| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 目录 | 第10-14页 |
| 1 引言 | 第14-44页 |
| ·LFY基因的研究进展 | 第14-20页 |
| ·植物成花机理的研究 | 第14-17页 |
| ·花序分生组织特征基因 | 第14-15页 |
| ·花分生组织特征基因 | 第15-16页 |
| ·花器官特征基因 | 第16-17页 |
| ·LFY基因的作用 | 第17-18页 |
| ·LFY基因的表达调控 | 第18-20页 |
| ·转基因植物的安全性问题 | 第20-22页 |
| ·转基因植物的环境安全性问题 | 第20-22页 |
| ·转基因植物的食品安全性问题 | 第22页 |
| ·解决转基因安全性问题的策略 | 第22-34页 |
| ·去除选择标记基因 | 第23-31页 |
| ·利用共转化系统 | 第23-25页 |
| ·利用位点特异性重组系统 | 第25-29页 |
| ·利用转座子成分去除标记基因 | 第29-30页 |
| ·利用多元自主转化载体系统 | 第30页 |
| ·利用同源序列重组系统 | 第30-31页 |
| ·选用安全的标记基因 | 第31-34页 |
| ·糖类代谢酶标记基因利用 | 第31-32页 |
| ·激素代谢酶标记基因利用 | 第32-33页 |
| ·化合物解毒酶标记基因 | 第33-34页 |
| ·报告基因 | 第34页 |
| ·菊花基因工程研究进展 | 第34-39页 |
| ·转基因菊花育种研究进展 | 第35-38页 |
| ·报告基因的转入 | 第36页 |
| ·花色素调节基因的转入 | 第36页 |
| ·改变株型基因的转入 | 第36-37页 |
| ·抗性基因的转入 | 第37页 |
| ·调节花期基因的转入 | 第37-38页 |
| ·菊花基因工程中存在的问题 | 第38-39页 |
| ·本研究的设计思想 | 第39-44页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第39-40页 |
| ·研究设计和研究内容 | 第40-41页 |
| ·本研究的独创性与新颖之处 | 第41-42页 |
| ·主要技术路线 | 第42-44页 |
| 2 双T-DNA植物表达载体的构建 | 第44-58页 |
| ·材料与方法 | 第44-51页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·菌种与质粒 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| ·主要仪器和设备 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-51页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒转化 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第46页 |
| ·DNA片段的酶切和回收 | 第46-47页 |
| ·双T-DNA载体的构建 | 第47-50页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备和液氮冻融法转化农杆菌 | 第50页 |
| ·根癌农杆菌Ti质粒的提取 | 第50-51页 |
| ·农杆菌中阳性克隆的筛选和鉴定 | 第51页 |
| ·结果与分析 | 第51-57页 |
| ·LFY基因目的片段的获得 | 第51-53页 |
| ·中间载体pCAMBIA1300-LFY的重组及鉴定 | 第53-54页 |
| ·无多克隆位点的载体pCAMBIA1300-的鉴定 | 第54-55页 |
| ·重组质粒pCAMBIA1300-LFY-hpt的鉴定 | 第55-56页 |
| ·植物表达载体向农杆菌转化和转化子的鉴定 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 3 菊花转基因受体系统的建立 | 第58-80页 |
| ·材料与方法 | 第58-61页 |
| ·植物材料和菌株 | 第58页 |
| ·主要试剂仪器以及培养基成分 | 第58-59页 |
| ·菊花不定芽再生体系的建立 | 第59页 |
| ·菊花对抗生素的敏感性试验 | 第59页 |
| ·遗传转化过程中各种条件的优化 | 第59-60页 |
| ·预培养时间的确定 | 第59-60页 |
| ·农杆菌侵染浓度和时间的确定 | 第60页 |
| ·共培养时间和温度的确定 | 第60页 |
| ·生根培养 | 第60页 |
| ·农杆菌介导的菊花叶盘法转化 | 第60-61页 |
