一、中文摘要 | 第1-8页 |
二、英文摘要 | 第8-10页 |
三、主要缩略语英文索引 | 第10-11页 |
四、正文 | 第11-39页 |
前言 | 第11-12页 |
第一章 材料和方法 | 第12-22页 |
·材料 | 第12-15页 |
·方法 | 第15-22页 |
·总RNA 的抽提 | 第15页 |
·逆转录 | 第15-16页 |
·PCR 扩增开放阅读框 | 第16页 |
·PCR产物的纯化回收 | 第16-17页 |
·PCR 产物与T-载体的连接 | 第17页 |
·转化(热休克法) | 第17页 |
·质粒的小量制备 | 第17-18页 |
·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第18页 |
·测序 | 第18页 |
·pEGFP-C1-SDF-1α重组质粒的制备 | 第18-19页 |
·pcDNA3.1 真核表达重组质粒的构建 | 第19-20页 |
·真核表达重组质粒的大量制备 | 第20页 |
·常规细胞培养及转染 | 第20-21页 |
·亚细胞定位观察 | 第21-22页 |
·迁移试验 | 第22页 |
第二章 结果与分析 | 第22-35页 |
·SDF-1α基因的克隆 | 第22-24页 |
·大鼠平滑肌细胞总RNA 的提取 | 第22-23页 |
·RT-PCR | 第23页 |
·目的基因克隆至测序载体 | 第23-24页 |
·酶切鉴定和DNA 测序 | 第24页 |
·测序结果 | 第24页 |
·大鼠SDF-1α基因的序列分析 | 第24-29页 |
·核酸列序及其编码的蛋白列序 | 第24-25页 |
·大鼠SDF-1α基因的染色体定位和Genomic DNA 分析 | 第25-27页 |
·SDF-1α基因的电子表达谱(e-Northern)分析 | 第27页 |
·信号肽分析 | 第27-29页 |
·SDF-1α蛋白的亚细胞定位分析 | 第29-31页 |
·EGFP-C1- SDF-1α重组质粒的构建 | 第29-30页 |
·酶切鉴定结果 | 第30-31页 |
·细胞培养及转染 | 第31页 |
·SDF-1α蛋白对单核细胞的迁移作用 | 第31-35页 |
·重组质粒pcDNA3.1/SDF-1α的构建 | 第31-32页 |
·酶切鉴定结果 | 第32-33页 |
·G418 筛选阳性克隆 | 第33页 |
·RT-PCR验证 | 第33-34页 |
·迁移实验 | 第34-35页 |
讨论 | 第35-37页 |
结论 | 第37-39页 |
·成功克隆了 SD 大鼠 SDF-1α基因 | 第37页 |
·SDF-1α蛋白主要在细胞质中表达 | 第37页 |
·重组 SDF-1α对单核细胞具有明显的趋化作用 | 第37-39页 |
五、综述 | 第39-44页 |
六、硕士期间发表论文 | 第44-45页 |
七、致谢 | 第45页 |