英文縮略词表 | 第1-8页 |
中文摘要 | 第8-10页 |
Abstract | 第10-12页 |
引言 | 第12-18页 |
一、材料 | 第18-20页 |
1. 细胞系 | 第18页 |
2. 主要试剂 | 第18页 |
3. 主要试剂配制 | 第18-19页 |
4. 主要仪器 | 第19-20页 |
二、方法 | 第20-29页 |
1. 细胞培养及传代 | 第20-21页 |
2. 细胞计数与存活测试 | 第21页 |
3. siRNA转染 | 第21-22页 |
·脂质体转染原理 | 第21页 |
·转染步骤 | 第21-22页 |
4. MTT法检测RNAi后的细胞增殖情况 | 第22-23页 |
·MTT法原理 | 第22页 |
·MTT法操作步骤 | 第22-23页 |
·结果处理 | 第23页 |
5. 半定量RT-PCR检测survivin基因mRNA的表达 | 第23-26页 |
·原理及应用 | 第23页 |
·引物和内参合成 | 第23页 |
·细胞转染及总RNA提取 | 第23-24页 |
·1%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第24页 |
·cDNA合成 | 第24-25页 |
·PCR反应 | 第25页 |
·凝胶电泳 | 第25页 |
·数据分析 | 第25-26页 |
6. Western印迹法检测RNAi后survivin蛋白的表达 | 第26-28页 |
·Western印迹法原理 | 第26页 |
·实验步骤 | 第26-28页 |
7. Annexin V-PE/7-AAD法流式细胞(FCM)检测凋亡率 | 第28-29页 |
·Annexin V-PE/7-AAD法流式细胞检测凋亡原理 | 第28页 |
·实验步骤 | 第28页 |
·结果分析 | 第28-29页 |
8. 统计学处理 | 第29页 |
三、结果 | 第29-37页 |
1. 细胞形态学观察 | 第29-30页 |
2. MTT法检测细胞增殖 | 第30-32页 |
3. RT-PCR检测survivin mRNA表达水平 | 第32-33页 |
4. 免疫蛋白印记(Western Blot)检测survivin蛋白表达水平 | 第33-35页 |
5. 转染48小时后siRNA诱导SKBr-3细胞的凋亡率 | 第35-37页 |
四、讨论 | 第37-41页 |
五、结论 | 第41-43页 |
参考文献 | 第43-46页 |
文献综述 | 第46-53页 |
参考文献 | 第51-53页 |
攻读学位期间发表文章情况 | 第53-54页 |
攻读学位期间参与科研情况 | 第54-55页 |
致谢 | 第55页 |