| ·根癌农杆菌的活化与及工程菌液的制备 | 第60页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化流程 | 第60-61页 |
| ·数据统计与分析 | 第61页 |
| ·结果与分析 | 第61-75页 |
| ·不同激素组合对叶片不定芽再生的影响 | 第61-64页 |
| ·菊花对抗生素的敏感性试验 | 第64-70页 |
| ·潮霉素对菊花叶片外植体再生的影响 | 第64-66页 |
| ·潮霉素对菊花无菌苗生根的影响 | 第66-67页 |
| ·抑菌抗生素对‘七月桃花'叶片不定芽诱导和组培苗生根的影响 | 第67-70页 |
| ·遗传转化过程中各种条件的优化 | 第70-75页 |
| ·预培养对菊花遗传转化的影响 | 第70-71页 |
| ·菌液浓度和侵染时间对菊花转化效果的影响 | 第71-73页 |
| ·共培养时间和温度对菊花遗传转化的影响 | 第73-74页 |
| ·最佳遗传转化体系的建立 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-80页 |
| ·抗生素种类和浓度的选择 | 第75页 |
| ·菊花遗传转化效率及遗传稳定性 | 第75-80页 |
| 4 无选择标记转基因菊花的筛选 | 第80-102页 |
| ·材料 | 第80页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第80页 |
| ·方法 | 第80-86页 |
| ·潮霉素抗性发芽试验 | 第80-81页 |
| ·基因组DNA的提取和PCR检测 | 第81-82页 |
| ·双探针Southern杂交检测 | 第82-85页 |
| ·试剂的配制 | 第82页 |
| ·探针的制备 | 第82-83页 |
| ·标记探针的检测 | 第83-84页 |
| ·基因组DNA的酶切和电泳 | 第84页 |
| ·DNA的转膜和固定 | 第84-85页 |
| ·杂交 | 第85页 |
| ·洗膜 | 第85页 |
| ·检测 | 第85页 |
| ·转基因植株后代的性状分析 | 第85-86页 |
| ·结果与分析 | 第86-96页 |
| ·T_0代植株目的基因与标记基因共转化频率检测 | 第86-87页 |
| ·共转化植株T_0代Southern blot分析 | 第87-89页 |
| ·转基因植株T_1代目的基因与标记基因分离检测 | 第89-91页 |
| ·T_2代纯合的无标记含有LFY基因的株系的筛选 | 第91-94页 |
| ·T_2代含有LFY基因的纯合株系的性状分析 | 第94-96页 |
| ·讨论 | 第96-102页 |
| ·转基因菊花叶片的再生能力和对转化植株的鉴定 | 第96页 |
| ·转基因植物安全性研究 | 第96-97页 |
| ·无选择标记转基因植株的获得 | 第97-99页 |
| ·共转化系统去除选择标记基因的缺憾与改进策略 | 第99页 |
| ·共转化法与其他去除选择标记方法的比较 | 第99-102页 |
| 5 利用位点特异性重组系统进行多个基因定向叠加 | 第102-114页 |
| ·特定位点基因叠加的原理 | 第102-104页 |
| ·材料与方法 | 第104-107页 |
| ·材料 | 第104页 |
| ·方法 | 第104页 |
| ·重组酶载体pMM-Caggs和pMM-Kozak的构建 | 第104-105页 |
| ·整合载体pARTOS2的构建 | 第105-106页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第106-107页 |
| ·烟草无菌苗的获得 | 第106页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第106-107页 |
| ·转基因烟草的PCR检测和gus检测 | 第107页 |
| ·转基因烟草的Southern杂交 | 第107页 |
| ·结果 | 第107-112页 |
| ·重组酶载体的获得 | 第107-109页 |
| ·整合载体的获得 | 第109-110页 |
| ·pAB100的获得 | 第109-110页 |
| ·pAB200的获得 | 第110页 |
| ·含有目标载体单拷贝烟草的获得 | 第110-112页 |
| ·讨论 | 第112-114页 |
| 6 结论 | 第114-118页 |
| ·研究结论 | 第114-115页 |
| ·存在的问题及展望 | 第115-118页 |
| 参考文献 | 第118-130页 |
| 附表 | 第130-132页 |
| 附录 常用缓冲液及培养基配方 | 第132-134页 |
| 个人简介 | 第134-136页 |
| 获得成果 | 第136-138页 |
| 导师简介 | 第138-140页 |
| 致谢 | 第140页 |
