| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 论文创新点 | 第14-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-33页 |
| 第一章 猪圆环病毒研究进展 | 第15-27页 |
| 1.PCV分类地位 | 第15-16页 |
| 2.PCV生物学特性 | 第16页 |
| 3.PCV的分子生物学特征 | 第16-20页 |
| ·PCV基因组结构 | 第16-18页 |
| ·PCV编码蛋白 | 第18-20页 |
| 4.PCV2致病机理 | 第20-22页 |
| 5.PCV2疫苗研究 | 第22页 |
| 参考文献 | 第22-27页 |
| 第二章 细胞因子基因佐剂研究进展 | 第27-33页 |
| 1.IL2 | 第27-28页 |
| ·IL2基因佐剂与细胞免疫 | 第27-28页 |
| ·IL2基因佐剂与体液免疫 | 第28页 |
| 2.IL4 | 第28-30页 |
| ·IL4基因佐剂与细胞免疫 | 第29页 |
| ·IL4基因佐剂与体液免疫 | 第29-30页 |
| 3.IFN-γ | 第30页 |
| ·IFN-γ基因佐剂与细胞免疫 | 第30页 |
| ·IFN-γ基因佐剂与体液免疫 | 第30页 |
| 4.结语 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-33页 |
| 第二部分 研究内容 | 第33-123页 |
| 第一章 PCV2荧光PCR方法的建立与猪的实验性感染 | 第33-49页 |
| 1.材料与方法 | 第34-37页 |
| ·实验动物、病毒、细胞、血清与试剂 | 第34页 |
| ·血清PCV2抗体IFA检测 | 第34-35页 |
| ·血清PCV2抗体的ELISA检测 | 第35页 |
| ·检测PCV2核酸的荧光定量PCR(qPCR) | 第35-36页 |
| ·PCV2对猪的人工感染 | 第36-37页 |
| 2.结果 | 第37-45页 |
| ·猪血清样本PCV2抗体的ELISA和IFA检测 | 第37-39页 |
| ·qPCR引物特异性检测 | 第39页 |
| ·标准模板的测定及融解曲线 | 第39-40页 |
| ·荧光PCR检测病毒的灵敏度确定 | 第40-41页 |
| ·血清荧光PCR阴性标准的制定 | 第41页 |
| ·感染猪血清中PCV2核酸的动态变化 | 第41-42页 |
| ·感染猪组织中PCV2核酸载量测定 | 第42-45页 |
| 3.讨论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 第二章 PCV2 ORF2的真核表达质粒和Cap蛋白诱导的小鼠的免疫反应类型 | 第49-71页 |
| 1.材料与方法 | 第50-55页 |
| ·载体、病毒、细胞及主要试剂 | 第50页 |
| ·真核表达载体构建 | 第50-51页 |
| ·PK15细胞转染及IFA检测 | 第51页 |
| ·质粒及原核蛋白的制备及纯化 | 第51-52页 |
| ·试验设计 | 第52-53页 |
| ·淋巴细胞增殖试验 | 第53-54页 |
| ·小鼠脾细胞的流式细胞仪检测 | 第54页 |
| ·ELISA检测特异性抗体 | 第54页 |
| ·PCV2中和抗体的检测 | 第54页 |
| ·组织病理学及病毒血症评估 | 第54-55页 |
| ·数据分析 | 第55页 |
| 2.结果 | 第55-64页 |
| ·载体构建 | 第55-56页 |
| ·转染细胞的IFA检测 | 第56页 |
| ·PCV2 Cap特异性细胞免疫反应 | 第56-57页 |
| ·PCV2 Cap特异性总IgG抗体水平动态变化 | 第57-58页 |
| ·PCV2 Cap特异性抗体亚型动态变化 | 第58-61页 |
| ·PCV2中和抗体 | 第61页 |
| ·PCV2中和抗体与Cap抗体亚型之间的相关性 | 第61-62页 |
