| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1.前言 | 第10-12页 |
| 2.文献综述 | 第12-24页 |
| ·木质素的研究概况 | 第12-13页 |
| ·木质素 | 第12页 |
| ·木质素的微生物降解 | 第12-13页 |
| ·漆酶的研究现状 | 第13-19页 |
| ·漆酶的结构和性质 | 第13-15页 |
| ·漆酶的分子生物学 | 第15-16页 |
| ·漆酶的诱导合成 | 第16-17页 |
| ·不同培养条件对产酶的影响 | 第17-18页 |
| ·漆酶的用途 | 第18-19页 |
| ·基于简并PCR技术的基因克隆 | 第19-21页 |
| ·简并性引物的设计 | 第19-20页 |
| ·简并PCR的反应条件 | 第20页 |
| ·简并PCR的应用 | 第20页 |
| ·简并PCR的局限性 | 第20-21页 |
| ·cDNA末端快速扩增技术(RACE)的研究进展 | 第21-24页 |
| ·RACE技术的基本原理 | 第21页 |
| ·RACE技术的优点与局限 | 第21-22页 |
| ·SMART~(TM) RACE cDNA Amplification Kit的原理 | 第22-24页 |
| 3.滑菇漆酶的诱导产酶 | 第24-36页 |
| ·材料和方法 | 第24-28页 |
| ·菌种 | 第24页 |
| ·原料及药品 | 第24页 |
| ·器材 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-27页 |
| ·滑菇的培养方法 | 第27页 |
| ·粗酶液的制备 | 第27-28页 |
| ·漆酶酶活力的测定 | 第28页 |
| ·结果与讨论 | 第28-34页 |
| ·四种不同培养基对滑菇漆酶产酶的影响 | 第28-29页 |
| ·以D培养基为基础,研究不同碳氮源比例的四种培养基对漆酶产酶的影响 | 第29-30页 |
| ·选择HCHN培养基,研究不同氮源对漆酶产酶的影响 | 第30-31页 |
| ·金属离子对滑菇漆酶产酶的影响 | 第31-34页 |
| ·小结 | 第34-36页 |
| 4.漆酶的粗分离提纯及酶学性质分析 | 第36-47页 |
| ·材料和方法 | 第36-40页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·原料及药品 | 第36页 |
| ·器材 | 第36-37页 |
| ·漆酶活力的测定 | 第37页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第37页 |
| ·分离纯化方法 | 第37-40页 |
| ·酶学特性的初步研究 | 第40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-46页 |
| ·DEAE阴离子交换柱平衡pH条件的选择 | 第40-41页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第41-42页 |
| ·漆酶纯化分离结果 | 第42-43页 |
| ·SDS-PAGE检测纯化效果 | 第43-44页 |
| ·pH对漆酶活性的影响 | 第44-45页 |
| ·温度对漆酶活性的影响 | 第45页 |
| ·温度对漆酶热稳定性的影响 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| 5.滑菇漆酶cDNA基因的分子克隆 | 第47-68页 |
| ·材料与方法 | 第47-53页 |
| ·试剂盒 | 第47页 |
| ·酶及试剂 | 第47页 |
| ·仪器 | 第47-48页 |
| ·培养基 | 第48页 |
| ·菌丝的获取 | 第48页 |
| ·滑菇总RNA的提取 | 第48页 |
| ·mRNA质量的检测 | 第48-49页 |
| ·滑菇漆酶cDNA片段的获得 | 第49-51页 |
| ·RACE法获得滑菇漆酶cDNA的全长 | 第51-53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-67页 |
| ·滑菇总RNA的提取 | 第53-54页 |
| ·滑菇cDNA片段的获得 | 第54-57页 |
| ·5’RACE扩增片段的克隆 | 第57-67页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| 6.滑菇漆酶基因的外源表达 | 第68-82页 |
| ·材料与方法 | 第68-76页 |
| ·待表达的基因 | 第68页 |
| ·试剂盒 | 第68页 |
| ·酶 | 第68页 |
| ·表达体系 | 第68页 |
| ·培养基的配制 | 第68-69页 |
| ·器材 | 第69-70页 |
| ·为漆酶基因引入SfiI,NotI两酶切位点的引物的设计 | 第70页 |
| ·PCR引入SfiI,NotI的酶切位点 | 第70-71页 |
| ·SfiI,NotI分别酶切加入酶切位点的漆酶基因和质粒pPicZaB | 第71页 |
| ·表达载体的构建 | 第71-72页 |
| ·表达载体电转化入Pichia Pastoris | 第72-74页 |
| ·生物反应筛选阳性克隆 | 第74页 |
| ·培养筛选 | 第74页 |
| ·含有漆酶基因的pPICZαB PCR验证 | 第74-75页 |
| ·含有漆酶基因的pPICZαB双酶切验证 | 第75页 |
| ·酵母DNA的提取,PCR验证 | 第75-76页 |
| ·结果与讨论 | 第76-81页 |
| ·质粒小提含漆酶基因的pGEM-TEasy Vector | 第76页 |
| ·含有SfiI,NotI酶切位点的基因的获得 | 第76-77页 |
| ·SfiI,NotI酶切基因 | 第77页 |
| ·SfiI,NotI酶切质粒pPICZαB | 第77-78页 |
| ·连接转化阳性克隆的筛选 | 第78页 |
| ·表达质粒转化酵母KM71H | 第78-79页 |
| ·生物反应筛选转化得到的阳性克隆 | 第79页 |
| ·摇瓶培养筛选电转化所得到的阳性克隆 | 第79页 |
| ·含有漆酶基因的pPICZαB双酶切验证 | 第79-80页 |
| ·验证漆酶基因是否重组到酵母细胞中 | 第80-81页 |
| ·小结 | 第81-82页 |
| 7.总结 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 详细摘要 | 第87-90页 |
