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中国部分省区猪瘟E0基因的分子流行病学研究

摘要第1-5页
Abstract第5-12页
第一章 猪瘟研究进展第12-27页
   ·猪瘟的临床特征第12-13页
   ·猪瘟流行病学特性第13-25页
     ·CSFV 的普通流行病学第13-24页
     ·CSFV 的分子流行病学第24-25页
   ·猪瘟病原学第25-27页
     ·猪瘟病毒第25页
     ·猪瘟病毒基因组结构第25-27页
第二章 猪瘟病毒E0 基因RT-nested PCR 检测方法的建立第27-34页
   ·材料第27-28页
     ·试验毒株及参考毒株第27页
     ·病料来源第27页
     ·试剂和工具酶第27页
     ·所用仪器及设备第27-28页
     ·引物的设计与合成第28页
   ·方法第28-30页
     ·猪瘟病毒(CSFV )总 RNA 的提取第28页
     ·RT-PCR第28-29页
       ·反转录获得第一链cDNA第28-29页
       ·CSFV 套式 PCR 一扩第29页
       ·CSFV 套式 PCR 二扩第29页
     ·CSFV 套式PCR 方法特异性试验第29-30页
     ·CSFV 套式 PCR 方法灵敏性试验第30页
     ·CSFV E0 基因套式 PCR 检测方法的应用第30页
   ·结果与分析第30-32页
     ·CSFV 套式PCR 扩增结果第30-31页
     ·CSFV 套式PCR 检测方法特异性试验结果第31-32页
     ·套式 PCR 检测方法灵敏性试验结果第32页
     ·CSFV 套式PCR 对送检病料中CSFV 的检测第32页
   ·讨论第32-33页
     ·CSFV 套式PCR 检测方法的特异性第32页
     ·CSFV 套式 PCR 检测方法敏感性第32-33页
     ·CSFV 套式PCR 检测方法的应用前景第33页
   ·小结第33-34页
第三章 RT-nested PCR 检测方法在我国部分省区的猪瘟分子流行病学调查中的应用第34-39页
   ·材料和方法第34-36页
     ·材料第34-35页
       ·病料来源第34页
       ·所用试剂第34-35页
       ·所用仪器第35页
       ·引物的设计与合成第35页
     ·方法第35-36页
       ·CSFV RNA 的提取第35页
       ·反转录获得第一链cDNA第35-36页
       ·CSFV Nested PCR 第1 次扩增第36页
       ·CSFV Nested PCR 第2 次扩增第36页
   ·试验结果第36-37页
     ·病料中CSFV 的检测结果第36-37页
   ·讨论与分析第37页
     ·猪瘟的实验室诊断第37页
     ·我国猪瘟的流行分布特点第37页
   ·小结第37-39页
第四章 我国部分省区猪瘟E0 基因分子流行病学研究第39-65页
   ·实验材料第39-40页
     ·病料来源及处理第39页
     ·载体和菌株第39页
     ·试剂和工具酶第39-40页
     ·主要仪器第40页
     ·所用试剂的配制第40页
     ·引物设计与合成第40页
   ·实验方法第40-44页
     ·病料的处理第40-41页
     ·病料中总RNA 的提取、反转录获得cDNA 及 PCR 扩增 E2 基因片段第41页
     ·套式 PCR 产物的鉴定第41页
     ·纯化回收cDNA 片段第41页
     ·纯化产物与pMD 18-T Vector 连接第41页
     ·感受态细胞的制备(CaCL2 法)第41-42页
     ·连接产物的转化第42页
     ·重组质粒的提取第42-43页
     ·重组质粒的PCR 鉴定第43页
     ·重组质粒的酶切鉴定第43页
     ·重组质粒的测序分析第43页
     ·分离毒株 E0 全基因核苷酸序列及其推导氨基酸序列的变异分析第43-44页
     ·E0 基因系统发生树和各流行毒株的基因分型第44页
     ·分离毒株 E0 蛋白的 RNase 的催化活性位点分析第44页
     ·本研究分离毒株E0 蛋白的特性分析第44页
   ·结果第44-64页
     ·E0 全基因的扩增第44-45页
     ·E0 重组质粒的鉴定第45页
     ·E0 全基因序列分析第45-57页
       ·各省流行毒株 E0 序列及 HCLV 的核苷酸同源性第46-52页
       ·各省流行毒株 E0 序列及 HCLV 的氨基酸同源性第52-57页
     ·各省流行毒株 E0 全基因系统进化树和基因分型第57-59页
     ·各省流行毒株分离毒株E0 蛋白的RNase 的催化活性位点分析第59-64页
   ·结果与讨论第64-65页
结论第65-66页
参考文献第66-73页
致谢第73-74页
作者简介第74页

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