摘要 | 第1-4页 |
Abstract | 第4-12页 |
第一章 文献综述 | 第12-63页 |
·海绵天然产物 | 第12-15页 |
·药源材料——海绵的获取方法 | 第15-22页 |
·方法一:捕捞野生海绵 | 第15-16页 |
·方法二:海绵的水产养殖 | 第16-17页 |
·方法三:海绵块的实验室养殖 | 第17-18页 |
·方法四:活性化合物的化学合成及半合成 | 第18页 |
·方法五:基因工程技术 | 第18-19页 |
·方法六:微生物发酵 | 第19-20页 |
·方法七:海绵细胞团与海绵细胞培养 | 第20-22页 |
·海绵细胞生物学研究概况 | 第22-27页 |
·海绵在动物界的位置 | 第22-23页 |
·成年海绵中主要的细胞类型 | 第23页 |
·海绵的生殖 | 第23-27页 |
·无性生殖方式 | 第24-26页 |
·海绵有性生殖和发育 | 第26-27页 |
·海绵细胞体外培养的生物学意义 | 第27页 |
·海绵细胞体外培养研究进展 | 第27-33页 |
·海绵细胞体外培养研究概况 | 第27-30页 |
·海绵细胞体外增殖培养条件的研究 | 第30-33页 |
·海绵全能干细胞——原细胞研究概况 | 第33-49页 |
·原细胞的生物学特性 | 第33-35页 |
·原细胞分化相关标志研究 | 第35-38页 |
·原细胞的分化及其调控研究 | 第38-42页 |
·原细胞分离纯化方法研究 | 第42-45页 |
·哺乳动物胚胎干细胞的分离纯化方法 | 第42-44页 |
·海绵原细胞的分离纯化方法研究 | 第44-45页 |
·原细胞增殖和分化终末细胞凋亡间的调谐机制 | 第45-47页 |
·原细胞增殖及其潜力的检测方法研究 | 第47-49页 |
·海绵细胞体外培养的几个主要问题 | 第49-52页 |
·海绵细胞类型的准确鉴别 | 第49页 |
·海绵细胞体外培养对象的选择和分离纯化方法 | 第49-50页 |
·海绵细胞体外培养形式 | 第50页 |
·海绵细胞间相互作用研究 | 第50-51页 |
·海绵细胞专用培养基的研究 | 第51页 |
·海绵细胞与其相关微生物的关系 | 第51-52页 |
·海绵胚胎和幼体的发育过程 | 第52页 |
·本课题研究思路 | 第52-53页 |
参考文献 | 第53-63页 |
第二章 繁茂膜海绵原细胞的鉴别 | 第63-79页 |
·实验材料 | 第63-64页 |
·实验方法 | 第64-67页 |
·海绵细胞形态鉴别 | 第64-66页 |
·海绵的组织结构——石腊切片制备及 H&E 染色 | 第64-65页 |
·活体海绵细胞在光镜下的形态特征 | 第65页 |
·海绵组织透射电镜切片的制备及观察 | 第65-66页 |
·海绵细胞增殖活性检测 | 第66-67页 |
·BrdU摄取法 | 第66-67页 |
·海绵细胞PCNA的检测 | 第67页 |
·实验结果与讨论 | 第67-77页 |
·繁茂膜海绵组织结构特征 | 第67-68页 |
·不同类型海绵细胞光镜下特征 | 第68-71页 |
·不同类型海绵细胞电镜下特征 | 第71-74页 |
·海绵细胞摄取BrdU检测 | 第74-75页 |
·海绵细胞表达 PCNA 检测 | 第75-77页 |
·小结 | 第77-78页 |
参考文献 | 第78-79页 |
第三章 繁茂膜海绵原细胞的分离纯化 | 第79-106页 |
·实验材料 | 第79-80页 |
·实验方法 | 第80-86页 |
·海绵组织离散——制备混合海绵细胞 | 第80-81页 |
·原细胞的富集 | 第81-83页 |
·差速离心 | 第81页 |
·选择性聚集 | 第81页 |
·差速黏附 | 第81-82页 |
·密度梯度离心 | 第82-83页 |
·原细胞的计数和活性检测 | 第83-85页 |
·原细胞的光镜计数 | 第83页 |
·BrdU(5 溴-2 脱氧-尿嘧啶)标记及免疫组化染色 | 第83-84页 |
·PCNA法检测增殖性海绵细胞 | 第84页 |
·海绵细胞端粒酶活性检测 | 第84-85页 |
·PCNA特异性标记原细胞方法的验证 | 第85-86页 |
·实验结果与讨论 | 第86-103页 |
·原细胞的富集 | 第86-98页 |
·差速离心 | 第86-89页 |
·选择性聚集 | 第89-91页 |
·差速粘附 | 第91-93页 |
·密度梯度离心 | 第93-98页 |
·原细胞含量和活性检测 | 第98-102页 |
·原细胞含量、BrdU 和 PCNA 阳性率测定 | 第98-100页 |
·端粒酶活性测定 | 第100-102页 |
