| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-29页 |
| 1 禽传染性支气管炎研究进展 | 第12-29页 |
| ·IBV的病原学特征 | 第12-14页 |
| ·病原分类 | 第12-13页 |
| ·形态学 | 第13页 |
| ·IBV的理化性质 | 第13页 |
| ·生物学特性 | 第13-14页 |
| ·IBV的分子生物学特征 | 第14-20页 |
| ·IBV的基因组结构 | 第14-15页 |
| ·IBV的结构蛋白和功能 | 第15-18页 |
| ·IBV遗传与变异 | 第18-20页 |
| ·传染性支气管炎的流行病学和致病机理 | 第20-21页 |
| ·IBV的流行病学 | 第20页 |
| ·IB的临床症状和病理变化 | 第20-21页 |
| ·传染性支气管炎检测方法的研究进展 | 第21-26页 |
| ·IBV的分离培养鉴定 | 第21页 |
| ·血清学检测技术 | 第21-24页 |
| ·分子生物学检测技术 | 第24-26页 |
| ·传染性支气管炎疫苗的研究进展 | 第26-29页 |
| ·弱毒疫苗和灭活疫苗 | 第26页 |
| ·新型基因工程疫苗 | 第26-28页 |
| ·其它的疫苗 | 第28-29页 |
| 第二章 传染性支气管炎病毒纤突蛋白基因和核蛋白基因克隆与表达 | 第29-49页 |
| 1 研究目的与意义 | 第29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-39页 |
| ·试验材料 | 第29-31页 |
| ·病毒、质粒及菌株 | 第29页 |
| ·酶及主要试剂 | 第29-30页 |
| ·血清 | 第30-31页 |
| ·主要溶液的配制 | 第31-32页 |
| ·抗生素类 | 第31页 |
| ·细菌培养基 | 第31页 |
| ·质粒抽提相关溶液 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液 | 第31-32页 |
| ·Western blot相关溶液 | 第32页 |
| ·表达提取纯化表达蛋白的相关溶液 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-39页 |
| ·传染性支气管炎病毒的增殖鉴定与纯化(殷震等，1997) | 第32-33页 |
| ·病毒 RNA的提取 | 第33页 |
| ·引物设计 | 第33页 |
| ·RT-PCR反应体系 | 第33-34页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第34-35页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第35页 |
| ·感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第35页 |
| ·质粒的转化 | 第35页 |
| ·质粒的制备 | 第35-36页 |
| ·序列测定 | 第36页 |
| ·DNA重组技术(DNA酶切、连接) | 第36-37页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第37页 |
| ·大肠杆菌 BL21(DE3)的诱导表达 | 第37页 |
| ·重组蛋白的表达提取 | 第37页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| ·蛋白浓度的确定 | 第38页 |
| ·表达蛋白SDS-PAGE分析和 Western-blot鉴定 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-46页 |
| ·基因的克隆与鉴定 | 第39-40页 |
| ·基因的 RT-PCR扩增结果 | 第39页 |
| ·目的片段的克隆及鉴定 | 第39-40页 |
| ·序列测定与分析 | 第40-43页 |
| ·序列测定及同源性分析 | 第40页 |
| ·推导氨基酸序列分析 | 第40-43页 |
| ·S1基因的缺失修饰 | 第43页 |
| ·表达载体的构建与鉴定 | 第43-44页 |
| ·表达产物的纯化和 Western-blot鉴定 | 第44-46页 |
| ·S1蛋白、的表达及 SDS-PAGE分析 | 第44页 |
| ·NP蛋白的 SDS-PAGE分析及 Western-blot鉴定 | 第44-46页 |
| ·NP蛋白的纯化 | 第46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| ·RNA的提取 | 第46-47页 |
| ·基因的测序与分析 | 第47页 |
| ·目的基因的表达 | 第47-48页 |
| ·表达产物的纯化 | 第48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 第三章 IBV抗体间接 ELISA检测方法的建立及初步应用 | 第49-62页 |
| 1 研究目的和意义 | 第49页 |
| 2 材料与方法 | 第49-53页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·生物性材料 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·ELISA相关溶液的配制 | 第49-50页 |
| ·主要实验器材 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-53页 |
| ·重组 NP蛋白的大量制备 | 第50-51页 |
| ·抗原最佳包被浓度和阴阳性血清最佳稀释度的确定(方阵滴定) | 第51页 |
| ·酶标二抗的最佳工作浓度的确定 | 第51页 |
| ·细菌裂解液的使用 | 第51页 |
| ·NP-ELISA操作步骤 | 第51页 |
| ·ELISA阴阳性界限的确定(蒋成淦，1984) | 第51-52页 |
| ·交叉性试验 | 第52页 |
| ·阻断试验 | 第52页 |
| ·重复性试验 | 第52页 |
| ·特异性、敏感性与符合率试验 | 第52页 |
| ·ELISA的临床应用 | 第52-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-58页 |
| ·抗原最佳包被浓度和阴阳性血清最佳稀释度的确定(方阵滴定) | 第53页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第53页 |
| ·细菌裂解液的应用 | 第53页 |
| ·ELISA阴阳性界限的确定 | 第53-54页 |
| ·交叉性试验 | 第54页 |
| ·阻断试验 | 第54页 |
| ·重复性试验 | 第54-55页 |
| ·特异性、敏感性与符合率试验 | 第55-56页 |
| ·ELISA的临床应用 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-61页 |
| ·诊断抗原的选择 | 第58-59页 |
| ·检测方法的选择 | 第59页 |
| ·试剂的选择 | 第59页 |
| ·细菌裂解液的使用 | 第59-60页 |
| ·酶标二抗的选择和最佳工作浓度的确定 | 第60页 |
| ·判断标准的确立 | 第60页 |
| ·特异性、敏感性与符合率 | 第60-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
