| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-20页 |
| ·研究的目的和意义 | 第12页 |
| ·国内外研究现状 | 第12-20页 |
| ·细胞因子的概述 | 第12-13页 |
| ·IL-18 基因的简述 | 第13-20页 |
| 第二章 CHIL-18 重组蛋白的原核表达及多抗的制备 | 第20-33页 |
| ·材料和方法 | 第20-28页 |
| ·实验动物、菌株和原核表达载体 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·鸡外周血淋巴细胞（PBL）的培养及反转录产物的制备 | 第20-21页 |
| ·ChIL-18 基因部分片段的扩增 | 第21-22页 |
| ·ChIL-18 基因在 T 载体中的克隆 | 第22-25页 |
| ·ChIL-18 部分片段在 pET-30a 载体中的克隆 | 第25-26页 |
| ·重组 ChIL-18 蛋白在 E.coli 中的诱导表达 | 第26页 |
| ·兔抗 ChIL-18 血清的制备及鉴定 | 第26-28页 |
| ·结果 | 第28-32页 |
| ·ChIL-18 基因片段的扩增结果 | 第28页 |
| ·质粒 T-ChIL-18 的鉴定 | 第28-30页 |
| ·重组表达质粒 pET-ChIL-18 的鉴定结果 | 第30页 |
| ·pET-ChIL-18 转化菌的 SDS-PAGE 分析结果 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白 ChIL-18 的表达形式的鉴定结果 | 第31页 |
| ·兔抗 ChIL-18 血清的 Western blot 鉴定 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-33页 |
| ·刺激原的选择 | 第32页 |
| ·扩增片段的选择 | 第32-33页 |
| 第三章 稳定表达 CHIL-18 蛋白 CHO 细胞系的建立 | 第33-46页 |
| ·材料和方法 | 第33-38页 |
| ·真核表达载体和细胞 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第33-35页 |
| ·CHO 细胞的培养 | 第35-36页 |
| ·G418 对 CHO 细胞最小致死浓度的确定 | 第36页 |
| ·脂质体 LipofectamineTM2000 转染 CHO 细胞 | 第36页 |
| ·稳定表达 ChIL-18F 与 ChIL-18M 蛋白 CHO 细胞株的筛选 | 第36页 |
| ·稳定表达 ChIL-18 蛋白的细胞系的鉴定 | 第36-38页 |
| ·结果 | 第38-43页 |
| ·ChIL-18F 和 ChIL-18M 基因片段的扩增 | 第38页 |
| ·T-ChIL-18F 和 T-ChIL-18M 质粒的鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组表达质粒 pEGFP-ChIL-18F 和 pEGFP-ChIL-18M 的鉴定 | 第39页 |
| ·G418 最小致死浓度的确定 | 第39-40页 |
| ·转染 CHO 细胞中报告基因的表达 | 第40-41页 |
| ·稳定表达 ChIL-18 细胞系的检测 | 第41-43页 |
| ·讨论 | 第43-46页 |
| ·宿主细胞的选择 | 第43-44页 |
| ·载体的选择 | 第44页 |
| ·转染方式与试剂的选择 | 第44页 |
| ·阳性高表达细胞克隆的筛选 | 第44-45页 |
| ·ChIL-18F 和 ChIL-18M 蛋白细胞系的表达差异 | 第45-46页 |
| 第四章 鸡 IL-18 单克隆抗体的研制 | 第46-54页 |
| ·材料和方法 | 第46-50页 |
| ·实验动物和细胞 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·小鼠的免疫 | 第46页 |
| ·细胞融合 | 第46-48页 |
| ·以 IFA 筛选阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第48页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的克隆化 | 第48页 |
| ·强阳性杂交瘤细胞的稳定性检测 | 第48-49页 |
| ·单抗腹水的制备 | 第49页 |
| ·单抗生物学特性的鉴定 | 第49-50页 |
| ·利用单抗检测 MDV 感染鸡脾脏中的 IL-18 蛋白 | 第50页 |
| ·实验结果 | 第50-52页 |
| ·ChIL-18 单抗的筛选 | 第50页 |
| ·单抗的亚类鉴定结果 | 第50-51页 |
| ·单抗腹水 IFA 效价的测定结果 | 第51页 |
| ·单抗与原核重组蛋白 ChIL-18 的 Western blot 的结果 | 第51-52页 |
| ·利用单抗检测感染 MDV 鸡脾脏中的 IL-18 蛋白结果 | 第52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 第五章 全文结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简历 | 第64页 |
