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繁茂膜海绵原细胞的鉴别、分离纯化和体外培养研究

摘要第1-4页
Abstract第4-12页
第一章 文献综述第12-63页
   ·海绵天然产物第12-15页
   ·药源材料——海绵的获取方法第15-22页
     ·方法一:捕捞野生海绵第15-16页
     ·方法二:海绵的水产养殖第16-17页
     ·方法三:海绵块的实验室养殖第17-18页
     ·方法四:活性化合物的化学合成及半合成第18页
     ·方法五:基因工程技术第18-19页
     ·方法六:微生物发酵第19-20页
     ·方法七:海绵细胞团与海绵细胞培养第20-22页
   ·海绵细胞生物学研究概况第22-27页
     ·海绵在动物界的位置第22-23页
     ·成年海绵中主要的细胞类型第23页
     ·海绵的生殖第23-27页
       ·无性生殖方式第24-26页
       ·海绵有性生殖和发育第26-27页
   ·海绵细胞体外培养的生物学意义第27页
   ·海绵细胞体外培养研究进展第27-33页
     ·海绵细胞体外培养研究概况第27-30页
     ·海绵细胞体外增殖培养条件的研究第30-33页
   ·海绵全能干细胞——原细胞研究概况第33-49页
     ·原细胞的生物学特性第33-35页
     ·原细胞分化相关标志研究第35-38页
     ·原细胞的分化及其调控研究第38-42页
     ·原细胞分离纯化方法研究第42-45页
       ·哺乳动物胚胎干细胞的分离纯化方法第42-44页
       ·海绵原细胞的分离纯化方法研究第44-45页
     ·原细胞增殖和分化终末细胞凋亡间的调谐机制第45-47页
     ·原细胞增殖及其潜力的检测方法研究第47-49页
   ·海绵细胞体外培养的几个主要问题第49-52页
     ·海绵细胞类型的准确鉴别第49页
     ·海绵细胞体外培养对象的选择和分离纯化方法第49-50页
     ·海绵细胞体外培养形式第50页
     ·海绵细胞间相互作用研究第50-51页
     ·海绵细胞专用培养基的研究第51页
     ·海绵细胞与其相关微生物的关系第51-52页
     ·海绵胚胎和幼体的发育过程第52页
   ·本课题研究思路第52-53页
 参考文献第53-63页
第二章 繁茂膜海绵原细胞的鉴别第63-79页
   ·实验材料第63-64页
   ·实验方法第64-67页
     ·海绵细胞形态鉴别第64-66页
       ·海绵的组织结构——石腊切片制备及 H&E 染色第64-65页
       ·活体海绵细胞在光镜下的形态特征第65页
       ·海绵组织透射电镜切片的制备及观察第65-66页
     ·海绵细胞增殖活性检测第66-67页
       ·BrdU摄取法第66-67页
       ·海绵细胞PCNA的检测第67页
   ·实验结果与讨论第67-77页
     ·繁茂膜海绵组织结构特征第67-68页
     ·不同类型海绵细胞光镜下特征第68-71页
     ·不同类型海绵细胞电镜下特征第71-74页
     ·海绵细胞摄取BrdU检测第74-75页
     ·海绵细胞表达 PCNA 检测第75-77页
   ·小结第77-78页
 参考文献第78-79页
第三章 繁茂膜海绵原细胞的分离纯化第79-106页
   ·实验材料第79-80页
   ·实验方法第80-86页
     ·海绵组织离散——制备混合海绵细胞第80-81页
     ·原细胞的富集第81-83页
       ·差速离心第81页
       ·选择性聚集第81页
       ·差速黏附第81-82页
       ·密度梯度离心第82-83页
     ·原细胞的计数和活性检测第83-85页
       ·原细胞的光镜计数第83页
       ·BrdU(5 溴-2 脱氧-尿嘧啶)标记及免疫组化染色第83-84页
       ·PCNA法检测增殖性海绵细胞第84页
       ·海绵细胞端粒酶活性检测第84-85页
     ·PCNA特异性标记原细胞方法的验证第85-86页
   ·实验结果与讨论第86-103页
     ·原细胞的富集第86-98页
       ·差速离心第86-89页
       ·选择性聚集第89-91页
       ·差速粘附第91-93页
       ·密度梯度离心第93-98页
     ·原细胞含量和活性检测第98-102页
