| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-35页 |
| ·蜡梅(Chimonanthus praecox (L.) Link)研究与利用 | 第14-20页 |
| ·名称与种属关系辨析 | 第14-16页 |
| ·品种分类与选育 | 第16-17页 |
| ·植物学特征 | 第17-18页 |
| ·生理生化研究 | 第18-19页 |
| ·应用 | 第19-20页 |
| ·基因表达序列标签(EST)及其发展 | 第20-27页 |
| ·EST与EST技术简介 | 第20-21页 |
| ·EST与EST技术的发展 | 第21-23页 |
| ·EST在基因组学研究中的应用 | 第23-27页 |
| ·植物凝集素及其抗虫基因工程研究进展 | 第27-35页 |
| ·植物凝集素的命名 | 第27页 |
| ·植物凝集素的分布 | 第27-28页 |
| ·植物凝集素的类型 | 第28-29页 |
| ·植物凝集素的稳定性 | 第29-30页 |
| ·植物凝集素的功能 | 第30-33页 |
| ·植物凝集素在植物抗虫基因工程研究中的应用 | 第33-35页 |
| 第2章 引言 | 第35-37页 |
| 第3章 蜡梅花cDNA文库的构建 | 第37-53页 |
| ·技术路线 | 第37页 |
| ·材料 | 第37-39页 |
| ·植物材料 | 第37页 |
| ·菌株 | 第37-38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器设备 | 第38页 |
| ·自配的主要试剂与培养基 | 第38-39页 |
| ·方法 | 第39-47页 |
| ·蜡梅花(芽)的采集与处理 | 第39页 |
| ·蜡梅花(芽)总RNA提取 | 第39页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测RNA | 第39-40页 |
| ·紫外分光光度法测定RNA | 第40页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第40页 |
| ·LD-PCR扩增第一链cDNA合成双链cDNA | 第40-41页 |
| ·cDNA的蛋白酶K处理 | 第41页 |
| ·cDNA的SfiI酶切 | 第41页 |
| ·CHROMA SPIN-400对cDNA进行分级分离 | 第41-42页 |
| ·全长cDNA的沉淀浓缩 | 第42-43页 |
| ·cDNA与载体λTriplEx2连接 | 第43页 |
| ·连接产物—重组λ载体的包装 | 第43页 |
| ·原始文库的滴度测定 | 第43-44页 |
| ·原始文库重组率及插入片段大小的确定 | 第44页 |
| ·原始文库的扩增 | 第44-45页 |
| ·扩增文库的滴度测定 | 第45-46页 |
| ·蜡梅基因组DNA提取 | 第46页 |
| ·扩增文库覆盖度的检测 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-50页 |
| ·RNA提取 | 第47页 |
| ·文库cDNA第一链的LD-PCR | 第47-48页 |
| ·CHROMA SPIN-400对cDNA分级分离 | 第48页 |
| ·cDNA文库的质量评价 | 第48-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| ·样品采集的代表性 | 第50-51页 |
| ·mRNA质量 | 第51-52页 |
| ·cDNA文库质量 | 第52页 |
| ·小结 | 第52-53页 |
| 第4章 EST序列测定及初步分析 | 第53-87页 |
| ·技术路线 | 第53-54页 |
| ·材料 | 第54页 |
| ·蜡梅花cDNA文库 | 第54页 |
| ·菌株 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54页 |
| ·自配的主要试剂与培养基 | 第54页 |
| ·方法 | 第54-58页 |
| ·独立噬菌斑的挑取 | 第54页 |
| ·质粒转化宿主菌BM25.8的准备 | 第54-55页 |
| ·噬菌体向质粒的转化 | 第55页 |
| ·菌液PCR筛选阳性克隆并测序 | 第55页 |
| ·拼接前处理(pre-processing) | 第55页 |
| ·拼接(assembly) | 第55页 |
| ·同源性预比较 | 第55-56页 |
| ·最高频率出现的脂转移蛋白cDNA的表达 | 第56页 |
| ·序列格式转化及GenBank数据库提交 | 第56页 |
| ·EST序列相似性比较及注释结果的功能分类 | 第56-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-83页 |
| ·测序结果与有效EST的获得 | 第58-59页 |
| ·蜡梅LTP基因的表达分析 | 第59页 |
| ·序列提交 | 第59-61页 |
| ·片段重叠群分析及基因表达丰度分析 | 第61-62页 |
| ·EST序列相似性比较分析与功能注释 | 第62-72页 |
| ·基因GO分类结果 | 第72-74页 |
| ·蜡梅基因的生物学功能分类 | 第74-83页 |
| ·讨论 | 第83-86页 |
| ·EST功能注释与分类 | 第83-84页 |
| ·数码杂交 | 第84-85页 |
| ·蜡梅开花过程基因表达概况 | 第85-86页 |
| ·小结 | 第86-87页 |
| 第5章 蜡梅凝集素基因的克隆及对烟草的转化 | 第87-117页 |
| ·技术路线 | 第87页 |
| ·材料 | 第87-89页 |
| ·植物材料 | 第87页 |
| ·菌株与载体 | 第87-88页 |
| ·主要生化试剂 | 第88页 |
| ·常用溶液配方 | 第88-89页 |
| ·基本培养基配方 | 第89页 |
| ·方法 | 第89-102页 |
| ·蜡梅Cplectin基因的克隆 | 第89-90页 |
| ·Southern杂交 | 第90-95页 |
| ·蜡梅Cplectin植物表达载体构建 | 第95-99页 |
| ·Cplectin基因导入烟草及转化植株的获得 | 第99-101页 |
| ·蜡梅Cplectin基因功能初步验证-抗虫性实验 | 第101-102页 |
| ·结果与分析 | 第102-113页 |
| ·Cplectin基因的cDNA序列特征 | 第102-104页 |
| ·Cplectin基因编码蛋白性质分析 | 第104-106页 |
| ·蜡梅Cplectin基因全长cDNA对应的基因组DNA序列中内含子的检测 | 第106-107页 |
| ·蜡梅Cplectin基因的Southern杂交结果 | 第107-108页 |
| ·植物表达载体pBI-Lec的构建 | 第108-109页 |
| ·蜡梅Cplectin基因导入烟草及转化植株的获得 | 第109-111页 |
| ·Cplectin基因抗虫性检测 | 第111-113页 |
| ·讨论 | 第113-115页 |
| ·Cplectin的结构特点 | 第113-114页 |
| ·转Cplectin基因的抗虫试验 | 第114页 |
| ·植物凝集素用于植物抗虫基因工程 | 第114-115页 |
| ·小结 | 第115-117页 |
| ·蜡梅Cplectin基因的克隆 | 第115-116页 |
| ·蜡梅Cplectin基因表达载体构建及转基因烟草的获得 | 第116页 |
| ·转蜡梅Cplectin基因烟草的抗虫性 | 第116-117页 |
| 第6章 总结 | 第117-119页 |
| ·主要结论 | 第117页 |
| ·主要创新点 | 第117-118页 |
| ·本论文主要不足 | 第118页 |
| ·进一步研究设想 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-127页 |
| 附录 | 第127-128页 |
| 缩略词 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129页 |
