抗冷冻蛋白基因（THP）遗传转化草菇的研究
| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-12页 |
| 第1部分 概述 | 第12-31页 |
| 1 草菇保鲜研究进展 | 第12-16页 |
| ·草菇的生物学特性及采收后的生理变化 | 第12-13页 |
| ·草菇衰老过程的分子机理 | 第13-14页 |
| ·草菇的保鲜方法 | 第14-16页 |
| 2 抗冷冻蛋白的作用机理及应用研究进展 | 第16-23页 |
| ·抗冷冻蛋白基因类型 | 第16-19页 |
| ·抗冷冻蛋白的生物作用 | 第19页 |
| ·AFP的抗冷冻作用机理 | 第19-21页 |
| ·抗冷冻蛋白及抗冷冻蛋白基因的应用 | 第21-23页 |
| 3 食用菌遗传转化研究进展 | 第23-29页 |
| ·遗传转化方法 | 第24-27页 |
| ·启动子和筛选标记 | 第27-29页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第29页 |
| 5 技术路线 | 第29-31页 |
| 第2部分 草菇转化体系的建立 | 第31-50页 |
| 1 材料与方法 | 第31-40页 |
| ·草菇菌株及培养基 | 第31页 |
| ·质粒及细菌培养基 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·抗性标记试剂的筛选 | 第31-32页 |
| ·V1308对潮霉素的敏感性测验 | 第32页 |
| ·基因枪转化法 | 第32-35页 |
| ·转化子的鉴定 | 第35-40页 |
| ·GUS组织化学分析 | 第35-36页 |
| ·Southern Blotting检测 | 第36-40页 |
| ·转化子的出菇试验 | 第40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-48页 |
| ·抗性标记试剂的筛选 | 第40-42页 |
| ·V1308对潮霉素的敏感性测定 | 第42-44页 |
| ·草菇外植体的渗透处理 | 第44页 |
| ·不同轰击参数对草菇相对转化率的影响 | 第44页 |
| ·V1308转化子的鉴定 | 第44-47页 |
| ·转基因草菇的出菇实验及检测 | 第47-48页 |
| 3 结论 | 第48-50页 |
| 第3部分 THP基因的克隆与草菇表达载体的构建 | 第50-62页 |
| 1 材料与方法 | 第50-58页 |
| ·昆虫、质粒、菌株 | 第50页 |
| ·酶及试剂 | 第50页 |
| ·PCR引物的设计 | 第50页 |
| ·Budwarm mRNA的提取与转化 | 第50-51页 |
| ·THP基因的RT-PCR扩增 | 第51页 |
| ·THP片段的回收 | 第51-52页 |
| ·THP片段与T-Vector的连接 | 第52页 |
| ·质粒pGTHP的转化 | 第52-53页 |
| ·质粒pGTHP的提取 | 第53-54页 |
| ·质粒pGTHP的PCR扩增 | 第54页 |
| ·THP基因的序列测定 | 第54页 |
| ·接头的设计与合成 | 第54页 |
| ·接头的退火 | 第54页 |
| ·质粒pCAMBIA1301的双酶切反应 | 第54-55页 |
| ·质粒pGTHP4的双酶切反应 | 第55-56页 |
| ·目的片段的连接与环化 | 第56页 |
| ·质粒pCTH823的转化与提取 | 第56页 |
| ·质粒pCTH823的鉴定 | 第56-58页 |
| ·PCR扩增鉴定 | 第56-57页 |
| ·酶切鉴定 | 第57-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-60页 |
| ·RT-PCR的扩增 | 第58页 |
| ·质粒pGTHP的PCR扩增 | 第58页 |
| ·THP基因的序列测定 | 第58-59页 |
| ·表达载体pCTH823的构建 | 第59页 |
| ·表达载体pCTH823的鉴定 | 第59-60页 |
| ·PCR扩增鉴定 | 第59-60页 |
| ·酶切鉴定 | 第60页 |
| 3 结论 | 第60-62页 |
| 第4部分 THP基因转化草菇 | 第62-81页 |
| 1 材料与方法 | 第62-69页 |
| ·质粒与试剂 | 第62页 |
| ·基因枪轰击元件 | 第62页 |
| ·草菇菌株与培养基 | 第62-63页 |
| ·草菇对潮霉素的敏感性测定 | 第63页 |
| ·草菇外植体的制备 | 第63页 |
| ·基因枪转化法 | 第63-65页 |
| ·转化子的筛选 | 第65页 |
| ·V34转化子的鉴定 | 第65-69页 |
| ·菌丝的收集 | 第65页 |
| ·草菇总DNA的提取 | 第65-66页 |
| ·草菇总DNA的PCR扩增 | 第66页 |
| ·Southern Blotting检测 | 第66-69页 |
| ·转基因草菇的耐低温试验 | 第69页 |
| ·转基因草菇的生物学特性观察 | 第69页 |
| 2 结果与分析 | 第69-80页 |
| ·V1和V34对潮霉素的敏感性测定 | 第70-71页 |
| ·草菇转化子的筛选 | 第71-73页 |
| ·V34转化子的鉴定 | 第73-76页 |
| ·PCR检测 | 第73-75页 |
| ·Southern Blotting检测 | 第75-76页 |
| ·转基因草菇的耐低温试验 | 第76页 |
| ·转基因草菇的生物学特性观察 | 第76-80页 |
| 3 结论 | 第80-81页 |
| 第5部分 讨论 | 第81-84页 |
| 参考文献 | 第84-97页 |
| 附图 | 第97页 |