       ·原细胞含量、BrdU 和 PCNA 阳性率测定第98-100页
       ·端粒酶活性测定第100-102页
     ·PCNA 标记原细胞方法的初步研究第102-103页
   ·小结第103-104页
 参考文献第104-106页
第四章 繁茂膜海绵原细胞的体外培养研究第106-126页
   ·实验材料第106页
   ·实验方法第106-110页
     ·培养基的初筛第106-109页
     ·原细胞含量不同体系的体外培养研究第109页
     ·高富集原细胞体外培养及传代培养第109-110页
     ·细胞生长动力学检测方法第110页
   ·结果和讨论第110-125页
     ·不同营养组合对海绵原细胞体外培养的影响第110-111页
     ·细胞培养体系中原细胞含量对体外培养的影响第111-114页
     ·高富集原细胞体外传代培养第114-125页
       ·原代培养第114-116页
       ·传代培养第116-120页
       ·第三代海绵细胞体外生长情况第120-125页
   ·小结第125页
 参考文献第125-126页
第五章 海绵细胞聚集贴壁及原细胞分化的研究第126-147页
   ·实验材料第126页
   ·实验方法第126-127页
     ·繁茂膜海绵混合细胞、原细胞、上皮细胞和胶原细胞的制备第126-127页
     ·繁茂膜海绵混合细胞和富集原细胞的聚集贴壁第127页
     ·上皮细胞、胶原细胞对聚集贴壁的影响第127页
     ·原细胞与PC细胞比例为1/2体系的分化过程研究第127页
   ·结果和讨论第127-145页
     ·混合细胞和富集原细胞的聚集第127-130页
     ·上皮、胶原细胞对细胞聚集的影响第130-133页
     ·原细胞与PC细胞比例为1/2聚集体系的分化过程第133-145页
       ·PC细胞构成原细胞贴附的基底层第133-135页
       ·胶原性物质的分泌第135-136页
       ·细胞聚集体中水沟系的形成第136-137页
       ·海绵细胞聚集体中骨针的合成与分泌第137-138页
       ·由上皮细胞介导的原细胞迁移行为第138-140页
       ·上皮细胞间特殊相互作用——拉网 (Netting) 现象第140-141页
       ·野生小海绵组织的基本结构和生态环境第141-145页
   ·小结第145-146页
 参考文献第146-147页
第六章 原细胞分化终末细胞——造骨细胞的特异性标记研究第147-161页
   ·实验材料第147-148页
   ·实验方法第148-151页
     ·硅聚合酶的分离提取第148页
     ·SDS-PAGE电泳及免疫印记检测第148-149页
     ·硅聚合酶抗体的制备第149页
     ·间接酶联免疫吸附实验方法的建立及抗体效价检测第149-150页
     ·竞争抑制性酶联免疫吸附实验方法的建立第150页
     ·繁茂膜海绵硅聚合酶抗体与其他两种海绵硅聚合酶的交叉反应检测第150页
     ·繁茂膜海绵细胞的制备及其体外培养第150-151页
     ·免疫组化染色标记硅聚合酶和造骨细胞第151页
   ·结果与讨论第151-159页
     ·三种海绵的基本形态结构第151-152页
     ·硅聚合酶的分离提取第152-154页
     ·硅聚合酶的 SDS-PAGE 电泳及免疫印记第154-155页
     ·抗繁茂膜海绵硅聚合酶抗体效价的检测第155-156页
     ·繁茂膜海绵硅聚合酶竞争抑制性检测方法的建立第156页
     ·繁茂膜海绵硅聚合酶抗体与其他两种海绵硅聚合酶的交叉反应第156-157页
     ·繁茂膜海绵造骨细胞的鉴别第157-159页
   ·小结第159-160页
 参考文献第160-161页
第七章 结论与后续工作建议第161-167页
   ·结论第161-162页
   ·后续工作建议第162-166页
  1.各类海绵细胞特异性标记研究第162-163页
  2.海绵原细胞分离纯化方法的发展和完善第163页
  3.普适性原细胞分离纯化方法的建立第163-164页
  4.原细胞促增殖和分化抑制研究第164-165页
  5.在成体原细胞和胚胎原细胞的研究第165页
  6. 海绵细胞周期研究第165-166页
 参考文献第166-167页
附录第167-170页
作者简介第170页
博士期间发表文章目录第170-172页
致谢第172页

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