| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| Ⅰ 引言 | 第11-27页 |
| 1 人血清白蛋白 | 第11-12页 |
| ·性质与临床意义 | 第11页 |
| ·开发前景 | 第11页 |
| ·利用基因工程生产重族人血清白蛋白 | 第11-12页 |
| 2 植物生物反应器研究进展 | 第12-20页 |
| ·概念及优点 | 第13-14页 |
| ·转基因植物生物反应器表达外源蛋白的策略 | 第14-15页 |
| ·稳定表达系统 | 第14页 |
| ·病毒表达系统 | 第14-15页 |
| ·研究进展 | 第15-18页 |
| ·转基因烟草生物反应器 | 第15-16页 |
| ·转基因马铃薯生物反应器 | 第16-17页 |
| ·其它转基因植物生物反应器 | 第17-18页 |
| ·转基因植物生物反应器研究存在的主要问题 | 第18-20页 |
| ·转基因沉默 | 第18-19页 |
| ·表达水平低 | 第19页 |
| ·下游生产成本高 | 第19-20页 |
| ·安全性 | 第20页 |
| 3 橡胶树研究概况 | 第20-24页 |
| ·产胶生理 | 第20-21页 |
| ·橡胶树的乳管系统 | 第21-22页 |
| ·胶乳合成相关基因克隆 | 第22-23页 |
| ·乳管表达基因的表达分析 | 第23-24页 |
| ·橡胶树基因工程 | 第24页 |
| 4 本研究的目的、意义、内容 | 第24-26页 |
| 5 技术路线 | 第26-27页 |
| Ⅱ 材料与方法 | 第27-43页 |
| 1 材料 | 第27页 |
| ·动植物材料 | 第27页 |
| ·菌种及质粒 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| 2 仪器与设备 | 第27页 |
| 3 方法 | 第27-43页 |
| ·人血清白蛋白(HSA)基因cDNA的克隆、改造和测序 | 第27-34页 |
| ·胎儿肝脏组织总RNA提取 | 第27-28页 |
| ·引物设计 | 第28-29页 |
| ·反转录合成HSA cDNA第一链 | 第29-30页 |
| ·PCR克隆、改造HSA cDNA序列 | 第30页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测RT-PCR产物 | 第30-31页 |
| ·低熔点琼脂糖凝胶电泳回收RT-PCR产物 | 第31页 |
| ·HSA cDNA片段T/A克隆及序列测定 | 第31-34页 |
| ·HSA cDNA RT-PCR产物的连接 | 第31-32页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32页 |
| ·菌落筛选及质粒提取 | 第32-34页 |
| ·重组质粒pTH的EcoRI酶切鉴定 | 第34页 |
| ·HSA cDNA序列测定及分析 | 第34页 |
| ·橡胶延伸因子(REF)启动子的克隆、改造及测序 | 第34-37页 |
| ·橡胶树叶片DNA的提取 | 第34-35页 |
| ·REF启动子的PCR扩增及产物回收 | 第35-37页 |
| ·引物设计 | 第35-36页 |
| ·PCR扩增反应 | 第36-37页 |
| ·PCR产物的T／A克隆、测序 | 第37页 |
| ·REF启动子瞬时表达研究 | 第37-41页 |
| ·REF启动子瞬时表达载体pBIR1、pBIR2的构建 | 第37-39页 |
| ·pTR1、pTR2、pBI121质粒提取与纯化 | 第37-38页 |
| ·pBTR1、pBTR2、pBI121 HindⅢ／BamHⅠ双酶切及酶切片段的连接、转化与鉴定 | 第38-39页 |
| ·REF启动子启动GUS基因在橡胶树叶片中瞬时表达分析 | 第39-41页 |
| ·基因枪轰击受体材料 | 第39-41页 |
| ·GUS瞬时表达的检测 | 第41页 |
| ·HSA cDNA橡胶树乳管表达载体构建 | 第41-43页 |
| ·pTH EcoRⅠ酶切产物、pBIR_2质粒BamHⅠ／SacⅠ双酶切 | 第41-42页 |
| ·BamHⅠ／SacⅠ双酶切产物的连接、转化及阳性重组克隆的鉴定 | 第42-43页 |
| Ⅲ 结果与分析 | 第43-55页 |
| 1 HSA cDNA克隆与改造 | 第43-47页 |
| ·胎儿肝脏组织总RNA提取结果 | 第43页 |
| ·HSA cDNA RT-PCR结果 | 第43页 |
| ·改造的HSA cDNA的T／A克隆及pTH克隆载体的酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·HSA cDNA测序结果 | 第44-47页 |
| 2 橡胶延伸因子(REF)启动子的克隆、改造及测序 | 第47-51页 |
| ·PCR扩增、改造REF启动子结果 | 第47-48页 |
| ·PCR产物T／A克隆结果 | 第48-49页 |
| ·REF启动子测序与序列分析 | 第49-51页 |
| 3 REF启动子瞬时表达研究 | 第51-54页 |
| ·瞬时表达载体pBIR1、pBIR2的构建 | 第51页 |
| ·pBIR1、pBIR2在橡胶树叶片中瞬时表达 | 第51-54页 |
| 4 HSA cDNA橡胶树乳管表达载体的构建 | 第54-55页 |
| ·pTH EcoRⅠ酶切产物、pBIR2 BamHⅠ／SacⅠ双酶切 | 第54页 |
| ·橡胶树乳管表达载体pBIR2H酶切鉴定结果 | 第54-55页 |
| Ⅳ 讨论 | 第55-61页 |
| 1 关于RNA提取方法 | 第55页 |
| 2 PCR扩增的特异性、效率、忠实性 | 第55-57页 |
| 3 REF启动子的特点 | 第57-58页 |
| 4 植物表达载体构建策略 | 第58-61页 |
| Ⅴ 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录 | 第68-74页 |
| 缩写词 | 第74-75页 |
| 图版 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
