| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-25页 |
| ·海藻糖概述 | 第8页 |
| ·海藻糖的理化性质 | 第8-10页 |
| ·海藻糖的生物学特性 | 第10页 |
| ·稳定生物膜和蛋白质的结构 | 第10页 |
| ·保护生物体免受热和干燥的损伤 | 第10页 |
| ·保护生物体免受氧化应激的损伤 | 第10页 |
| ·保护细胞DNA免受辐射作用的破坏 | 第10页 |
| ·海藻糖稳定生物膜和蛋白质结构机理的几种假说 | 第10-11页 |
| ·“水替代”假说 | 第11页 |
| ·“玻璃态”假说 | 第11页 |
| ·优先排阻假说 | 第11页 |
| ·海藻糖的应用 | 第11-14页 |
| ·海藻糖在食品中的应用 | 第12页 |
| ·用于生物产品的干燥与保存 | 第12-13页 |
| ·海藻糖在医药、保健品中的应用 | 第13页 |
| ·化妆品方面 | 第13页 |
| ·农业方面 | 第13-14页 |
| ·海藻糖生物合成途径及其相关基因 | 第14-15页 |
| ·OstA-OstB途径 | 第14页 |
| ·MTSase-MTHase途径 | 第14页 |
| ·TreS途径 | 第14-15页 |
| ·TSase途径 | 第15页 |
| ·海藻糖的生产方法 | 第15-17页 |
| ·微生物抽提法 | 第15-16页 |
| ·发酵法 | 第16页 |
| ·酶转化法 | 第16-17页 |
| ·以葡萄糖为底物 | 第16页 |
| ·以麦芽糖为底物 | 第16-17页 |
| ·以淀粉为底物 | 第17页 |
| ·酶法生产海藻糖的国内外研究进展 | 第17-20页 |
| ·海藻糖合酶以麦芽糖为底物合成海藻糖 | 第17-18页 |
| ·MTSase和MTHase联合作用从淀粉或淀粉水解物生成海藻糖 | 第18-20页 |
| ·大肠杆菌表达体系 | 第20-23页 |
| ·大肠杆菌表达系统的特点 | 第20-21页 |
| ·影响大肠杆菌中外源基因表达的因素 | 第21-23页 |
| ·表达载体的选择 | 第21页 |
| ·外源基因中密码子的使用 | 第21-22页 |
| ·翻译起始区域mRNA的一级和二级结构 | 第22-23页 |
| ·翻译的终止 | 第23页 |
| ·本课题拟研究的内容 | 第23-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-31页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·基因组 | 第25页 |
| ·质粒与菌种 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·实验及分析方法 | 第26-31页 |
| ·分子克隆相关实验 | 第26页 |
| ·菌体浓度的测定 | 第26页 |
| ·细胞超声波破碎及胞内蛋白的提取 | 第26-27页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第27页 |
| ·海藻糖的HPLC分析方法 | 第27-28页 |
| ·还原糖的测定方法 | 第28页 |
| ·粗酶液制备 | 第28-29页 |
| ·酶活测定 | 第29-31页 |
| ·MTSase酶活测定 | 第29-30页 |
| ·MTHase酶活测定 | 第30-31页 |
| 第三章 表达MTSase和MTHase的基因工程菌的构建 | 第31-39页 |
| ·引言 | 第31页 |
| ·材料和方法 | 第31-34页 |
| ·质粒和菌种 | 第31-32页 |
| ·培养基及培养条件 | 第32页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第32页 |
| ·质粒抽提 | 第32页 |
| ·感受态细胞的制备和质粒转化 | 第32-33页 |
| ·DNA的检测 | 第33页 |
| ·目的基因的扩增 | 第33页 |
| ·表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·实验结果 | 第34-38页 |
| ·基因扩增与测序 | 第35页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第36-37页 |
| ·pTrc99a-MTSase在E.coli BL21(DE3)中表达产物的SDS-PAGE | 第36页 |
| ·pTrc99a-MTHase在E.coli BL21(DE3)中表达产物的SDS-PAGE | 第36-37页 |
| ·酶活测定 | 第37-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第四章 MTSase在大肠杆菌中的表达优化 | 第39-47页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·材料与方法 | 第39-40页 |
| ·菌种和质粒 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·培养条件 | 第39-40页 |
| ·酶活测定 | 第40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-46页 |
| ·MTSase表达体系的筛选 | 第40页 |
| ·E.coli BL21(DE3)(pTrc99a-MTSase)诱导条件优化 | 第40-42页 |
| ·诱导温度 | 第40-41页 |
| ·诱导剂IPTG的浓度 | 第41页 |
| ·诱导后的培养时间 | 第41-42页 |
| ·基于密码子水平的表达优化 | 第42-46页 |
| ·MTSase基因在E.coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIL中的表达 | 第43-44页 |
| ·优化了外源基因5′和3′末端的重组表达质粒pTrc99a-MTSase′的构建 | 第44-45页 |
| ·优化了5′和3′末端的外源基因在BL21(DE3)中的表达 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| 第五章 MTSase和MWnase双酶法生产海藻糖 | 第47-52页 |
| ·引言 | 第47页 |
| ·材料与方法 | 第47-48页 |
| ·菌种 | 第47页 |
| ·酶制剂 | 第47-48页 |
| ·MTSase和MTHase粗酶液 | 第47页 |
| ·BAN480L中温a-淀粉酶 | 第47页 |
| ·Dextrozyme D复合糖化酶 | 第47-48页 |
| ·试剂 | 第48页 |
| ·培养基及培养条件 | 第48页 |
| ·不同浓度和DE值淀粉溶液的制备 | 第48页 |
| ·MTSase和MTHase转化淀粉生产海藻糖 | 第48页 |
| ·糖化液中海藻糖含量测定 | 第48页 |
| ·结果与讨论 | 第48-51页 |
| ·MTSase和MTHase加入比例对海藻糖产率的影响 | 第48-49页 |
| ·BAN中温α-淀粉酶的水解作用对海藻糖产率的影响 | 第49-50页 |
| ·支链淀粉对海藻糖产率影响程度的测定 | 第50-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 第六章 结论与展望 | 第52-54页 |
| ·结论 | 第52页 |
| ·展望 | 第52-54页 |
| 攻读硕士学位期间发表录用的论文 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
