 第177页 |
| ·对羟基自由基的清除作用 | 第177-178页 |
| ·对双氧水的清除作用 | 第178页 |
| ·对DNA损伤的保护作用 | 第178页 |
| ·化学发光体系氧化还原电位分析 | 第178页 |
| ·数据统计 | 第178页 |
| 3. 结果与分析 | 第178-186页 |
| ·对超氧阴离子的清除作用 | 第178-180页 |
| ·对羟基自由基的清除作用 | 第180-183页 |
| ·硫酸铜-邻菲啰啉-抗坏血酸-双氧水化学发光体系 | 第180-181页 |
| ·硫酸亚铁-鲁米诺-双氧水的化学发光体系 | 第181-182页 |
| ·硫酸亚铁-鲁米诺的化学发光体系 | 第182-183页 |
| ·对双氧水的清除作用 | 第183-184页 |
| ·对DNA损伤的保护作用 | 第184-185页 |
| ·对鲁米诺-双氧水体系和硫酸亚铁-鲁米诺-双氧水体系氧化还原电位的影响 | 第185-186页 |
| 4. 小结与讨论 | 第186-188页 |
| 第二节 银杏种仁清蛋白的生物酶解及其肽的抗氧化活性 | 第188-198页 |
| 1. 引言 | 第188页 |
| 2. 材料与方法 | 第188-190页 |
| ·试验材料及主要试剂 | 第188页 |
| ·主要实验设备及仪器 | 第188页 |
| ·试验方法 | 第188-190页 |
| ·测试项目及方法 | 第189页 |
| ·酶种类的确定 | 第189页 |
| ·水解条件单因素分析试验 | 第189-190页 |
| ·正交试验确定(验证)最佳水解条件 | 第190页 |
| ·银杏种仁肽抗氧化活性试验 | 第190页 |
| 3. 结果与分析 | 第190-197页 |
| ·酶活力测定结果 | 第190页 |
| ·最佳酶种类的确定 | 第190页 |
| ·银杏种仁清蛋白水解单因素分析 | 第190-193页 |
| ·温度对GAP氨基酸态氮生成率的影响 | 第190-191页 |
| ·酶浓度对GAP氨基酸态氮生成率的影响 | 第191页 |
| ·底物浓度对GAP氨基酸态氮生成率的影响 | 第191-192页 |
| ·pH对GAP氨基酸态氮生成率的影响 | 第192页 |
| ·水解时间对GAP氨基酸态氮生成率的影响 | 第192-193页 |
| ·正交试验结果分析 | 第193-194页 |
| ·银杏种仁肽的抗氧化活性 | 第194-197页 |
| ·对羟基自由基的清除作用 | 第194-195页 |
| ·清除超氧阴离子自由基试验分析 | 第195-197页 |
| 4. 小结与讨论 | 第197-198页 |
| 第三节 银杏种仁清蛋白对S180肿瘤的抑制作用 | 第198-202页 |
| 1. 引言 | 第198页 |
| 2. 材料和方法 | 第198-199页 |
| ·材料与试剂 | 第198-199页 |
| ·仪器 | 第199页 |
| ·实验动物 | 第199页 |
| ·实验场地 | 第199页 |
| ·银杏种仁清蛋白对S180肿瘤的抑制作用 | 第199页 |
| ·动物体内实验 | 第199页 |
| ·细胞体外实验 | 第199页 |
| ·数据统计 | 第199页 |
| 3. 结果与分析 | 第199-201页 |
| ·对S180肿瘤小鼠的体内抑制作用 | 第199-200页 |
| ·对S_(180)肿瘤细胞的体外抑制作用 | 第200-201页 |
| 4. 小结与讨论 | 第201-202页 |
| 第七章 结论与展望 | 第202-205页 |
| (一)结论 | 第202-203页 |
| (二)展望 | 第203-205页 |
| 参考文献 | 第205-234页 |
| 附录一 缩略语表 | 第234-236页 |
| 附录二 攻读博士学位期间发表的论文 | 第236-237页 |
| 一、作为第一作者发表 | 第236页 |
| 二、非第一作者发表 | 第236-237页 |
| 致谢 | 第237-238页 |
