| 1 前言 | 第1-40页 |
| ·香蕉的特性及经济意义 | 第14页 |
| ·香蕉果实采后生理学研究进展 | 第14-15页 |
| ·香蕉果实分子生物学研究进展 | 第15-22页 |
| ·分离香蕉采后果实乙烯生物合成相关的基因 | 第16页 |
| ·采用差异筛选方法分离果实成熟相关基因 | 第16-18页 |
| ·采用分离蛋白质方法克隆果实成熟相关基因 | 第18-19页 |
| ·其它重要果实成熟相关基因的分离与表达研究 | 第19-20页 |
| ·淀粉酶生理及分子生物学研究进展 | 第20-22页 |
| ·基因芯片(gene chip)技术 | 第22-25页 |
| ·基因芯片原理 | 第22页 |
| ·基因芯片分类 | 第22-23页 |
| ·芯片在植物功能基因组学研究中的应用 | 第23-25页 |
| ·利用芯片技术研究植物基因的结构 | 第23页 |
| ·利用芯片技术研究基因表达与发育生物学 | 第23页 |
| ·利用芯片技术研究基因的表达水平，建立基因表达谱 | 第23-24页 |
| ·利用基因芯片技术筛选抗性基因 | 第24页 |
| ·利用基因芯片技术研究基因突变及多态性分析 | 第24-25页 |
| ·利用芯片技术鉴定重要的目的基因 | 第25页 |
| ·抑制差减杂交技术 | 第25-29页 |
| ·SSH技术路线 | 第26-27页 |
| ·SSH的特点 | 第27-28页 |
| ·SSH在植物功能基因组学研究上的应用 | 第28-29页 |
| ·植物启动子研究进展 | 第29-37页 |
| ·高等植物启动子的结构 | 第29-30页 |
| ·转录起始位点 | 第29页 |
| ·TATA盒、CAAT盒与GC结构 | 第29-30页 |
| ·增强子和沉默子 | 第30页 |
| ·启动子的类型 | 第30-35页 |
| ·组成型启动子 | 第30-31页 |
| ·组织特异性启动子 | 第31-32页 |
| ·诱导型启动子 | 第32-35页 |
| ·香蕉启动子分离及应用概况 | 第35-37页 |
| ·本论文研究的目的意义 | 第37-40页 |
| 2 微阵列筛选香蕉果实特异表达cDNA片段 | 第40-50页 |
| ·材料与试剂 | 第40页 |
| ·植物材料 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·质粒及菌种 | 第40页 |
| ·抑制缩减文库构建 | 第40页 |
| ·微阵列制作方法 | 第40-44页 |
| ·SSH文库阳性质粒提取 | 第40-41页 |
| ·SSH文库中重组克隆的鉴定 | 第41页 |
| ·cDNA芯片制备 | 第41-42页 |
| ·将鉴定出的重组质粒的插入片段进行PCR扩增 | 第41页 |
| ·扩增的PCR产物纯化 | 第41页 |
| ·点样 | 第41-42页 |
| ·对样品的RNA进行标记 | 第42-44页 |
| ·香蕉果实和根、茎叶的总RNA的提取 | 第42-43页 |
| ·对样品的RNA进行标记 | 第43-44页 |
| ·杂交与清洗 | 第44页 |
| ·芯片扫描 | 第44页 |
| ·芯片图像的采集与数据分析 | 第44页 |
| ·芯片图像的采集与数据分析 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-48页 |
| ·对阳性重组质粒进行PCR扩增 | 第44页 |
| ·芯片分析结果 | 第44-46页 |
| ·cDNA序列测定与BLAST分析 | 第46-48页 |
| ·cDNA的功能分类 | 第48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| ·关于确定光吸收值的比例问题 | 第48页 |
| ·关于未知功能和一些同源性比较低的cDNA片段 | 第48-49页 |
| ·不同实验方法对分离低丰度基因的影响 | 第49-50页 |
| 3 果实特异表达基因cDNA Northern blot分析 | 第50-53页 |
| ·材料与试剂 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-52页 |
| ·RNA提取 | 第50页 |
| ·杂交探针标记 | 第50页 |
| ·随机挑选cDNA克隆 | 第50页 |
| ·标记反应 | 第50页 |
| ·杂交 | 第50-52页 |
| ·转膜 | 第50-51页 |
