| 内容提要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 综述 | 第11-31页 |
| 1 基因工程制药的发展与现状 | 第11-15页 |
| 2 毕赤酵母表达系统 | 第15-23页 |
| 2．1 毕赤酵母表达系统的特点 | 第16-17页 |
| 2．2 甲醇代谢途径 | 第17页 |
| 2．3 影响外源蛋白在巴斯德毕赤酵母中表达的因素 | 第17-23页 |
| 3 TRAIL与肿瘤治疗 | 第23-31页 |
| 3．1 TRAIL及其受体 | 第23-25页 |
| 3．2 TRAIL诱导突变细胞的凋亡 | 第25-26页 |
| 3．3 TRAIL诱导细胞凋亡机制 | 第26-27页 |
| 3．4 TRAIL在肿瘤治疗中的研究进展 | 第27-29页 |
| 3．5 重组TRAIL国内外研究现状 | 第29-31页 |
| 第一部分 RHSTRAIL的发酵培养 | 第31-47页 |
| 1 材料 | 第31-34页 |
| 1．1 菌株与试剂 | 第31页 |
| 1．2 仪器与设备 | 第31-32页 |
| 1．3 发酵培养基 | 第32-34页 |
| 2 方法 | 第34-37页 |
| 2．1 生物反应器 | 第34页 |
| 2．2 发酵参数控制 | 第34-35页 |
| 2．3 摇瓶培养 | 第35页 |
| 2．4 补料分批发酵 | 第35-36页 |
| 2．5 菌种表型鉴定 | 第36页 |
| 2．6 分析方法 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-42页 |
| 3．1 菌株表型鉴定 | 第37-38页 |
| 3．2 不同培养基对RHSTRAIL发酵的影响 | 第38页 |
| 3．3 诱导OD对蛋白表达的影响 | 第38-39页 |
| 3．4 甲醇诱导周期对蛋白表达的影响 | 第39-40页 |
| 3．5 甲醇诱导浓度对蛋白表达的影响 | 第40-41页 |
| 3．6 PH对蛋白表达的影响 | 第41页 |
| 3．7 补料分批培养高密度发酵表达外源蛋白 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-47页 |
| 4．1 菌株表型 | 第42-43页 |
| 4．2 培养基 | 第43页 |
| 4．3 PH值 | 第43-44页 |
| 4．4 溶氧 | 第44页 |
| 4．5 菌体密度 | 第44-45页 |
| 4．6 甲醇浓度 | 第45页 |
| 4．7 高密度发酵 | 第45-47页 |
| 第二部分 RHSTRAIL的分离纯化及理化性质 | 第47-64页 |
| 1 材料 | 第47-48页 |
| 1．1 试剂与缓冲液 | 第47页 |
| 1．2 WESTERN BLOTTING试剂 | 第47-48页 |
| 1．3 仪器设备 | 第48页 |
| 2 方法 | 第48-51页 |
| 2．1 硫酸铵沉淀 | 第48页 |
| 2．2 凝胶色谱法 | 第48页 |
| 2．3 阴离子交换法 | 第48-49页 |
| 2．4 凝胶色谱法 | 第49页 |
| 2．5 纯化蛋白的理化性质检测 | 第49-51页 |
| 3 结果 | 第51-59页 |
| 3．1 硫酸铵沉淀 | 第51页 |
| 3．2 SEPHADEX G25脱盐 | 第51-52页 |
| 3．3 Q SEPHAROSE FAST FLOW离子交换层析 | 第52-54页 |
| 3．4 SEPHADEX G50 FINE凝胶层析 | 第54-56页 |
| 3．5 蛋白分子量测定 | 第56-57页 |
| 3．6 WESTERN BLOTTING分析结果 | 第57页 |
| 3．7 等电点 | 第57-58页 |
| 3．8 N-糖基化分析 | 第58-59页 |
| 3．9 RHSTRAIL蛋白表观特征与溶解性 | 第59页 |
| 4 讨论 | 第59-64页 |
| 4．1 酵母表达上清的分级沉淀 | 第59页 |
| 4．2 分离纯化 | 第59-60页 |
| 4．3 蛋白质分子量 | 第60-63页 |
| 4．4 蛋白质等电点 | 第63页 |
| 4．5 N-糖基化修饰 | 第63-64页 |
| 第三部分 RHSTRAIL的活性检测 | 第64-72页 |
| 1 材料 | 第64-66页 |
| 1．1 细胞株 | 第64页 |
| 1．2 试剂 | 第64页 |
| 1．3 细胞培养用液 | 第64-66页 |
| 1．4 仪器 | 第66页 |
| 2 方法 | 第66-68页 |
| 2．1 细胞培养 | 第66页 |
| 2．2 生物活性测定 | 第66-68页 |
| 3 结果 | 第68-70页 |
| 3．1 形态观察 | 第68页 |
| 3．2 细胞凋亡DNA片段 | 第68-69页 |
| 3．3 MTT法检测诱导肿瘤细胞细胞凋亡活性 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-72页 |
| 第四部分 RHSTRAIL空间结构预测 | 第72-76页 |
| 1 方法 | 第72页 |
| 2 结果 | 第72-74页 |
| 2．1 ANTHEPORT中五种方法对TRAIL二级结构预测结果 | 第72-73页 |
| 2．2 ANTHEPORT中五种方法对TRAIL二级结构预测叠加结果 | 第73页 |
| 2．3 PHD对TRAIL序列预测结果 | 第73-74页 |
| 2．4 SWISS-MODEL对TRAIL三级结构预测 | 第74页 |
| 3 讨论 | 第74-76页 |
| 3．1 蛋白质二级结果预测 | 第74-75页 |
| 3．2 TRAIL三级结构的预测 | 第75-76页 |
| 小结 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 英文缩略词表 | 第86-88页 |
| 附图 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
