| 第一部分 引言 | 第1-29页 |
| 一、 血红蛋白基因研究进展 | 第11-28页 |
| 1． 概述 | 第11页 |
| 2． 透明颤菌（Vitreoscilla sp．）的研究进展 | 第11页 |
| 3． 透明颤菌（Vitreoscilla sp．）的血红蛋白 | 第11-19页 |
| 3．1． 透明颤菌血红蛋白（VHb）的结构及特性 | 第13-14页 |
| 3．2． 透明颤菌血红蛋白的合成 | 第14-16页 |
| 3．3． 透明颤菌血红蛋白基因的克隆、表达与调控 | 第16-17页 |
| 3．4． 透明颤菌血红蛋白的生理功能及其在细胞中的定位 | 第17-18页 |
| 3．5． VHb的作用机理 | 第18-19页 |
| 4． 关于透明颤菌血红蛋白的应用 | 第19-24页 |
| 4．1． 提高基因工程菌的发酵能力 | 第21-22页 |
| 4．2． 转基因植物 | 第22-24页 |
| 5． 植物的血红蛋白 | 第24-28页 |
| 5．1． 植物血红蛋白的分类 | 第24-25页 |
| 5．2． 植物血红蛋白的功能 | 第25-26页 |
| 5．3． 植物血红蛋白基因及其表达 | 第26-28页 |
| 二、 本研究的目的和意义 | 第28-29页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第29-49页 |
| 一、 实验材料 | 第29-33页 |
| 1． 菌株 | 第29页 |
| 2． 有关的质粒 | 第29-30页 |
| 3．主要试剂 | 第30页 |
| 4． 人工合成的寡聚核苷酸片段 | 第30-31页 |
| 5． 培养基 | 第31-32页 |
| 6． 植物受体 | 第32-33页 |
| 二、 方法 | 第33-49页 |
| 1． 质粒DNA的小量提取 | 第33-34页 |
| 2． 质粒DNA的大量制备 | 第34页 |
| 3． DNA的限制性酶切反应 | 第34-35页 |
| 4． 目的DNA片段的电泳回收 | 第35页 |
| 5． VHb基因的PCR扩增 | 第35-36页 |
| 6． 载体与DNA的连接反应 | 第36页 |
| 7． 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第36页 |
| 8． 质粒DNA转化大肠杆菌 | 第36-37页 |
| 9． 透明颤菌血红蛋白的诱导表达 | 第37页 |
| 10． 蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第37-39页 |
| 11． VHb的定性方法 | 第39页 |
| 12． 大肠杆菌生长曲线的测定 | 第39页 |
| 13． 农杆菌感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
| 14． 重组质粒转入农杆菌菌株LBA4404细胞 | 第40页 |
| 15． 烟草的转化 | 第40页 |
| 16． 烟草DNA的提取 | 第40-41页 |
| 17． 植物基因组DNA的Southern blot | 第41-44页 |
| 18． 烟草蛋白的提取 | 第44页 |
| 19． 蛋白烟草的Western blot | 第44-48页 |
| 20． 叶绿素含量的测定 | 第48-49页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第49-68页 |
| 一、 透明颤菌血红蛋白基因的设计 | 第49-51页 |
| 二、 vgbM基因的合成及克隆 | 第51-58页 |
| 1． vgbM基因的合成 | 第51页 |
| 2． vgbM基因的克隆 | 第51-54页 |
| 3． vgbM基因大肠杆菌表达载体的构建 | 第54-55页 |
| 4． VHb在E．coli BL21中的诱导表达及活性分析 | 第55-58页 |
| 三、 vgbM基因植物表达载体的构建 | 第58-60页 |
| 四、 vgbM基因在转基因烟草中的表达 | 第60-68页 |
| 1． 农杆菌介导转化烟草 | 第60-61页 |
| 2． 分析外源基因对转基因烟草生长发育的影响 | 第61页 |
| 2．1． 转基因烟草在培养基中的生长情况 | 第61页 |
| 2．2． 转基因烟草移栽后的生长情况 | 第61页 |
| 3． 转基因烟草的分子检测 | 第61-63页 |
| 3．1． 设计引物并转基因烟草组PCR检测 | 第61-62页 |
| 3．2． Southern 杂交分析 | 第62-63页 |
| 3．3． Western 免疫杂交分析 | 第63页 |
| 4． 转基因烟草代谢、发育情况的比较与分析 | 第63-67页 |
| 4．1． 转基因烟草鲜重变化的测定与分析 | 第63-64页 |
| 4．2． 转基因烟草中叶绿素含量变化的测定与分析 | 第64-67页 |
| 4．3． 转基因烟草的开花结实情况 | 第67页 |
| 5． 对转基因烟草各项指标的总结与分析 | 第67-68页 |
| 第四部分 讨论 | 第68-71页 |
| 第五部分 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
