| 图表目录 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 研究论文 | 第10-35页 |
| 1 引言 | 第10-11页 |
| 2 材料 | 第11-13页 |
| 2．1 药品和试剂 | 第11页 |
| 2．2 仪器 | 第11-12页 |
| 2．3 菌株、载体及细胞株 | 第12-13页 |
| 2．4 克隆用培养物及细胞培养基 | 第13页 |
| 2．5 缓冲液 | 第13页 |
| 3 方法 | 第13-19页 |
| 3．1 质粒构建和制备 | 第13-16页 |
| 3．1．1 正常肝组织细胞基因组 DNA的分离提取 | 第13-14页 |
| 3．1．2 感受态细胞的制备 | 第14页 |
| 3．1．3 PCR反应 | 第14页 |
| 3．1．4 PCR产物连接至pGL3-Basic质粒载体 | 第14-15页 |
| 3．1．5 连接产物或质粒转化入感受态细胞 | 第15页 |
| 3．1．6 质粒的小量制备 | 第15-16页 |
| 3．1．7 质粒的大量制备 | 第16页 |
| 3．2 细胞培养及转染 | 第16-17页 |
| 3．3 荧光素酶活性测定 | 第17页 |
| 3．4 中药提取物的制备和分离 | 第17页 |
| 3．5 中药提取物的筛选 | 第17页 |
| 3．6 细胞总RNA的制备 | 第17-18页 |
| 3．7 细胞总蛋白的制备 | 第18页 |
| 3．8 应用 LDLR/Luc检测决明子及普伐他汀对报告基因表达的影响 | 第18-19页 |
| 3．9 RR-PCR检测 LDLR mRNA水平 | 第19页 |
| 3．10 Western Blot检测 LDLR蛋白质表达水平 | 第19页 |
| 4 实验结果 | 第19-29页 |
| 4．1 LDL侧荧光素酶报告基因质粒鉴定 | 第20页 |
| 4．2 LDLR/Luc系统的条件优化 | 第20-23页 |
| 3．2．1 细胞接种密度对 LDLR/Luc活性的影响 | 第21页 |
| 3．2．2 转染细胞培养时间对 LDLR/Luc活性的影响 | 第21-22页 |
| 3．2．3 检测底物用量的确定 | 第22-23页 |
| 4．3 LDLR/Luc系统的应用 | 第23-24页 |
| 3．3．1 利用 LDLR/Luc系统检测普法他汀对报告基因活性的影响 | 第23页 |
| 3．3．2 LDLR/Luc系统对中药提取物的筛选 | 第23-24页 |
| 4．4 决明子对LDLR/Luc报告基因活性的影响 | 第24-25页 |
| 4．5 决明子对 LDLR转录的影响 | 第25-27页 |
| 3．5．1 细胞总RNA的提取结果 | 第25-26页 |
| 3．5．2 RT-PCR方法检测决明子对LDLR转录的影响 | 第26-27页 |
| 4．6 决明子醇提物对 LDLR蛋白表达的影响 | 第27-29页 |
| 5 讨论 | 第29-32页 |
| 5．1 LDLR/Luc系统构建原理及阳性对照药物的选择 | 第29-30页 |
| 5．2 LDLR/Luc用于高通量筛选的可行性 | 第30页 |
| 5．3 LDLR/Luc系统应用于中药研究 | 第30-31页 |
| 5．4 决明子等中药降脂作用机理的探讨 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-35页 |
| 文献综述 | 第35-54页 |
| 药物筛选研究方法进展及在中药研究中的应用 | 第35-54页 |
| 摘要 | 第36-37页 |
| 1 引言 | 第37页 |
| 2 在药物筛选中应用的重要技术 | 第37-46页 |
| 2．1 生物芯片与药物筛选 | 第37-42页 |
| 2．1．1 生物芯片在药物靶点发现与药物作用机制研究中的应用 | 第38-41页 |
| 2．1．2 生物芯片作为超高通量筛选平台的应用 | 第41-42页 |
| 2．2 报告基因在药物筛选中的应用 | 第42-45页 |
| 2．2．1 基于报告基因药物筛选模型的构建元件 | 第42-43页 |
| 2．2．2 报告基因的选择与应用 | 第43-45页 |
| 2．3 噬菌体展示技术与在药物筛选中的应用 | 第45-46页 |
| 3 高通量药物筛选及应用 | 第46-48页 |
| 4 中药现代化研究与药物筛选 | 第48-50页 |
| 5 结语 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 声明 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 在读期间论文发表情况 | 第56页 |
