| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 符号说明 | 第15-16页 |
| 第一部分 文献综述 | 第16-47页 |
| 1． 小麦基因转化方法 | 第16-21页 |
| 1．1 PEG介导法 | 第16页 |
| 1．2 激光微束法 | 第16-17页 |
| 1．3 电击法 | 第17页 |
| 1．4 微粒轰击法 | 第17页 |
| 1．5 花粉管通道法 | 第17-18页 |
| 1．6 农杆菌介导法 | 第18-21页 |
| 1．7 其他方法 | 第21页 |
| 2． 外植体类型的选择 | 第21-22页 |
| 3． 筛选方法 | 第22-23页 |
| 4． 外源基因检测方法 | 第23页 |
| 5． 转基因植物的表达分析方法 | 第23-25页 |
| 6． 植物盐害和耐盐机理研究进展 | 第25-34页 |
| 6．1 盐害机理 | 第25-26页 |
| 6．1．1 盐分积累的过程 | 第25页 |
| 6．1．2 渗透胁迫作用 | 第25-26页 |
| 6．1．3 Na+的离子毒害作用 | 第26页 |
| 6．1．4 氧化胁迫作用 | 第26页 |
| 6．2 植物耐盐机制 | 第26-31页 |
| 6．2．1 根细胞的选择吸收作用 | 第27-28页 |
| 6．2．2 木质部的选择性运输 | 第28页 |
| 6．2．3 韧皮部转运和外排 | 第28页 |
| 6．2．4 细胞内的区隔化 | 第28-29页 |
| 6．2．5 渗透调节 | 第29页 |
| 6．2．6 活性氧(ROS)在细胞内的清除机制 | 第29-30页 |
| 6．2．7 双子叶和单子叶植株耐盐机理的差别 | 第30-31页 |
| 6．3 培育耐盐农作物的方法 | 第31-33页 |
| 6．4 植物耐盐性的主要生理和生化指标 | 第33-34页 |
| 6．4．1 发芽率、发芽指数和活力指数 | 第33页 |
| 6．4．2 成活率和生长量 | 第33-34页 |
| 6．4．3 籽粒重和产量 | 第34页 |
| 6．4．4 Na~+，K~+，K~+/Na~+ | 第34页 |
| 6．4．5 其他生理生化指标 | 第34页 |
| 6．4．6 区分渗透胁迫和离子胁迫 | 第34页 |
| 7． 植物耐盐的分子机制研究现状 | 第34-42页 |
| 7．1 植物的盐胁迫信号转导途径 | 第35-36页 |
| 7．2 植物对盐胁迫的应答基因及其耐盐机制 | 第36-38页 |
| 7．3 Na~+/H~+逆向转运蛋白的研究进展 | 第38-42页 |
| 7．3．1 蛋白分子结构的特点 | 第38-39页 |
| 7．3．2 类型和同源性 | 第39页 |
| 7．3．3 生化特性和主要生理功能 | 第39-41页 |
| 7．3．4 表达模式及与耐盐性的关系 | 第41-42页 |
| 7．3．5 逆向转运蛋白的信号途径 | 第42页 |
| 8． 抗菌肽研究进展 | 第42-46页 |
| 8．1 抗菌肽的分子结构和生物学效应 | 第43-44页 |
| 8．2 抗菌肽的基因结构 | 第44页 |
| 8．3 抗菌肽的作用机理 | 第44页 |
| 8．4 抗菌肽基因工程 | 第44-46页 |
| 实验的目的和意义 | 第46-47页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第47-70页 |
| 1． 农杆菌转化的受体材料 | 第47页 |
| 2． 培养基种类及成分 | 第47-48页 |
| 3． 农杆菌菌株和载体 | 第48-49页 |
| 4． 转化 | 第49页 |
| 5． 筛选和再生 | 第49页 |
| 6． PCR检测 | 第49-52页 |
| 6．1 DNA的提取 | 第49-50页 |
| 6．2 PCR引物 | 第50-51页 |
| 6．3 扩增体系 | 第51页 |
| 6．4 扩增程序 | 第51-52页 |
| 6．5 电泳 | 第52页 |
| 7． Southern杂交 | 第52-61页 |
| 7．1 大肠杆菌感受态细胞的制备及其转化 | 第52-53页 |
| 7．2 质粒提取 | 第53-54页 |
| 7．3 质粒酶切及探针片段的回收 | 第54-55页 |
| 7．4 DNA提取 | 第55页 |
| 7．5 基因组 DNA的酶切和电泳 | 第55-56页 |
| 7．6 转膜 | 第56-57页 |
| 7．7 探针标记 | 第57-58页 |
| 7．8 杂交及检测 | 第58-61页 |
| 8． 染色体原位杂交 | 第61-65页 |
| 8．1 药品 | 第61页 |
| 8．2 染色体制备 | 第61-62页 |
| 8．3 探针标记 | 第62-63页 |
| 8．4 杂交 | 第63-64页 |
| 8．5 信号产生和检测 | 第64-65页 |
| 9． RT-PCR分析 | 第65-66页 |
