| 缩略语表 | 第1-12页 |
| 中文摘要 | 第12-15页 |
| 英文摘要 | 第15-18页 |
| 前言 | 第18-59页 |
| 文献回顾一：类风湿关节炎治疗及相关研究进展 | 第20-48页 |
| 文献回顾二：不同血清型腺相关病毒载体研究进展 | 第48-57页 |
| 实验流程示意图 | 第57-58页 |
| 腺相关病毒载体载体生产原理示意图 | 第58-59页 |
| 正文 | 第59-152页 |
| 第一部分 携带人或大鼠肿瘤坏死因子受体：Fc基因重组腺相关病毒的构建 | 第59-82页 |
| 一、实验材料 | 第59-60页 |
| 1.生化试剂 | 第59页 |
| 2.工具酶、试剂盒等 | 第59-60页 |
| 3.质粒、菌株和细胞 | 第60页 |
| 4.主要仪器设备 | 第60页 |
| 二、实验方法 | 第60-71页 |
| 1.重组载体质粒pSNAV-1／human sTNFRⅡ：Fc的构建 | 第60-64页 |
| ·人肿瘤坏死因子Ⅱ型受体胞外区基因扩增 | 第60-62页 |
| ·人IgG1 Fc段基因的扩增 | 第62页 |
| ·人TNFR：Fc融合基因的连接及克隆 | 第62-64页 |
| 2.重组载体质粒pSNAV-1／rat sTNFRⅡ：Fc的构建 | 第64-66页 |
| ·大鼠肿瘤坏死因子Ⅱ型受体胞外区基因扩增 | 第64-65页 |
| ·大鼠IgG1 Fc段基因的扩增 | 第65页 |
| ·大鼠TNFR：Fc融合基因的连接及克隆 | 第65-66页 |
| 3.稳定携带pSNAV1-hTNFR：Fc或pSNAV1-rat TNFR：Fc质粒载体细胞株的建立 | 第66-67页 |
| 4.携带人或大鼠肿瘤坏死因子受体：Fc融合基因的重组腺相关病毒的大规模制备 | 第67页 |
| 5.携带人或大鼠肿瘤坏死因子受体：Fc融合基因的重组腺相关病毒的质量控制 | 第67-71页 |
| ·AAV载体本身的结构确认 | 第67页 |
| ·病毒颗粒纯度 | 第67-68页 |
| ·病毒滴度测定 | 第68-71页 |
| ·重组腺相关病毒的电镜分析 | 第71页 |
| 三、实验结果 | 第71-79页 |
| 1.重组载体质粒pSNAV1-hTNFR：Fc的构建 | 第71-73页 |
| 2.重组载体质粒pSNAV1-ratTNFR：Fc的构建 | 第73-75页 |
| 3.重组腺相关病毒的质量控制结果 | 第75-79页 |
| ·重组腺相关病毒外壳蛋白分子量及纯度测定 | 第76-77页 |
| ·离子交换色谱测定重组腺相关病毒颗粒纯度 | 第77页 |
| ·重组腺相关病毒颗粒数(滴度)测定 | 第77-78页 |
| ·重组腺相关病毒的电镜分析 | 第78-79页 |
| 四、讨论 | 第79-81页 |
| 五、小结 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-87页 |
| 第二部分 重组腺相关病毒载体介导外源基因于体外和体内的表达研究 | 第87-105页 |
| 一、实验材料 | 第87-88页 |
| 1.试剂 | 第87-88页 |
| 2.细胞株 | 第88页 |
| 3.实验动物 | 第88页 |
| 4.主要仪器设备 | 第88页 |
| 二、实验方法 | 第88-92页 |
| 1.重组腺相关病毒体外表达及TNFα中和活性研究 | 第88-89页 |
| ·重组腺相关病毒的体外表达 | 第88-89页 |
| ·不同血清型重组腺相关病毒的生物学活性研究 | 第89页 |
| 2.不同血清型重组腺相关病毒体内表达 | 第89-92页 |
| ·携带绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的腺相关病毒于大鼠体内表达 | 第89-90页 |
| ·肌肉单次给药表达 | 第89-90页 |
| ·膝踝关节腔单次给药表达 | 第90页 |
| ·不同血清型重组腺相关病毒体内表达动力学 | 第90-92页 |
| ·人、大鼠基因肌肉单次给药表达动力学 | 第90页 |
| ·大鼠基因膝踝关节腔单次给药表达动力学 | 第90-91页 |
| ·人来源融合基因肌肉表达组的抗体测定 | 第91页 |
| ·大鼠来源融合基因肌肉表达组血清TNFα中和活性测定 | 第91-92页 |
| 三、实验结果 | 第92-99页 |
| 1.重组病毒体外表达和TNFα中和活性测定 | 第92-95页 |
| 2.携带绿色荧光蛋白(GFP)报告基因不同血清型重组病毒的体内表达 | 第95页 |
| 3.不同血清型重组腺相关病毒体内表达动力学 | 第95-97页 |
| 4.大鼠来源融合基因肌肉表达组血清TNFα中和活性测定 | 第97-99页 |
| 四、讨论 | 第99-103页 |
| 五、小结 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-107页 |
| 第三部分 重组腺相关病毒载体介导的大鼠肿瘤坏死因子受体：Fc基因对大鼠关节炎的治疗研究 | 第107-150页 |
