| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 文献综述 | 第10-24页 |
| 1 病原学 | 第10-16页 |
| ·血清型 | 第10-11页 |
| ·生化特征 | 第11页 |
| ·APP培养特性 | 第11-12页 |
| ·主要毒力因子 | 第12-16页 |
| ·Apx毒素 | 第12-14页 |
| ·荚膜多糖 | 第14页 |
| ·脂多糖 | 第14-15页 |
| ·外膜蛋白 | 第15页 |
| ·转铁结合蛋白 | 第15-16页 |
| 2 诊断方法 | 第16-20页 |
| ·血清学诊断方法 | 第16-19页 |
| ·补体结合试验 | 第16页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第16-17页 |
| ·凝集试验 | 第17页 |
| ·环状沉淀试验 | 第17页 |
| ·间接血凝试验 | 第17-18页 |
| ·间接荧光抗体试验 | 第18页 |
| ·乳胶凝集试验 | 第18页 |
| ·免疫扩散试验 | 第18-19页 |
| ·用免疫磁化法来分离菌株 | 第19页 |
| ·分子生物学诊断 | 第19-20页 |
| ·PCR技术 | 第19-20页 |
| ·核酸探针检测技术 | 第20页 |
| 3 猪胸传染性膜肺炎疫苗研究进展 | 第20-24页 |
| ·灭活疫苗 | 第20-21页 |
| ·活疫苗 | 第21页 |
| ·亚单位疫苗 | 第21-22页 |
| ·基因工程缺失苗 | 第22-24页 |
| 试验一 猪胸膜肺炎放线杆菌四川株的分离鉴定 | 第24-32页 |
| 1 材料和方法 | 第24-27页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·病料来源 | 第24页 |
| ·溶液配制 | 第24-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-27页 |
| ·细菌分离 | 第26页 |
| ·形态学观察 | 第26页 |
| ·CAMP试验 | 第26页 |
| ·NAD需求试验 | 第26页 |
| ·血清型鉴定 | 第26页 |
| ·生化试验 | 第26页 |
| ·药敏试验 | 第26页 |
| ·动物试验 | 第26-27页 |
| ·PCR鉴定 | 第27页 |
| 2 结果 | 第27-30页 |
| ·剖检结果 | 第27页 |
| ·培养特性 | 第27-28页 |
| ·形态学观察 | 第28页 |
| ·血清型鉴定 | 第28页 |
| ·生化鉴定结果 | 第28页 |
| ·药敏试验结果 | 第28-29页 |
| ·动物试验结果 | 第29页 |
| ·PCR鉴定结果 | 第29-30页 |
| 3 讨论 | 第30-31页 |
| ·关于猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离 | 第30页 |
| ·关于猪传染性胸膜肺炎的生化鉴定 | 第30页 |
| ·关于猪传染性胸膜肺炎的药敏试验 | 第30-31页 |
| ·关于猪传染性胸膜肺炎的分子生物学鉴定 | 第31页 |
| 4 小结 | 第31-32页 |
| 试验二 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅠA和TbpB基因的克隆、序列分析和原核表达 | 第32-57页 |
| 1 材料与方法 | 第32-44页 |
| ·菌株和质粒 | 第32页 |
| ·酶和其它试剂 | 第32页 |
| ·溶液配制 | 第32-33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化用溶液 | 第32-33页 |
| ·质粒小量提取(Lysis Trtion法)用溶液 | 第33页 |
| ·主要仪器设备 | 第33页 |
| ·引物的设计与合成 | 第33-34页 |
| ·ApxⅠA基因扩增引物的设计与合成 | 第33-34页 |
| ·TbpB基因扩增引物的设计与合成 | 第34页 |
| ·App基因组DNA的提取 | 第34-35页 |
| ·ApxⅠA和TbpB基因的扩增 | 第35页 |
| ·ApxⅠA基因的扩增 | 第35页 |
| ·TbpB基因的扩增 | 第35页 |
| ·克隆载体pMD18-T-ApxⅠA和pMD18-T-TbpB的构建 | 第35-39页 |
| ·ApxⅠA和TbpB基因PCR产物的回收 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·ApxⅠA和TbpB基因与pMD18-T Vector的连接 | 第36-37页 |
| ·ApxⅠA和TbpB基因与pMD18-T Vector的连接物的转化 | 第37页 |
| ·ApxⅠA和TbpB基因重组质粒的小量制备 | 第37-38页 |
| ·ApxⅠA和TbpB基因重组质粒的PCR鉴定 | 第38页 |
| ·ApxⅠA和TbpB基因重组质粒的双酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·表达载体pET32a(+)-ApxⅠA和pET32a(+)-TbpB的构建 | 第39-41页 |
| ·ApxⅠA基因片段和载体pET32a(+)的酶切回收 | 第39页 |
| ·TbpB基因片段和载体pET32a(+)的酶切回收 | 第39页 |
| ·ApxⅠA和TbpB基因片段与表达载体pET32a(+)的连接和转化 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的初步筛选和提取 | 第40页 |
| ·重组原核表达载体质粒PCR鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组原核表达载体质粒的双酶切鉴定 | 第41页 |
| ·ApxⅠA和TbpB基因在pET32a(+)表达系统中的表达与鉴定 | 第41-44页 |
| ·表达菌株大肠杆菌BL21感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·pET32a(+)-ApxⅠA和pET32a(+)-TbpB重组表达质粒转化到BL21 | 第42页 |
| ·ApxⅠA和TbpB蛋白表达 | 第42页 |
| ·ApxⅠA和TbpB基因表达蛋白的鉴定 | 第42-44页 |
| 2 结果 | 第44-52页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅠA和TbpB基因的扩增 | 第44-45页 |
| ·重组质粒pMD18-T-ApxⅠA的PCR和酶切鉴定 | 第45页 |
| ·重组质粒pMD18-T-Tbp B的PCR和酶切鉴定 | 第45页 |
| ·重组质粒pMD18-T-ApxⅠA的测序鉴定 | 第45-47页 |
| ·ApxⅠA基因核苷酸和蛋白质同源性分析 | 第47-48页 |
| ·重组质粒pMD18-T-TbpB的测序测定 | 第48页 |
| ·TbpB基因和蛋白质同源性分析 | 第48-49页 |
| ·重组质粒pET32a(+)-ApxⅠA的PCR和酶切鉴定 | 第49页 |
| ·重组质粒pET32a(+)-TbpB的PCR和酶切鉴定 | 第49页 |
| ·ApxⅠA和TbpB基因在pET32a(+)表达系统中的表达 | 第49-52页 |
| ·重组表达蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第49-51页 |
| ·Western-blotting分析 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-55页 |
| ·ApxⅠA、TbpB基因的扩增和克隆 | 第53-54页 |
| ·序列分析 | 第54页 |
| ·关于pET32a(+)载体选择 | 第54-55页 |
| ·关于pET32a(+)-ApxIA和pET32a(+)-TbpB的表达 | 第55页 |
| 4 小结 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第64页 |
