| 表格索引 | 第1-12页 |
| 图形索引 | 第12-16页 |
| 摘要 | 第16-19页 |
| ABSTRACT | 第19-22页 |
| 缩写符号 | 第22-23页 |
| 第一章 文献综述 | 第23-60页 |
| 1 血栓性疾病及其危害 | 第23页 |
| 2 血栓形成和血栓溶解机制 | 第23-27页 |
| ·血栓形成机制 | 第23-25页 |
| ·栓溶解机制 | 第25-27页 |
| 3 血栓性疾病的治疗 | 第27-28页 |
| 4 溶栓剂的研究进展 | 第28-30页 |
| ·溶栓剂的发展 | 第28-29页 |
| ·新型溶栓剂的开发及发展趋势 | 第29-30页 |
| ·新型溶栓剂的开发 | 第29-30页 |
| ·溶栓剂的发展趋势 | 第30页 |
| 5 微生物来源溶栓剂的研究进展 | 第30-43页 |
| ·微生物来源溶栓剂的研究现状 | 第30-37页 |
| ·链激酶(Streptokinase,SK) | 第32页 |
| ·葡激酶(Staphylokinase,SaK) | 第32-33页 |
| ·纳豆激酶(Nattokinase,NK) | 第33-34页 |
| ·豉纤溶酶与其他来自发酵食品的纤溶酶 | 第34-35页 |
| ·真菌来源的新型纤溶酶 | 第35-36页 |
| ·链霉菌产生的新型纤溶酶 | 第36-37页 |
| ·海洋假单胞菌产生的纤溶酶 | 第37页 |
| ·微生物来源的溶栓剂分子生物学研究 | 第37-43页 |
| ·葡激酶基因的表达及其分子改造 | 第37-39页 |
| ·纳豆激酶基因的表达及其分子改造 | 第39-41页 |
| ·豆豉纤溶酶基因的表达及其分子改造 | 第41-43页 |
| 6 植物内生菌的研究进展 | 第43-46页 |
| ·植物内生菌的定义 | 第43页 |
| ·植物内生菌的分布及生物多样性 | 第43-44页 |
| ·分布 | 第43-44页 |
| ·植物内生菌的多样性 | 第44页 |
| ·植物内生菌与宿主植物的关系 | 第44-45页 |
| ·植物内生菌产生的生理活性物质 | 第45-46页 |
| ·抗肿瘤物质 | 第45页 |
| ·抗菌类物质 | 第45页 |
| ·酶类物质 | 第45-46页 |
| ·其他活性物质 | 第46页 |
| 7 本研究的目的意义及内容 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-60页 |
| 第二章 产新型纤溶酶植物内生菌EJS-3菌株的分离、鉴定 | 第60-75页 |
| 1 材料与方法 | 第60-64页 |
| ·材料 | 第60-62页 |
| ·样品 | 第61页 |
| ·试剂 | 第61页 |
| ·培养基 | 第61页 |
| ·仪器设备 | 第61-62页 |
| ·方法 | 第62-64页 |
| ·内生菌分离方法 | 第62页 |
| ·纤溶酶产生菌的初筛 | 第62页 |
| ·纤溶酶产生菌的复筛 | 第62页 |
| ·纤溶酶产生菌的鉴定 | 第62-63页 |
| ·纤溶活性的测定 | 第63-64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-69页 |
| ·纤溶酶产生菌的分离筛选 | 第64-65页 |
| ·菌种鉴定 | 第65-68页 |
| ·菌株的形态、培养特征及生理生化鉴定 | 第65-66页 |
| ·16S rDNA序列分析鉴定 | 第66-68页 |
| ·BLAST同源性搜索与系统发育树的绘制 | 第68-69页 |
| ·BLAST同源性搜索 | 第68页 |
| ·系统发育树的绘制 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69-70页 |
| 4 本章小结 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-75页 |
| 第三章 内生多粘芽孢杆菌纤溶酶的分离纯化及其性质研究 | 第75-102页 |
| 1 材料与方法 | 第75-82页 |
| ·材料 | 第75-76页 |
| ·菌种 | 第75页 |
| ·培养基 | 第75-76页 |
| ·主要试剂 | 第76页 |
| ·主要仪器设备 | 第76页 |
| ·方法 | 第76-82页 |
| ·纤溶酶粗酶液的制备 | 第77页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第77页 |
| ·纤溶活性的测定 | 第77页 |
| ·纤溶酶的分离纯化 | 第77-79页 |
| ·纤溶酶PPFE-Ⅰ性质研究 | 第79-82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-96页 |
| ·纤溶酶的分离纯化 | 第82-87页 |