| 第一节 大鼠类风湿关节炎模型的建立 | 第107-113页 |
| 一、实验材料 | 第107-108页 |
| 1.实验动物 | 第107页 |
| 2.试剂 | 第107-108页 |
| 3.主要仪器设备 | 第108页 |
| 二、实验方法 | 第108-109页 |
| 1.佐剂型大鼠关节炎模型的建立及注射部位对模型成功率的影响 | 第108页 |
| 2.AIA诱导不同品系大鼠的比较 | 第108页 |
| 3.Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型的建立及其诱导不同品系大鼠的比 | 第108页 |
| 4.大鼠关节炎病变评分标准 | 第108-109页 |
| 5.大鼠关节腔TNFα含量测定 | 第109页 |
| 三、结果： | 第109-111页 |
| 1.佐剂大鼠关节炎模型建立及不同注射部位对大鼠关节炎指数影响 | 第109-110页 |
| 2.AIA尾根部注射诱导不同品系大鼠关节炎的比较 | 第110页 |
| 3.Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型的建立及其诱导不同品系大鼠的比较 | 第110-111页 |
| 4.大鼠关节腔TNFα含量测定 | 第111页 |
| 四、讨论 | 第111-113页 |
| 第二节 rAAV1，rAAV2载体介导的大鼠肿瘤坏死因子受体：Fc基因对大鼠关节炎的治疗研究 | 第113页 |
| 一、实验材料 | 第113页 |
| 1.实验动物 | 第113页 |
| 2.试剂 | 第113页 |
| 3.主要仪器设备 | 第113页 |
| 二、实验方法 | 第113-116页 |
| (一) 实验动物分组及给药方案 | 第113-114页 |
| (二) 宏观检测指标 | 第114-115页 |
| 1.大鼠踝关节炎症评分标准 | 第114页 |
| 2.大鼠踝关节X光片检测 | 第114页 |
| 3.大鼠踝关节组织化学检测 | 第114-115页 |
| 4.大鼠踝关节病理检测 | 第115页 |
| 5.大鼠脾脏重量差异 | 第115页 |
| (三) 免疫、化学检测指标 | 第115-116页 |
| 1.ELISA测定大鼠血清、踝关节匀浆细胞因子 | 第115-116页 |
| 2.大鼠脾脏淋巴细胞体外增殖检测 | 第116页 |
| 3.大鼠脾脏淋巴细胞培养上清一氧化氮(NO)检测 | 第116页 |
| 4.流式细胞术(Flow cytometry，FCM)检测大鼠脾脏T淋巴细胞亚群 | 第116页 |
| 三、实验结果 | 第116-145页 |
| (一) 宏观检测指标 | 第116-135页 |
| 1.CIA大鼠踝关节炎症评分结果 | 第116页 |
| ·rAAV2／ratTNFR：Fc抑制Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎效果 | 第116-120页 |
| ·踝关节内注射不同剂量rAAV2／ratTNFR：Fc抑制大鼠关节炎效果 | 第116-118页 |
| ·踝关节注射不同剂量rAAV2／ratTNFR：Fc大鼠后足足径测量结果 | 第118-120页 |
| ·不同血清型重组病毒不同给药途径抑制CIA大鼠关节炎效果 | 第120-124页 |
| ·不同血清型重组病毒双侧踝关节给药抑制CIA大鼠关节炎效果 | 第120-121页 |
| ·不同血清型重组病毒肌肉给药抑制CIA大鼠关节炎效果 | 第121-122页 |
| ·不同血清型重组病毒双侧踝关节给药大鼠后足足径测量结果 | 第122-124页 |
| ·不同血清型重组病毒肌肉给药大鼠后足足径测量结果 | 第124页 |
| 2.大鼠踝关节X光片检测 | 第124页 |
| 3.大鼠关节给药组踝关节组织化学检测 | 第124-128页 |
| 4.大鼠踝关节病理检测 | 第128-132页 |
| 5.大鼠脾脏重量差异 | 第132-135页 |
| (二) 免疫、化学检测指标 | 第135-145页 |
| 1.ELISA测定各组大鼠细胞因子测定 | 第135-140页 |
| 2.大鼠脾脏淋巴细胞体外增殖检测 | 第140-141页 |
| 3.鼠脾脏淋巴细胞培养上清一氧化氮(NO)检测 | 第141-143页 |
| 4.流式细胞术检测大鼠脾脏T淋巴细胞亚群 | 第143-145页 |
| 四、讨论 | 第145-149页 |
| 五、小结 | 第149-150页 |
| 参考文献 | 第150-152页 |
| 个人简历 | 第152-154页 |
| 致谢 | 第154-155页 |
| 附录1 human TNFR序列 | 第155-157页 |
| 附录2 human IgG1 Fc序列 | 第157-158页 |
| 附录3 human TNFR：Fc连接区序列 | 第158-160页 |
| 附录4 rat TNFR序列 | 第160-161页 |
| 附录5 rat IgG1 Fc序列 | 第161-163页 |
| 附录6 rat TNFR：Fc连接区序列 | 第163-165页 |