| ·组织病理学及病毒血症评估 | 第62-64页 |
| 3.讨论 | 第64-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 第三章 ORF1,3和4编码产物对ORF2编码产物诱导小鼠免疫应答能力的影响 | 第71-100页 |
| 1.材料与方法 | 第72-79页 |
| ·载体、病毒、细胞及主要试剂 | 第72-73页 |
| ·引物设计 | 第73页 |
| ·真核表达载体构建 | 第73-75页 |
| ·重组质粒在PK15细胞中的表达验证 | 第75-76页 |
| ·质粒制备、动物分组及试验设计 | 第76-77页 |
| ·淋巴细胞增殖试验 | 第77页 |
| ·小鼠脾细胞的流式细胞仪检测 | 第77-78页 |
| ·ELISA检测特异性抗体 | 第78页 |
| ·PCV2中和抗体的检测 | 第78页 |
| ·组织病理学及病毒血症评估 | 第78-79页 |
| ·数据分析 | 第79页 |
| 2.结果 | 第79-93页 |
| ·真核表达载体构建 | 第79-82页 |
| ·重组真核质粒在PK15细胞中的表达验证 | 第82-84页 |
| ·Cap蛋白特异性细胞免疫反应 | 第84-85页 |
| ·Cap蛋白特异性总IgG抗体变化 | 第85-86页 |
| ·Cap蛋白特异性IgG抗体亚型 | 第86-88页 |
| ·PCV2 ORF1、3和4蛋白特异性抗体反应 | 第88-91页 |
| ·PCV2中和抗体 | 第91页 |
| ·组织病理学及病毒血症评估 | 第91-93页 |
| 3.讨论 | 第93-97页 |
| ·ORF1对ORF2基因免疫的影响 | 第93-94页 |
| ·ORF3对ORF2基因免疫的影响 | 第94-95页 |
| ·ORF4对ORF2基因免疫的影响 | 第95-96页 |
| ·关于抗体亚型 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-100页 |
| 第四章 猪细胞因子基因对PCV2 ORF2基因编码产物诱导的小鼠免疫应答能力的影响 | 第100-123页 |
| 1.材料与方法 | 第101-107页 |
| ·试验动物及主要试剂 | 第101页 |
| ·猪淋巴细胞总RNA的抽提 | 第101-102页 |
| ·猪细胞因子基因的克隆 | 第102-104页 |
| ·真核表达载体构建 | 第104页 |
| ·质粒制备、动物分组及试验设计 | 第104-105页 |
| ·淋巴细胞增殖试验 | 第105-106页 |
| ·小鼠脾细胞的流式细胞仪检测 | 第106页 |
| ·ELISA检测特异性抗体 | 第106页 |
| ·PCV2中和抗体的检测 | 第106页 |
| ·组织病理学及病毒血症评估 | 第106-107页 |
| ·数据分析 | 第107页 |
| 2.结果 | 第107-118页 |
| ·猪IL2基因克隆及真核表达载体构建 | 第107-109页 |
| ·猪IL4基因克隆及真核表达载体构建 | 第109-110页 |
| ·猪IFN-γ基因克隆及真核表达载体构建 | 第110-112页 |
| ·PCV2 Cap特异性细胞免疫反应 | 第112-113页 |
| ·抗PCV2 Cap蛋白总IgG抗体水平的动态变化 | 第113-114页 |
| ·抗PCV2 Cap蛋白IgG1和IgG2a抗体水平的动态变化 | 第114-116页 |
| ·PCV2中和抗体 | 第116页 |
| ·组织病理学及病毒血症评估 | 第116-118页 |
| 3.讨论 | 第118-120页 |
| 参考文献 | 第120-123页 |
| 第三部分 附录 | 第123-131页 |
| 附录A 常用试剂及仪器 | 第123-125页 |
| 附录B 常用缓冲液及培养基配方 | 第125-130页 |
| 附录C 攻博期间发表或录用的学术论文 | 第130-131页 |
| 致谢 | 第131页 |