| ·硫酸铵分段盐析 | 第82-83页 |
| ·RESOURCE~M Q离子交换层析 | 第83-84页 |
| ·Sephacryl S-300HR凝胶过滤 | 第84页 |
| ·分子量测定 | 第84-86页 |
| ·HPLC纯度鉴定 | 第86页 |
| ·纤溶酶PPFE-Ⅰ分离纯化效果 | 第86-87页 |
| ·纤溶酶PPFE-Ⅰ性质研究 | 第87-96页 |
| ·纤溶酶PPFE-Ⅰ的最适作用温度 | 第87页 |
| ·纤溶酶PPFE-Ⅰ的热稳定性 | 第87-88页 |
| ·纤溶酶PPFE-Ⅰ的最适作用pH | 第88-89页 |
| ·纤溶酶PPFE-Ⅰ的pH稳定性 | 第89页 |
| ·金属离子对纤溶酶PPFE-Ⅰ的影响 | 第89-90页 |
| ·蛋白酶抑制剂对纤溶酶的作用 | 第90-91页 |
| ·纤溶酶PPFE-Ⅰ水解酪蛋白活性的测定 | 第91页 |
| ·纤溶酶PPFE-Ⅰ的酰胺水解活性 | 第91-92页 |
| ·纤溶酶PPFE-Ⅰ对生色底物N-Succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA作用动力学 | 第92-93页 |
| ·纤溶酶体外溶纤性质 | 第93-94页 |
| ·纤溶酶PPFE-Ⅰ对人血纤维蛋白原的作用方式 | 第94页 |
| ·纤溶酶体外血凝块的溶解作用 | 第94-95页 |
| ·纤溶酶体外抗凝作用效果 | 第95-96页 |
| 3 讨论 | 第96-98页 |
| 4 本章小结 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-102页 |
| 第四章 内生多粘芽孢杆菌纤溶酶基因在E.coli中融合表达及其产物纯化 | 第102-133页 |
| 1 材料与方法 | 第102-111页 |
| ·材料 | 第102-104页 |
| ·菌株 | 第102页 |
| ·质粒 | 第102-103页 |
| ·工具酶和化学试剂 | 第103页 |
| ·培养基 | 第103页 |
| ·主要仪器设备 | 第103-104页 |
| ·方法 | 第104-111页 |
| ·目的基因的克隆 | 第104-106页 |
| ·多粘芽孢杆菌基因组的提取 | 第104页 |
| ·多粘芽孢杆菌纤溶酶引物的设计 | 第104页 |
| ·目的基因PCR扩增及产物纯化 | 第104-105页 |
| ·PCR产物与载体pMD19-T的连接 | 第105页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第105页 |
| ·载体pMD19-T连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第105页 |
| ·阳性克隆的筛选、鉴定与测序 | 第105-106页 |
| ·重组质粒测序 | 第106页 |
| ·序列分析 | 第106页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第106-107页 |
| ·表达载体pET-DsbA和目的基因T载体的双酶切及回收 | 第106页 |
| ·表达载体pET-DsbA去磷酸化处理 | 第106-107页 |
| ·目的基因与双酶切表达载体pET-DsbA的连接 | 第107页 |
| ·表达载体pET-DsbA连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第107页 |
| ·阳性克隆酶切鉴定 | 第107页 |
| ·重组质粒测序 | 第107页 |
| ·目的基因在大肠杆菌中的融合表达与可溶性分析 | 第107-108页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第107-108页 |
| ·表达形式鉴定及活性测定 | 第108页 |
| ·表达产物的纯化 | 第108-109页 |
| ·粗酶液的制备 | 第108页 |
| ·Ni亲和层析纯化 | 第108-109页 |
| ·Sephadex G-100 | 第109页 |
| ·重组酶酶学性质研究 | 第109-110页 |
| ·重组纤溶酶最适温度的确定 | 第109页 |
| ·重组纤溶酶温度稳定性确定 | 第109页 |
| ·重组纤溶酶最适作用pH的确定 | 第109页 |
| ·重组纤溶酶pH稳定性确定 | 第109页 |
| ·金属离子对重组纤溶酶的影响 | 第109-110页 |
| ·蛋白酶抑制剂对重组纤溶酶的作用 | 第110页 |
| ·纤溶酶活性测定 | 第110页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第110页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第110页 |