| ·Northern杂交 | 第51-52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-53页 |
| ·cDNA表达的器官特异性 | 第52页 |
| ·cDNA表达量的差异 | 第52页 |
| ·Northern blot分析和芯片分析结果的一致性 | 第52-53页 |
| 4 香蕉果实a-1，4葡聚糖磷酸化酶基因克隆 | 第53-64页 |
| ·材料与试剂 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-58页 |
| ·香蕉果实RNA提取 | 第53页 |
| ·香蕉果实第一链cDNA合成 | 第53-54页 |
| ·RACE引物设计 | 第54页 |
| ·RACE扩增BR63的5′端和3′端 | 第54-55页 |
| ·Master Mix的准备(CLOTECH's Advantage 2 Polymerase Mix) | 第54页 |
| ·5′RACE反应体系 | 第54-55页 |
| ·3′RACE反应体系 | 第55页 |
| ·PCR程序 | 第55页 |
| ·RACE产物的克隆及重组子筛选 | 第55-58页 |
| ·回收5′、3′RACE特异性条带 | 第55-56页 |
| ·回收PCR产物连接 | 第56页 |
| ·连接产物转化E.coli DH5α | 第56-57页 |
| ·重组质粒DNA的微量提取 | 第57页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第57-58页 |
| ·重组质粒酶切鉴定及测序 | 第58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-64页 |
| ·基因克隆及测序 | 第58-60页 |
| ·BR63片段5′、3′RACE扩增结果 | 第58-59页 |
| ·序列测定 | 第59-60页 |
| ·基因结构分析 | 第60-62页 |
| ·基因同源性比较 | 第62-63页 |
| ·利用RACE技术成功克隆到BR63的全长序列 | 第63页 |
| ·不同方法克隆3′RACE扩增比较 | 第63-64页 |
| 5 a-1，4葡聚糖磷酸化酶基因在香蕉果实成熟过程中的表达 | 第64-73页 |
| ·材料与试剂 | 第64页 |
| ·方法 | 第64-66页 |
| ·采后香蕉果实乙烯释放量及呼吸强度测定 | 第64-65页 |
| ·材料处理 | 第64-65页 |
| ·RT-PCR分析采后不同成熟阶段a-1，4葡聚糖磷酸化酶基因表达 | 第65-66页 |
| ·RNA提取 | 第65页 |
| ·cDNA第一连合成 | 第65页 |
| ·RT-PCR反应 | 第65-66页 |
| ·RT-PCR产物分析 | 第66页 |
| ·结果 | 第66-71页 |
| ·呼吸强度变化 | 第66页 |
| ·乙烯释放量的变化 | 第66页 |
| ·a-1，4葡聚糖磷酸化酶基因表达半定量PCR(RT-PCR)分析 | 第66-69页 |
| ·The Scion Image软件分析表达结果 | 第69-71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| ·a-1，4葡聚糖磷酸化酶基因表达量与香蕉果实采后呼吸、乙烯变化的关系 | 第71页 |
| ·a-1，4葡聚糖磷酸化酶基因在果实采后成熟过程中的表达 | 第71页 |
| ·关于基因表达的半定量方法 | 第71-73页 |
| 6 香蕉果实特异表达启动子克隆 | 第73-80页 |
| ·材料与试剂 | 第73页 |
| ·植物材料 | 第73页 |
| ·试剂 | 第73页 |
| ·质粒及菌种 | 第73页 |
| ·方法 | 第73-76页 |
| ·香蕉凝集素(Banana Lectin，BanLec)基因表达研究 | 第73页 |
| ·BanLec基因启动子的克隆 | 第73-76页 |
| ·香蕉基因组DNA提取 | 第73-74页 |
| ·香蕉基因组DNA酶切消化 | 第74页 |
| ·酶切产物纯化 | 第74页 |
| ·纯化后基因组DNA与GenomeWalker Adaptors连接 | 第74-75页 |
| ·以GenomeWalker Libraries为模板的PCR | 第75-76页 |
| ·PCR产物回收 | 第76页 |
