| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-27页 |
| 前言 | 第27-32页 |
| 1 家族性激素耐药型肾病综合征家系NPHS2基因的分析 | 第32-56页 |
| ·实验材料 | 第32-38页 |
| ·研究对象 | 第32页 |
| ·标本收集 | 第32-33页 |
| ·引物设计 | 第33-34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·主要药品、试剂及其配制 | 第35-38页 |
| ·方法 | 第38-45页 |
| ·肾组织间接免疫荧光染色 | 第38页 |
| ·基因组DNA的提取与定量 | 第38-39页 |
| ·PCR扩增NPHS2基因8个外显子 | 第39-40页 |
| ·DHPLC分析 | 第40-43页 |
| ·DNA序列测定 | 第43-45页 |
| ·结果 | 第45-50页 |
| ·肾脏病理及常规免疫病理 | 第45页 |
| ·先证者肾组织中podocin、nephrin、alpha-actinin-4和WT1的表达 | 第45页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第45-46页 |
| ·DHPLC检测条件的建立 | 第46页 |
| ·DHPLC分析结果 | 第46页 |
| ·DNA测序结果 | 第46-50页 |
| ·讨论 | 第50-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 2 散发性激素耐药型肾病综合征患儿NPHS2基因的分析 | 第56-80页 |
| ·实验材料 | 第56-61页 |
| ·研究对象 | 第56页 |
| ·引物设计 | 第56-57页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| ·主要药品、试剂及其配制 | 第57-61页 |
| ·方法 | 第61-63页 |
| ·基因组DNA的提取与定量 | 第61页 |
| ·PCR扩增NPHS2基因8个外显子 | 第61页 |
| ·DHPLC分析 | 第61-62页 |
| ·DNA序列测定 | 第62页 |
| ·统计学分析 | 第62-63页 |
| ·结果 | 第63-73页 |
| ·23例散发性SRNS患儿的临床资料 | 第63页 |
| ·DHPLC分析结果 | 第63页 |
| ·DNA测序结果 | 第63-64页 |
| ·基因型和等位基因频率 | 第64-73页 |
| ·讨论 | 第73-79页 |
| ·小结 | 第79-80页 |
| 3 突变NPHS2基因在真核细胞中的表达 | 第80-116页 |
| ·实验材料 | 第80-86页 |
| ·研究对象 | 第80页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第80-81页 |
| ·主要仪器 | 第81-82页 |
| ·主要液体配制 | 第82-86页 |
| ·方法 | 第86-101页 |
| ·构建含有野生型NPHS2基因编码区全长cDNA的克隆载体 | 第86-92页 |
| ·分别构建含有NPHS2基因467_468insT突变cDNA和503G＞A突变cDNA的克隆载体 | 第92-94页 |
| ·分别构建含有野生型NPHS2基因cDNA、467_468insT突变cDNA和503G＞A突变cDNA的表达载体 | 第94-95页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第95-97页 |
| ·转染HEK293细胞 | 第97-99页 |
| ·应用间接免疫荧光染色，用共聚焦显微镜观察podocin的荧光强度及其在细胞内的定位 | 第99-101页 |
| ·结果 | 第101-109页 |
| ·从正常肾组织中提取总RNA结果 | 第101页 |
| ·PCR扩增NPHS2基因编码区全长cDNA结果 | 第101页 |
| ·构建分别含有野生型NPHS2基因全长编码区cDNA、467_468insT突变cDNA和503G＞A突变cDNA的克隆载体结果 | 第101页 |
| ·构建分别含有野生型NPHS2基因全长编码区cDNA、467_468insT突变cDNA和503G＞A突变cDNA的表达载体结果 | 第101页 |
| ·大量制备质粒DNA结果 | 第101-108页 |
| ·HEK293细胞podocin免疫荧光双标记染色结果 | 第108-109页 |
| ·讨论 | 第109-115页 |
| ·小结 | 第115-116页 |
| 4 激素耐药型肾病综合征儿童糖皮质激素受体基因的检测和分析 | 第116-136页 |
| ·实验材料 | 第116-119页 |
| ·研究对象 | 第116-117页 |
| ·引物 | 第117页 |
| ·主要仪器 | 第117页 |
| ·主要药品、试剂及其配制 | 第117-119页 |
| ·方法 | 第119-122页 |
| ·基因组DNA的提取与定量 | 第119页 |
| ·分离外周血淋巴细胞 | 第119页 |
| ·从外周血淋巴细胞中提取总RNA | 第119-120页 |
| ·PCR扩增NR3C1基因片段 | 第120页 |
| ·PCR扩增NR3C1基因alpha-cDNA、beta-cDNA和ACTB基因cDNA及RT-PCR产物的鉴定 | 第120-121页 |
| ·DHPLC分析 | 第121页 |
| ·DNA序列测定 | 第121页 |
| ·统计学分析 | 第121-122页 |
| ·结果 | 第122-128页 |
| ·NS患儿临床资料 | 第122页 |
| ·从外周血淋巴细胞提取总RNA | 第122页 |
| ·RT-PCR结果 | 第122页 |
| ·DHPLC分析结果 | 第122-123页 |
| ·DNA测序结果 | 第123页 |
| ·NR3C1基因单倍体3和单倍体5的等位基因频率 | 第123-128页 |
| ·讨论 | 第128-135页 |
| ·小结 | 第135-136页 |
| 参考文献 | 第136-149页 |
| 附录 | 第149-150页 |
| 成果 | 第150-152页 |
| 综述 | 第152-174页 |
| 致谢 | 第174-176页 |
| 原创性声明及版权使用授权书 | 第176页 |