| ·重组蛋白Western Blot分析 | 第110-111页 |
| ·MALDI-TOF-MS检测 | 第111页 |
| 2 结果与分析 | 第111-127页 |
| ·目的基因的克隆 | 第111-113页 |
| ·多粘芽孢杆菌基因组的提取 | 第111页 |
| ·目的基因扩增 | 第111-112页 |
| ·克隆载体的鉴定 | 第112-113页 |
| ·序列测定 | 第113页 |
| ·序列分析 | 第113-116页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第116-118页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及可溶性分析 | 第118-120页 |
| ·表达产物的纯化、鉴定 | 第120-123页 |
| ·重组酶酶学性质研究 | 第123-127页 |
| ·重组纤溶酶的最适作用温度 | 第123-124页 |
| ·重组纤溶酶的热稳定性 | 第124页 |
| ·重组纤溶酶的最适作用pH | 第124-125页 |
| ·重组纤溶酶的pH稳定性 | 第125-126页 |
| ·金属离子对重组纤溶酶的影响 | 第126页 |
| ·蛋白酶抑制剂对重组纤溶酶的作用 | 第126-127页 |
| ·重组酶与天然酶性质比较 | 第127页 |
| 3 讨论 | 第127-130页 |
| ·纤溶酶基因的克隆 | 第127-128页 |
| ·PPFE-Ⅰ基因在大肠杆菌中的融合表达 | 第128-129页 |
| ·重组纤溶酶的纯化 | 第129-130页 |
| 4 本章小结 | 第130-131页 |
| 参考文献 | 第131-133页 |
| 第五章 内生多粘芽孢杆菌纤溶酶基因在枯草杆菌WB800中的表达 | 第133-147页 |
| 1 材料与方法 | 第133-137页 |
| ·材料 | 第133-135页 |
| ·菌株 | 第134页 |
| ·质粒 | 第134页 |
| ·试剂 | 第134页 |
| ·培养基 | 第134页 |
| ·主要仪器设备 | 第134-135页 |
| ·方法 | 第135-137页 |
| ·DNA提取与纯化 | 第135页 |
| ·PPFE-Ⅰ基因的克隆 | 第135-136页 |
| ·PCR引物设计 | 第135页 |
| ·目的基因PCR扩增及产物纯化 | 第135页 |
| ·PCR产物与载体pMD19-T的连接 | 第135-136页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第136页 |
| ·载体pMD19-T连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第136页 |
| ·PPFE-Ⅰ重组表达载体的构建 | 第136页 |
| ·穿梭质粒pHPQ和pMD19-T-PPFE-Ⅰ的酶切及回收 | 第136页 |
| ·酶切质粒pHPQ和PPFE-Ⅰ的连接 | 第136页 |
| ·重组pHPQ-PPFE-Ⅰ的电转化 | 第136-137页 |
| ·重组pHPQ-PPFE-Ⅰ在枯草杆菌WB800中的诱导表达 | 第137页 |
| ·纤溶酶活性测定 | 第137页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第137页 |
| ·Western blotting分析 | 第137页 |
| 2 结果与分析 | 第137-144页 |
| ·PPFE-Ⅰ基因的克隆 | 第137-139页 |
| ·PPFE-Ⅰ基因PCR扩增 | 第137-138页 |
| ·重组载体pMD19-PPFE-Ⅰ酶切鉴定 | 第138-139页 |
| ·PPFE-Ⅰ基因的表达 | 第139-144页 |
| ·穿梭表达载体pHPQ构建 | 第139-140页 |
| ·重组表达载体pHPQ-PPFE-Ⅰ构建 | 第140-141页 |
| ·重组表达载体pHPQ-PPFE-Ⅰ的PCR和酶切鉴定 | 第141-142页 |
| ·PPFE-Ⅰ基因在枯草杆菌中的诱导表达及纤溶酶活性测定 | 第142页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第142页 |
| ·表达蛋白的Western blotting分析 | 第142-144页 |
| 3 讨论 | 第144-145页 |
| 4 本章小结 | 第145-146页 |
| 参考文献 | 第146-147页 |
| 全文结论 | 第147-149页 |
| 创新摘要 | 第149-151页 |
| 展望 | 第151-153页 |
| 攻读博士期间发表及待发表论文 | 第153-155页 |
| 致谢 | 第155页 |
