| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 前 言 | 第11-21页 |
| 1． 氨基糖甙类抗生素——链霉素生物合成基因的研究 | 第12-17页 |
| 2． 链霉菌中次级代谢产物生物合成基因的特征 | 第17-19页 |
| 3． 研究链霉菌S．tenebrarius H6中生物合成基因的立题方向 | 第19-21页 |
| 材料和方法 | 第21-37页 |
| 1 材料 | 第21-28页 |
| 1．1 菌种 | 第21页 |
| 1．2 质粒 | 第21页 |
| 1．3 特殊试剂与酶 | 第21-22页 |
| 1．4 特殊仪器 | 第22页 |
| 1．5 培养基 | 第22-25页 |
| 1．6 常用缓冲液 | 第25-26页 |
| 1．7 杂交用试液 | 第26-28页 |
| 2 方法 | 第28-37页 |
| 2．1 E．coli质粒DNA小量提取 | 第28页 |
| 2．2 E．coli质粒DNA大量提取 | 第28页 |
| 2．3 限制酶切反应 | 第28页 |
| 2．4 去磷酸化反应 | 第28页 |
| 2．5 PCR反应 | 第28-29页 |
| 2．6 DNA电泳及片段回收 | 第29页 |
| 2．7 DNA连接反应 | 第29-30页 |
| 2．8 Southern杂交 | 第30-31页 |
| 2．9 文库筛选—菌落原位杂交 | 第31-32页 |
| 2．10 E．coli DH-5α感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 2．11 质粒DNA转化E．coli DH-5α | 第32-33页 |
| 2．12 E．coli转化子的快速鉴定 | 第33页 |
| 2．13 链霉菌孢子悬液的制备 | 第33页 |
| 2．14 链霉菌总DNA提取方法 | 第33-34页 |
| 2．15 蔗糖梯度离心 | 第34页 |
| 2．16 噬菌体外壳蛋白包装反应 | 第34页 |
| 2．17 噬菌体转导 | 第34-35页 |
| 2．18 黑暗链霉菌原生质体的制备、再生及质粒DNA转化 | 第35-36页 |
| 2．19 变铅青链霉菌S．lividans TK24的发酵及其产物检测 | 第36-37页 |
| 结果与讨论 | 第37-71页 |
| 第一部分： 文库构建 | 第37-45页 |
| 1． 考察最佳溶菌条件 | 第38-40页 |
| 1．1 考察一级培养条件 | 第39页 |
| 1．2 考察二级培养条件 | 第39-40页 |
| 2． 总DNA提取 | 第40页 |
| 3． 总DNA的Sau3AⅠ不完全酶切 | 第40-42页 |
| 3．1 考察终止酶切反应的方法 | 第40页 |
| 3．2 考察酶切反应的最佳酶浓度 | 第40-41页 |
| 3．3 大量总DNA的Sau3AⅠ不完全酶切 | 第41页 |
| 3．4 纯化 | 第41-42页 |
| 4． 质粒载体pKC 505的大量提取，酶处理 | 第42页 |
| 5． 外源片段蔗糖梯度离心、酶处理 | 第42-43页 |
| 6． 连接、包装、转导 | 第43页 |
| 7． 文库质量分析 | 第43-45页 |
| 第二部分： 文库筛选 | 第45-53页 |
| 1 寻找探针 | 第45-50页 |
| 1．1 利用同源基因 | 第45-47页 |
| 1．2 利用自身抗生素生物合成有关基因 | 第47-50页 |
| 1．2．1 分析设计引物 | 第47-49页 |
| 1．2．2 PCR克隆、测序 | 第49页 |
| 1．2．3 分析结果 | 第49-50页 |
| 2 文库筛选 | 第50-53页 |
| 第三部分： 抗生素合成有关基因簇的获得及其分析 | 第53-69页 |
| 1 基因cluster的酶谱分析 | 第53-55页 |
| 2 完整dTDP-葡萄糖-4，6-脱水酶基因的克隆及其ORF分析 | 第55-60页 |
| 3 aprE周围连锁的抗生素生物合成有关基因的分析 | 第60-69页 |
| 3．1 分析（1～1102）片段 | 第63页 |
| 3．2 分析（1103～1462）片段 | 第63-66页 |
| 3．3 分析（－890～0）片段 | 第66-69页 |
| 第四部分： 抗生素合成有关基因的生物学功能研究 | 第69-71页 |
| 1 S．lividans TK24转化子的联合共培养 | 第69页 |
| 2 生物活性检定 | 第69-70页 |
| 3 结果分析 | 第70-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75-78页 |
