| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| ·课题的提出及研究的目的和意义 | 第11-12页 |
| ·文献综述 | 第12-17页 |
| ·龙须草研究现状 | 第12-13页 |
| ·植物无融合生殖研究概况 | 第13-17页 |
| ·植物无融合生殖的概念和类型 | 第13页 |
| ·植物无融合生殖遗传学研究及发生机制分析 | 第13-14页 |
| ·植物无融合生殖鉴别的传统方法 | 第14-15页 |
| ·形态鉴别 | 第14页 |
| ·细胞胚胎学观察 | 第14-15页 |
| ·分子生物学在无融合生殖研究中的应用 | 第15-17页 |
| ·同工酶分析 | 第15页 |
| ·DNA分子标记 | 第15-16页 |
| ·mRNA差异显示技术 | 第16-17页 |
| ·兼性无融合生殖植物的不同后代类型 | 第17页 |
| ·SSR引物开发的研究进展 | 第17-20页 |
| ·基因组文库的构建 | 第17-18页 |
| ·微卫星富集法 | 第18页 |
| ·数据库搜索 | 第18页 |
| ·基于ISSR-PCR的SSR分离 | 第18-19页 |
| ·引物的转移性扩增 | 第19页 |
| ·锚定PCR开发复合SSR引物 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-31页 |
| ·龙须草SSR反应体系的建立 | 第20-23页 |
| ·材料 | 第20页 |
| ·方法 | 第20-23页 |
| ·基因组DNA提取 | 第20-21页 |
| ·SSR-PCR扩增 | 第21-23页 |
| ·引物 | 第21-22页 |
| ·SSR反应体系的优化 | 第22页 |
| ·SSR-PCR退火温度的优化 | 第22页 |
| ·SSR-PCR扩增程序 | 第22页 |
| ·3%琼脂糖凝胶(EB染色)检测 | 第22-23页 |
| ·龙须草SSR引物的分离 | 第23-30页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-30页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第23页 |
| ·锚定PCR开发复合SSR引物 | 第23-27页 |
| ·基因组DNA酶切 | 第23页 |
| ·接头的准备 | 第23-24页 |
| ·接头连接 | 第24页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·扩增产物的克隆测序 | 第25-27页 |
| ·基因特异序列的SSR引物开发 | 第27-28页 |
| ·近缘物种SSR引物的应用 | 第28页 |
| ·引物扩增的琼脂糖电泳筛选 | 第28页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第28-30页 |
| ·变性PAGE凝胶的制备 | 第28-29页 |
| ·电泳 | 第29页 |
| ·染色 | 第29-30页 |
| ·数据统计 | 第30页 |
| ·通过SSR分析星子、山阳杂交组合后代 | 第30页 |
| ·兼性无融合生殖龙须草遗传学研究 | 第30-31页 |
| ·材料 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-31页 |
| ·龙须草田间去雄、杂交试验 | 第30页 |
| ·龙须草杂交后代生殖来源的检测 | 第30-31页 |
| ·杂交后代的种植 | 第30页 |
| ·引物的选择 | 第30-31页 |
| ·杂交后代与亲本基因组DNA提取 | 第31页 |
| ·PCR扩增与检测 | 第31页 |
| ·流式细胞仪检测种子胚和胚乳的倍性水平 | 第31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-49页 |
| ·龙须草SSR反应体系的建立 | 第31-34页 |
| ·DNA提取结果 | 第31-32页 |
| ·紫外分光光度计测定结果 | 第31页 |
| ·0.8%琼脂糖凝胶电泳(EB染色)检测结果 | 第31-32页 |
| ·SSR技术体系的优化结果 | 第32-34页 |
| ·Taq酶浓度 | 第32页 |
| ·dNTP浓度 | 第32-33页 |
| ·Mg~(2+)浓度 | 第33页 |
| ·引物浓度 | 第33-34页 |
| ·优化的SSR反应体系 | 第34页 |
| ·龙须草SSR引物的分离 | 第34-41页 |
| ·锚定PCR开发复合SSR引物 | 第34-36页 |
| ·基因组酶切 | 第34-35页 |
| ·连接产物的PCR扩增 | 第35页 |
| ·阳性克隆的鉴定及引物设计 | 第35-36页 |
| ·锚定PCR开发复合SSR引物筛选结果 | 第36页 |
| ·基因特异性SSR引物和近缘物种引物筛选 | 第36-38页 |
| ·三种途径开发的SSR引物筛选结果 | 第38-39页 |
| ·多态性引物对星子、山阳F1代的检测 | 第39-41页 |
| ·兼性无融合生殖龙须草遗传学研究 | 第41-49页 |
| ·龙须草田间去雄、杂交试验结果 | 第41-42页 |
| ·RAPD分析不同组合F1杂交后代 | 第42-47页 |
| ·衡阳×星子杂交后代的检测 | 第42-43页 |
| ·西峡杂交后代的检测 | 第43-45页 |
| ·星子、山阳杂交后代检测 | 第45-47页 |
| ·流式细胞仪检测单株种子的DNA含量 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-55页 |
| ·在DNA提取实验过程中应注意的问题 | 第49页 |
| ·SSR技术体系的建立 | 第49-50页 |
| ·锚定PCR开发复合SSR引物 | 第50页 |
| ·数据库搜索和近缘物种SSR在龙须草SSR引物开发中的作用 | 第50-51页 |
| ·多态性引物对龙须草杂交F1代的分析检测 | 第51-52页 |
| ·龙须草兼性无融合生殖的特性 | 第52-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 致谢 | 第63页 |