·PCNA 标记原细胞方法的初步研究 | 第102-103页 |
·小结 | 第103-104页 |
参考文献 | 第104-106页 |
第四章 繁茂膜海绵原细胞的体外培养研究 | 第106-126页 |
·实验材料 | 第106页 |
·实验方法 | 第106-110页 |
·培养基的初筛 | 第106-109页 |
·原细胞含量不同体系的体外培养研究 | 第109页 |
·高富集原细胞体外培养及传代培养 | 第109-110页 |
·细胞生长动力学检测方法 | 第110页 |
·结果和讨论 | 第110-125页 |
·不同营养组合对海绵原细胞体外培养的影响 | 第110-111页 |
·细胞培养体系中原细胞含量对体外培养的影响 | 第111-114页 |
·高富集原细胞体外传代培养 | 第114-125页 |
·原代培养 | 第114-116页 |
·传代培养 | 第116-120页 |
·第三代海绵细胞体外生长情况 | 第120-125页 |
·小结 | 第125页 |
参考文献 | 第125-126页 |
第五章 海绵细胞聚集贴壁及原细胞分化的研究 | 第126-147页 |
·实验材料 | 第126页 |
·实验方法 | 第126-127页 |
·繁茂膜海绵混合细胞、原细胞、上皮细胞和胶原细胞的制备 | 第126-127页 |
·繁茂膜海绵混合细胞和富集原细胞的聚集贴壁 | 第127页 |
·上皮细胞、胶原细胞对聚集贴壁的影响 | 第127页 |
·原细胞与PC细胞比例为1/2体系的分化过程研究 | 第127页 |
·结果和讨论 | 第127-145页 |
·混合细胞和富集原细胞的聚集 | 第127-130页 |
·上皮、胶原细胞对细胞聚集的影响 | 第130-133页 |
·原细胞与PC细胞比例为1/2聚集体系的分化过程 | 第133-145页 |
·PC细胞构成原细胞贴附的基底层 | 第133-135页 |
·胶原性物质的分泌 | 第135-136页 |
·细胞聚集体中水沟系的形成 | 第136-137页 |
·海绵细胞聚集体中骨针的合成与分泌 | 第137-138页 |
·由上皮细胞介导的原细胞迁移行为 | 第138-140页 |
·上皮细胞间特殊相互作用——拉网 (Netting) 现象 | 第140-141页 |
·野生小海绵组织的基本结构和生态环境 | 第141-145页 |
·小结 | 第145-146页 |
参考文献 | 第146-147页 |
第六章 原细胞分化终末细胞——造骨细胞的特异性标记研究 | 第147-161页 |
·实验材料 | 第147-148页 |
·实验方法 | 第148-151页 |
·硅聚合酶的分离提取 | 第148页 |
·SDS-PAGE电泳及免疫印记检测 | 第148-149页 |
·硅聚合酶抗体的制备 | 第149页 |
·间接酶联免疫吸附实验方法的建立及抗体效价检测 | 第149-150页 |
·竞争抑制性酶联免疫吸附实验方法的建立 | 第150页 |
·繁茂膜海绵硅聚合酶抗体与其他两种海绵硅聚合酶的交叉反应检测 | 第150页 |
·繁茂膜海绵细胞的制备及其体外培养 | 第150-151页 |
·免疫组化染色标记硅聚合酶和造骨细胞 | 第151页 |
·结果与讨论 | 第151-159页 |
·三种海绵的基本形态结构 | 第151-152页 |
·硅聚合酶的分离提取 | 第152-154页 |
·硅聚合酶的 SDS-PAGE 电泳及免疫印记 | 第154-155页 |
·抗繁茂膜海绵硅聚合酶抗体效价的检测 | 第155-156页 |
·繁茂膜海绵硅聚合酶竞争抑制性检测方法的建立 | 第156页 |
·繁茂膜海绵硅聚合酶抗体与其他两种海绵硅聚合酶的交叉反应 | 第156-157页 |
·繁茂膜海绵造骨细胞的鉴别 | 第157-159页 |
·小结 | 第159-160页 |
参考文献 | 第160-161页 |
第七章 结论与后续工作建议 | 第161-167页 |
·结论 | 第161-162页 |
·后续工作建议 | 第162-166页 |
1.各类海绵细胞特异性标记研究 | 第162-163页 |
2.海绵原细胞分离纯化方法的发展和完善 | 第163页 |
3.普适性原细胞分离纯化方法的建立 | 第163-164页 |
4.原细胞促增殖和分化抑制研究 | 第164-165页 |
5.在成体原细胞和胚胎原细胞的研究 | 第165页 |
6. 海绵细胞周期研究 | 第165-166页 |
参考文献 | 第166-167页 |
附录 | 第167-170页 |
作者简介 | 第170页 |
博士期间发表文章目录 | 第170-172页 |
致谢 | 第172页 |