| 学位论文原创性声明 | 第1页 |
| 专利权声明 | 第2页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第2-3页 |
| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 1 前言 | 第10-20页 |
| ·生物防治的发展 | 第10-11页 |
| ·化学防治的弊端 | 第10页 |
| ·生物防治发展的必要性 | 第10-11页 |
| ·生物防治的应用 | 第11页 |
| ·苏云金芽孢杆菌简介与发展 | 第11-13页 |
| ·苏云金芽孢杆菌的发展历史 | 第11-12页 |
| ·苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白的杀虫特性 | 第12-13页 |
| ·转Bt基因作物的发展 | 第13页 |
| ·转基因作物的安全性问题 | 第13-14页 |
| ·人们对于转基因产品的担忧 | 第13-14页 |
| ·转基因作物的安全性 | 第14页 |
| ·转基因产品的检测方法 | 第14-16页 |
| ·PCR技术的发展与要求 | 第14-15页 |
| ·ELISA技术的发展与要求 | 第15页 |
| ·两种检测方法的比较 | 第15-16页 |
| ·PCR与ELISA检测方法的应用 | 第16-17页 |
| ·PCR方法在检测转基因产品中的应用 | 第16页 |
| ·ELISA方法在检测转基因产品中的应用 | 第16-17页 |
| ·ELISA方法在检测 Bt毒蛋白方面的应用 | 第17-18页 |
| ·国外的发展概况 | 第17页 |
| ·国内的发展概况 | 第17-18页 |
| ·本课题的立题依据和研究内容 | 第18-20页 |
| ·立题依据与研究意义 | 第18页 |
| ·本论文研究的主要内容 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-31页 |
| ·实验材料 | 第20-24页 |
| ·主要试剂与缓冲液的配制方法 | 第20-22页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要药品 | 第20-21页 |
| ·主要缓冲液的配制方法 | 第21-22页 |
| ·实验仪器 | 第22-23页 |
| ·实验菌种 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·种子培养基 | 第23页 |
| ·发酵培养基 | 第23页 |
| ·培养条件 | 第23页 |
| ·实验动物 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-31页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白的提取 | 第24页 |
| ·孢晶混合物的提取 | 第24页 |
| ·杀虫晶体蛋白的提取 | 第24页 |
| ·采用 Lowery法测定晶体蛋白的含量 | 第24-25页 |
| ·试剂的配制 | 第24页 |
| ·蛋白标准曲线的制作 | 第24-25页 |
| ·晶体蛋白浓度的测定 | 第25页 |
| ·杀虫晶体蛋白的电泳分析 | 第25页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白抗体的制备 | 第25-26页 |
| ·抗体的制备 | 第25页 |
| ·抗体的分离 | 第25-26页 |
| ·效价的测定 | 第26页 |
| ·抗体的纯化 | 第26-27页 |
| ·用Sepharose Protein A凝胶柱纯化抗体得到 IgG | 第26页 |
| ·用溴化氰活化的 Sepharose CL-4B凝胶柱纯化抗体 | 第26-27页 |
| ·抗体浓度的测定 | 第27页 |
| ·酶标抗体的制备和纯化 | 第27-28页 |
| ·酶标抗体的连接 | 第27页 |
| ·酶标抗体的纯化 | 第27-28页 |
| ·抗体和酶标抗体浓度的选择 | 第28页 |
| ·抗体浓度的选择 | 第28页 |
| ·酶标抗体浓度的选择 | 第28页 |
| ·双抗夹心 ELISA方法的建立 | 第28-29页 |
| ·棉花叶中Bt蛋白的提取 | 第28页 |
| ·标准曲线的制作及样品的测定方法 | 第28页 |
| ·与试剂盒抗体和酶标抗体的比较 | 第28-29页 |
| ·与其它 Bt蛋白的交叉反应 | 第29页 |
| ·棉花叶子中DNA的提取及浓度的测定 | 第29页 |
| ·棉花叶子中 DNA的提取 | 第29页 |
| ·DNA浓度的测定 | 第29页 |
| ·聚合酶链式反应检测 | 第29-31页 |
| ·PCR反应 | 第29-30页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第30-31页 |
| 3 结果与讨论 | 第31-54页 |
| ·Bt杀虫晶体蛋白的提取 | 第31-35页 |
| ·培养基和摇床转速对 Bt菌生长的影响 | 第31-32页 |
| ·培养基对 Bt菌生长的影响 | 第31页 |
| ·摇床转速对 Bt菌生长的影响 | 第31-32页 |
| ·Bt晶体蛋白提纯的两种方法的比较 | 第32-35页 |
| ·菌体的碱液裂解 | 第32页 |
| ·两种蛋白提取方法的比较 | 第32-35页 |
| ·Bt蛋白的分子量和纯度测定 | 第35页 |
| ·抗体的制备及纯化方法分析 | 第35-38页 |
| ·抗体的制备方法比较 | 第36-37页 |
| ·抗体的纯化 | 第37-38页 |
| ·采用 Sepharose Protein A的凝胶柱纯化得到 IgG | 第37-38页 |
| ·用溴化氰活化的 Sepharose CL-4B凝胶柱纯化得到抗体 | 第38页 |
| ·酶标抗体的制备与纯化 | 第38-39页 |
| ·酶标抗体的制备方法 | 第38-39页 |
| ·酶标抗体的纯化 | 第39页 |
| ·抗体和酶标抗体浓度的选择 | 第39-41页 |
| ·抗体浓度的选择 | 第39-40页 |
| ·酶标抗体浓度的选择 | 第40-41页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第41-43页 |
| ·采用提取的蛋白作抗原做标准曲线 | 第41-42页 |
| ·采用阳性控制物(Bt Cry1Ab/1Ac)为抗原做标准曲线 | 第42-43页 |
| ·试剂盒方法和自制的抗体酶标抗体比较 | 第42-43页 |
| ·Bt Cry1Ac蛋白作为抗原的试剂盒实验 | 第43页 |
| ·采用试剂盒酶标抗体做标准曲线 | 第43页 |
| ·与其它 Bt蛋白的交叉反应 | 第43-44页 |
| ·棉花叶子中 Bt杀虫蛋白的检测 | 第44-48页 |
| ·Tris-硼酸缓冲液提取的Bt蛋白检测 | 第45-46页 |
| ·Na_2CO_3缓冲液提取 Bt蛋白检测 | 第46-47页 |
| ·PBST缓冲液提取 Bt蛋白检测 | 第47页 |
| ·三种缓冲液提取样品中Bt蛋白的比较 | 第47-48页 |
| ·DNA的提取 | 第48-50页 |
| ·PCR检测 | 第50-54页 |
| 4 结论 | 第54-57页 |
| ·三种 Bt菌培养条件的影响及杀虫晶体蛋白提取的比较 | 第54页 |
| ·抗体的制备与纯化 | 第54-55页 |
| ·酶标抗体的制备与纯化 | 第55页 |
| ·双抗夹心 ELISA方法的建立 | 第55页 |
| ·交叉反应的测定 | 第55页 |
| ·双抗夹心ELISA实验对样品的检测 | 第55-56页 |
| ·对ELISA实验进行的PCR验证实验 | 第56-57页 |
| 5 展望 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 论文发表情况 | 第66页 |
