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牛卵母细胞去核方法及体细胞核移植的研究

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-13页
第一章 体细胞核移植的研究进展第13-39页
   ·哺乳动物胚胎细胞核移植的研究进展第13-14页
   ·体细胞核移植的研究进展第14-15页
   ·核移植的程序第15-20页
     ·供体细胞的选择第15-16页
     ·受体细胞的获取和去核第16-17页
     ·细胞核的移植第17-18页
     ·重组胚的激活第18-20页
     ·重组胚的培养和移植第20页
   ·哺乳动物核移植相关机理的研究第20-29页
     ·甲基化和印迹第21-22页
     ·组蛋白乙酰化第22-23页
     ·X 染色体失活第23-24页
     ·端粒第24-25页
     ·MPF 在核质互换中的作用第25-27页
     ·RNA 转录模式与供体核的再程序化第27-29页
   ·影响核移植效率的因素第29-34页
     ·细胞周期同步化对核移植胚的影响第29-30页
     ·卵母细胞成熟质量对核移植的影响第30-33页
     ·去核操作对核移植胚胎的影响第33页
     ·细胞松弛素处理对核移植的影响第33页
     ·激活核移植胚影响第33-34页
     ·核移植胚的体外培养对发育的影响第34页
   ·存在的问题第34-35页
   ·体细胞核移植意义及应用前景第35-38页
     ·治疗性克隆第35-36页
     ·拯救濒危动物第36页
     ·应用于转基因技术第36页
     ·异种器官移植第36-37页
     ·与胚胎干细胞(ES cell)技术相结合的治疗第37-38页
   ·结束语第38-39页
第二章 微卫星DNA 标记与亲子鉴定文献综述部分第39-42页
   ·微卫星 DNA 标记技术第39-40页
     ·微卫星DNA 的结构及其多态性原理第39-40页
     ·微卫星标记标记的特点第40页
   ·微卫星DNA 标记在亲子鉴定中的应用第40-42页
第三章 牛卵泡液对卵母细胞体外成熟及重组胚发育的影响第42-48页
   ·材料和方法第42-44页
     ·材料第42页
     ·卵母细胞体外成熟第42-43页
     ·牛卵泡液的收集第43页
     ·牛卵母细胞的孤雌激活第43页
     ·重构胚的构建第43页
     ·重组胚激活和培养第43-44页
     ·实验设计第44页
     ·数据分析第44页
   ·结果第44-46页
     ·不同直径的卵泡液对卵母细胞成熟及孤雌胚发育的影响第44页
     ·卵泡液浓度对重组胚发育的影响第44-45页
     ·对重组胚囊胚细胞计数第45-46页
   ·讨论第46-47页
   ·小结第47-48页
第四章 牛卵母细胞成熟过程中微管蛋白结构变化初探第48-52页
   ·材料和方法第48-49页
     ·试剂材料第48页
     ·卵母细胞体外成熟第48页
     ·实验分组及免疫组织化学染色第48-49页
   ·结果第49-50页
   ·讨论第50-51页
   ·小结第51-52页
第五章 卵母细胞去核方法的研究第52-58页
   ·材料和方法第52-53页
     ·材料第52页
     ·卵母细胞体外成熟第52页
     ·实验设计第52-53页
     ·数据分析第53页
   ·结果第53-55页
     ·蔗糖显示去核第53页
     ·诱导去核第53-54页
     ·DM 显示去核第54-55页
   ·讨论第55-57页
   ·小结第57-58页
第六章 激活方法对牛核移植胚发育的影响第58-62页
   ·材料和方法第58-59页
     ·卵母细胞的体外成熟第58页
     ·核移植的程序第58页
     ·重组胚的体外培养第58页
     ·实验设计及分组第58-59页
     ·数据分析第59页
   ·结果第59页
   ·讨论第59-61页
   ·小结第61-62页
第七章 供体细胞对重组胚发育的影响第62-67页
   ·材料和方法第62-63页
     ·供体细胞的培养第62页
     ·卵母细胞体外成熟第62-63页
     ·重组胚构建第63页
     ·重组胚的培养第63页
     ·试验设计第63页
     ·数据分析第63页
   ·结果第63-65页
     ·血清饥饿供体细胞对重组胚发育的影响第63-64页
     ·供体细胞传代次数在核移植中的比较第64页
     ·细胞的冷冻保存对重新程序化的影响第64-65页
   ·讨论第65-66页
     ·血清饥饿用于细胞周期同步化在对重组胚发育的影响第65-66页
     ·供体细胞传代次数在核移植中的比较第66页
     ·细胞的冷冻保存对重新程序化的影响第66页
   ·小结第66-67页
第八章 应用微卫星DNA 鉴定体细胞克隆胚胎第67-73页
   ·材料和方法第67-70页
     ·牛基因组DNA 的提取第67页
     ·微卫星引物的设计与合成第67-68页
     ·微卫星DNA 的PCR 反应体系与条件第68-69页
     ·PCR 反应产物的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳第69-70页
     ·图象分析第70页
   ·结果第70-72页
     ·微卫星引物的PCR 扩增结果第70页
     ·PCR 产物的聚丙烯酰胺(PAGE)检测第70-72页
   ·讨论第72页
   ·小结第72-73页
结论第73-74页
参考文献第74-89页
致谢第89-90页
实验胚胎图第90-93页
附录第93-95页
个人简介第95-96页

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