猪白细胞介素2的巴斯德毕赤酵母表达及活性测定
| 摘要 | 第1-4页 |
| SUMMARY | 第4-9页 |
| 第一篇 文献综述 | 第9-27页 |
| 第一章 白细胞介素2 的研究概况 | 第9-20页 |
| 1 分类和理化特性 | 第10页 |
| 2 IL-2 基因克隆 | 第10-11页 |
| 3 结构与功能 | 第11-12页 |
| 4 生物学活性 | 第12页 |
| 5 受体 | 第12-14页 |
| 6 应用 | 第14-16页 |
| ·作为免疫治疗剂使用 | 第14页 |
| ·构建新型基因工程疫苗 | 第14-15页 |
| ·作为免疫增强剂使用 | 第15页 |
| ·临床治疗 | 第15-16页 |
| ·IL-2 用于恶性肿瘤治疗 | 第15-16页 |
| ·IL-2 用于治疗感染性疾病 | 第16页 |
| ·IL-2 用于镇痛 | 第16页 |
| ·IL-2 的其它临床应用 | 第16页 |
| ·疾病诊断指标 | 第16页 |
| 参考文献 | 第16-20页 |
| 第二章 巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 | 第20-27页 |
| 1. 巴斯德毕赤酵母菌株 | 第20-21页 |
| 2. Pichia pastoris表达载 | 第21-22页 |
| ·启动子 | 第21页 |
| ·选择标记 | 第21页 |
| ·信号肽序列 | 第21页 |
| ·表达载体的种类 | 第21-22页 |
| 3. 基因整合 | 第22页 |
| 4. 重组蛋白翻译后修饰 | 第22页 |
| 5. 影响外源基因表达的因素 | 第22-24页 |
| ·外源基因自身的特性 | 第22-23页 |
| ·表达框染色体整合位点 | 第23页 |
| ·宿主菌的甲醇利用表型 | 第23页 |
| ·基因剂量 | 第23页 |
| ·分泌信号 | 第23页 |
| ·发酵系统培养 | 第23-24页 |
| ·产物稳定性 | 第24页 |
| 6. 结语 | 第24页 |
| 参考文献 | 第24-27页 |
| 第二篇 研究报告 | 第27-43页 |
| 猪白细胞介素2 的巴斯德毕赤酵母表达及活性测定 | 第27-43页 |
| 1 材料与方法 | 第29-35页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·实验动物及实验用载体、宿主菌 | 第29页 |
| ·酶和试剂 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·引物设计 | 第29-30页 |
| ·PoIL-2 基因扩增引物 | 第29页 |
| ·PoIL-2 成熟蛋白基因片段扩增引物 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-35页 |
| ·猪外周血淋巴细胞的分离和培养 | 第30页 |
| ·猪外周血淋巴细胞总RNA 的提取 | 第30页 |
| ·PoIL-2 cDNA 的克隆与测序 | 第30-32页 |
| ·PoIL-2 cDNA 第一条链的合成 | 第30页 |
| ·PoIL-2 cDNA 双链的获得 | 第30页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第30-31页 |
| ·PCR 产物与pMD18-T 载体的连接 | 第31页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·将连接产物转化DH5α感受态细胞 | 第31页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| ·PoIL-2 成熟蛋白基因真核表达载体的构建 | 第32页 |
| ·PoIL-2 成熟蛋白基因片段的扩增 | 第32页 |
| ·表达载体与目的 DNA 片段的连接 | 第32页 |
| ·重组表达载体的宿主菌转化 | 第32页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第32页 |
| ·重组表达载体电转化酵母菌 | 第32-33页 |
| ·重组表达载体的制备 | 第32-33页 |
| ·重组表达载体的线性化 | 第33页 |
| ·感受态酵母细胞的制备 | 第33页 |
| ·重组表达载体的酵母菌电转化 | 第33页 |
| ·重组酵母菌株的筛选 | 第33-34页 |
| ·重组酵母菌PCR鉴定引物的设计与合成 | 第33-34页 |
| ·重组酵母菌株的PCR 筛选 | 第34页 |
| ·重组酵母菌株生长表型的鉴定 | 第34页 |
| ·重组酵母菌的诱导表达及其表达产物鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组酵母菌的诱导表达 | 第34页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE 鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组猪IL-2 的生物学活性测定 | 第35页 |
| ·重组酵母菌表达产物的初步处理 | 第35页 |
| ·猪淋巴细胞应答细胞的制备 | 第35页 |
| ·重组猪白细胞介素2 对猪淋巴细胞的活性测定 | 第35页 |
| 2 结果 | 第35-38页 |
| ·猪白细胞介素2 基因的扩增结果 | 第35-36页 |
| ·阳性重组质粒的酶切鉴定 | 第36页 |
| ·阳性重组质粒的测序结果比较 | 第36页 |
| ·猪白细胞介素2 成熟蛋白基因片段的扩增结果 | 第36页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第36页 |
| ·阳性重组酵母菌株的鉴定 | 第36-37页 |
| ·阳性工程菌的诱导表达 | 第37页 |
| ·重组猪IL-2的生物学活性 | 第37-38页 |
| 3 讨论 | 第38-40页 |
| 4 结论 | 第40页 |
| 参考文献 | 第40-43页 |
| 附录 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 作者简介 | 第45-46页 |
| 导师简介 | 第46-47页 |