| 9．1 Trizol法提取叶片总RNA | 第65页 |
| 9．2 总 RNA的纯化 | 第65-66页 |
| 9．3 RT-PCR的体系和程序 | 第66页 |
| 10． T_2代遗传分析 | 第66页 |
| 11． 种子萌发率分析 | 第66-67页 |
| 12． 生长量分析 | 第67页 |
| 13． 成活率分析 | 第67页 |
| 14． Na~+，K~+分析 | 第67页 |
| 15． 耐盐小麦后代的田间产量分析 | 第67页 |
| 16． 离体叶段法白粉病抗性分析 | 第67-68页 |
| 17． 大田抗白粉病分析 | 第68页 |
| 18． 生长点浸染法 | 第68页 |
| 19． 快速扩增cDNA末端 | 第68-70页 |
| 19．1 5’RACE的一链cDNA合成 | 第68页 |
| 19．2 5’RACE扩增 | 第68-69页 |
| 19．3 3’RACE的一链cDNA合成 | 第69页 |
| 19．4 3’RACE扩增基本步骤 | 第69-70页 |
| 第三部分 结果和分析 | 第70-98页 |
| 实验一 液泡型Na~+/H~+逆向转运蛋白基因对小麦的转化及转基因后代的耐盐性分析 | 第70-83页 |
| 1． 抗性植株再生 | 第70页 |
| 2． PCR分析结果和转化频率 | 第70-71页 |
| 3． Southern杂交分析结果和外源基因的拷贝数 | 第71页 |
| 4． 转基因植株及后代的遗传分析 | 第71-72页 |
| 5． 染色体原位杂交结果 | 第72-73页 |
| 6． RT-PCR分析结果 | 第73-74页 |
| 7． 成活率分析 | 第74页 |
| 8． 种子萌发率分析结果 | 第74页 |
| 9． 生长量分析结果 | 第74-77页 |
| 10． 耐盐小麦后代的田间产量分析结果 | 第77-78页 |
| 11． Na~+，K~+分析结果 | 第78-80页 |
| 12． Ubinqutin启动子对pROK_2/AtNHX1基因转化小麦的影响 | 第80-83页 |
| 实验二 高羊茅Na~+/H~+逆向转运蛋白基因的克隆 | 第83-92页 |
| 1． 材料来源 | 第83页 |
| 2． 高羊茅(绿洲)Na~+/H~+逆向转运蛋白基因FaNHX1部分片断的克隆 | 第83-84页 |
| 3． Na~+/H~+逆向转运蛋白基因FaNHX1 3~、末端的获得 | 第84-85页 |
| 4． Na~+/H~+逆向转运蛋白基因FaNHX1 5~、末端的获得 | 第85-87页 |
| 5． Na~+/H~+逆向转运蛋白基因全长cDNA的获得 | 第87-92页 |
| 实验三 根瘤农杆菌介导将大麦叶片型α-硫荃基因DB4导入小麦获得转基因植株及后代 | 第92-98页 |
| 1． 转基因植株的再生 | 第92-93页 |
| 2． 抗性植株的PCR和 Southern杂交分析 | 第93-94页 |
| 3． 转基因植株后代的遗传 | 第94-95页 |
| 4． 转基因植株后代的离体白粉病抗性分析 | 第95页 |
| 5． 转基因植株后代的大田抗白粉病分析和遗传分析 | 第95-98页 |
| 第四部分 讨论 | 第98-107页 |
| 1． Na~+/H~+逆向转运蛋白基因和α-thionin基因在提高小麦耐盐和抗白粉病中的作用 | 第98-100页 |
| 1．1 Na~+/H~+逆向转运蛋白在转基因小麦中的作用机制 | 第98-100页 |
| 1．2 α-thionin基因对提高小麦白粉病抗性的作用 | 第100页 |
| 2． 小麦农杆菌转化的影响因素 | 第100-103页 |
| 2．1 材料的基因型 | 第100-101页 |
| 2．2 转化材料的类型和状态 | 第101-102页 |
| 2．3 影响转化的其它因素:菌株类型及浓度、共培养温度和时间 | 第102-103页 |
| 2．4 筛选方式和筛选剂对效率的影响 | 第103页 |
| 3． 外源基因的整合位点、拷贝数以及其与表达的关系 | 第103-104页 |
| 3．1 外源 DNA的整合位点和拷贝数 | 第103-104页 |
| 3．2 整合位点和表达效率的关系 | 第104页 |
| 4． 转基因植物分子鉴定的主要问题以及解决办法 | 第104-106页 |
| 4．1 Southern杂交的难度 | 第104-105页 |
| 4．2 PCR检测假阳性和非特异性 | 第105页 |
| 4．3 PCR扩增条带不清晰或无扩增带 | 第105-106页 |
| 5． 外源基因表达的RT-PCR分析以及需要注意的问题 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-117页 |
| 在读期间发表的文章、获奖情况和参与的课题 | 第117-118页 |
| 论文的创新性和不足之处 | 第118页 |
| 致谢 | 第118-120页 |
| 学位论文评阅及答辩情祝表 | 第120页 |
