摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-12页 |
第一章 猪瘟研究进展 | 第12-27页 |
·猪瘟的临床特征 | 第12-13页 |
·猪瘟流行病学特性 | 第13-25页 |
·CSFV 的普通流行病学 | 第13-24页 |
·CSFV 的分子流行病学 | 第24-25页 |
·猪瘟病原学 | 第25-27页 |
·猪瘟病毒 | 第25页 |
·猪瘟病毒基因组结构 | 第25-27页 |
第二章 猪瘟病毒E0 基因RT-nested PCR 检测方法的建立 | 第27-34页 |
·材料 | 第27-28页 |
·试验毒株及参考毒株 | 第27页 |
·病料来源 | 第27页 |
·试剂和工具酶 | 第27页 |
·所用仪器及设备 | 第27-28页 |
·引物的设计与合成 | 第28页 |
·方法 | 第28-30页 |
·猪瘟病毒(CSFV )总 RNA 的提取 | 第28页 |
·RT-PCR | 第28-29页 |
·反转录获得第一链cDNA | 第28-29页 |
·CSFV 套式 PCR 一扩 | 第29页 |
·CSFV 套式 PCR 二扩 | 第29页 |
·CSFV 套式PCR 方法特异性试验 | 第29-30页 |
·CSFV 套式 PCR 方法灵敏性试验 | 第30页 |
·CSFV E0 基因套式 PCR 检测方法的应用 | 第30页 |
·结果与分析 | 第30-32页 |
·CSFV 套式PCR 扩增结果 | 第30-31页 |
·CSFV 套式PCR 检测方法特异性试验结果 | 第31-32页 |
·套式 PCR 检测方法灵敏性试验结果 | 第32页 |
·CSFV 套式PCR 对送检病料中CSFV 的检测 | 第32页 |
·讨论 | 第32-33页 |
·CSFV 套式PCR 检测方法的特异性 | 第32页 |
·CSFV 套式 PCR 检测方法敏感性 | 第32-33页 |
·CSFV 套式PCR 检测方法的应用前景 | 第33页 |
·小结 | 第33-34页 |
第三章 RT-nested PCR 检测方法在我国部分省区的猪瘟分子流行病学调查中的应用 | 第34-39页 |
·材料和方法 | 第34-36页 |
·材料 | 第34-35页 |
·病料来源 | 第34页 |
·所用试剂 | 第34-35页 |
·所用仪器 | 第35页 |
·引物的设计与合成 | 第35页 |
·方法 | 第35-36页 |
·CSFV RNA 的提取 | 第35页 |
·反转录获得第一链cDNA | 第35-36页 |
·CSFV Nested PCR 第1 次扩增 | 第36页 |
·CSFV Nested PCR 第2 次扩增 | 第36页 |
·试验结果 | 第36-37页 |
·病料中CSFV 的检测结果 | 第36-37页 |
·讨论与分析 | 第37页 |
·猪瘟的实验室诊断 | 第37页 |
·我国猪瘟的流行分布特点 | 第37页 |
·小结 | 第37-39页 |
第四章 我国部分省区猪瘟E0 基因分子流行病学研究 | 第39-65页 |
·实验材料 | 第39-40页 |
·病料来源及处理 | 第39页 |
·载体和菌株 | 第39页 |
·试剂和工具酶 | 第39-40页 |
·主要仪器 | 第40页 |
·所用试剂的配制 | 第40页 |
·引物设计与合成 | 第40页 |
·实验方法 | 第40-44页 |
·病料的处理 | 第40-41页 |
·病料中总RNA 的提取、反转录获得cDNA 及 PCR 扩增 E2 基因片段 | 第41页 |
·套式 PCR 产物的鉴定 | 第41页 |
·纯化回收cDNA 片段 | 第41页 |
·纯化产物与pMD 18-T Vector 连接 | 第41页 |
·感受态细胞的制备(CaCL2 法) | 第41-42页 |
·连接产物的转化 | 第42页 |
·重组质粒的提取 | 第42-43页 |
·重组质粒的PCR 鉴定 | 第43页 |
·重组质粒的酶切鉴定 | 第43页 |
·重组质粒的测序分析 | 第43页 |
·分离毒株 E0 全基因核苷酸序列及其推导氨基酸序列的变异分析 | 第43-44页 |
·E0 基因系统发生树和各流行毒株的基因分型 | 第44页 |
·分离毒株 E0 蛋白的 RNase 的催化活性位点分析 | 第44页 |
·本研究分离毒株E0 蛋白的特性分析 | 第44页 |
·结果 | 第44-64页 |
·E0 全基因的扩增 | 第44-45页 |
·E0 重组质粒的鉴定 | 第45页 |
·E0 全基因序列分析 | 第45-57页 |
·各省流行毒株 E0 序列及 HCLV 的核苷酸同源性 | 第46-52页 |
·各省流行毒株 E0 序列及 HCLV 的氨基酸同源性 | 第52-57页 |
·各省流行毒株 E0 全基因系统进化树和基因分型 | 第57-59页 |
·各省流行毒株分离毒株E0 蛋白的RNase 的催化活性位点分析 | 第59-64页 |
·结果与讨论 | 第64-65页 |
结论 | 第65-66页 |
参考文献 | 第66-73页 |
致谢 | 第73-74页 |
作者简介 | 第74页 |