| ·回收PCR产物连接和转化 | 第76页 |
| ·重组质粒酶切鉴定及测序 | 第76页 |
| ·结果 | 第76-79页 |
| ·DNA提取及内切酶消化 | 第76页 |
| ·启动子片断扩增及测序 | 第76-78页 |
| ·启动子序列分析 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-80页 |
| ·克隆到的启动子序列的长度 | 第79页 |
| ·启动子序列分析 | 第79-80页 |
| 7 凝集素基因启动子植物表达载体(pBIL2和pBIB2)的构建 | 第80-88页 |
| ·材料与试剂 | 第80页 |
| ·方法 | 第80-85页 |
| ·植物表达载体pBIL2构建 | 第80-82页 |
| ·BanLec基因启动子序列(命名为BL2)PCR扩增 | 第80-82页 |
| ·植物表达载体pBIB2构建 | 第82-85页 |
| ·芪合酶(命名为LAB)基因PCR扩增 | 第82-84页 |
| ·LAB PCR产物回收、测序 | 第84页 |
| ·LAB PCR回收产物及pBIL2表达载体BamH1、Sac1双酶切 | 第84页 |
| ·回收酶切目的基因及载体片段 | 第84页 |
| ·pBIB2载体连接 | 第84页 |
| ·pBIB2载体转化大肠杆菌DH5α | 第84页 |
| ·质粒DNA微量提取及重组子的酶切鉴定 | 第84-85页 |
| ·结果 | 第85-88页 |
| ·BanLec基因启动子植物表达载体pBIL2的构建 | 第85页 |
| ·芪合酶基因(LAB)克隆及测序 | 第85-86页 |
| ·Banlec基因启动子连接芪合酶基因(LAB)表达载体pBIB2构建 | 第86-88页 |
| 8 凝集素基因启动子瞬时表达活性检测 | 第88-94页 |
| ·材料与试剂 | 第88页 |
| ·设备 | 第88页 |
| ·方法 | 第88-91页 |
| ·香蕉转化材料的准备 | 第88页 |
| ·基因枪转化 | 第88-89页 |
| ·质粒PBI121、pBIL2的大量提取 | 第88页 |
| ·微弹制备(王关林等，2002) | 第88-89页 |
| ·基因枪轰击香蕉材料 | 第89页 |
| ·GUS组织化学染色 | 第89页 |
| ·GUS活性检测 | 第89-91页 |
| ·GUS提取液的制备 | 第89-90页 |
| ·GUS提取液蛋白含量测定 | 第90-91页 |
| ·酶反应 | 第91页 |
| ·结果与讨论 | 第91-94页 |
| ·pBIL2载体在香蕉不同组织中瞬时表达结果 | 第91页 |
| ·pBI121与pBIL2载体GUS活性检测 | 第91-94页 |
| ·GUS提取液蛋白含量 | 第91页 |
| ·转化24小时后一定时间内GUS酶活力变化 | 第91-94页 |
| 9 果实特异表达启动子启动芪合酶基因在番茄中的表达 | 第94-103页 |
| ·材料与试剂 | 第94页 |
| ·方法 | 第94-97页 |
| ·pBIB2质粒导入农杆菌GV3103 | 第94页 |
| ·PCR检测 | 第94-95页 |
| ·GV3103介导的番茄遗传转化 | 第95页 |
| ·转化番茄的鉴定 | 第95-97页 |
| ·PCR检测 | 第95-96页 |
| ·转化植株的Southern blot检测 | 第96-97页 |
| ·转基因番茄RT-PCR检测 | 第97页 |
| ·HPLC分析 | 第97页 |
| ·结果 | 第97-100页 |
| ·pBIB2转化番茄的出愈、分化、生根及大田种植 | 第97-98页 |
| ·pBIB2转化番茄PCR检测及Southern blot分析 | 第98-99页 |
| ·转基因植株RT-PCR检测 | 第99页 |
| ·转化番茄植株白藜芦醇含量的测定 | 第99-100页 |
| ·讨论 | 第100-103页 |
| ·果实作为生物反应器的研究 | 第100页 |
| ·白藜芦醇的生物学功能及转基因研究 | 第100-101页 |
| ·BanLec基因启动子启动芪合酶基因在番茄中表达 | 第101-102页 |
| ·构建含有葡萄芪合酶基因融合表达载体的意义 | 第102-103页 |
| 10 结论 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-117页 |
| 附录： | 第117-129页 |
| 致谢 | 第129页 |
