| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-18页 |
| ·SIV 的流行病学 | 第11-12页 |
| ·SIV 的基因组特性 | 第12页 |
| ·SIV 种间传播机制及其公共卫生学意义 | 第12-13页 |
| ·SIV 核蛋白（Neucleoprotein，NP）的研究进展 | 第13-16页 |
| ·NP 蛋白的结构与功能 | 第13-14页 |
| ·NP 蛋白在抗感染免疫方面的研究 | 第14-15页 |
| ·NP 蛋白在诊断方面的研究 | 第15-16页 |
| ·DNA 免疫制备单克隆抗体的研究进展 | 第16-17页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 第二章 H3N2 SIV NP 基因的优化表达及抗原性分析 | 第18-27页 |
| ·材料与方法 | 第18-22页 |
| ·病毒株、血清、菌株及载体 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·主要仪器 | 第18页 |
| ·引物设计 | 第18页 |
| ·病毒RNA 的提取及反转录 | 第18-19页 |
| ·NP 基因的PCR 扩增与克隆 | 第19页 |
| ·原核表达重组质粒的构建与鉴定 | 第19页 |
| ·可溶性NP 蛋白的表达及最佳诱导条件的确定 | 第19-20页 |
| ·重组表达蛋白的SDS-PAGE 分析 | 第20页 |
| ·可溶性NP 蛋白非变性纯化 | 第20-21页 |
| ·重组NP 蛋白抗原性分析 | 第21-22页 |
| ·结果 | 第22-25页 |
| ·NP 基因PCR 扩增 | 第22页 |
| ·重组质粒pMD-NP 的鉴定 | 第22-23页 |
| ·重组质粒pET32a-NP 的鉴定 | 第23页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE 分析 | 第23-24页 |
| ·重组NP 蛋白的Western blot 检测 | 第24页 |
| ·重组NP 蛋白的IFA 检测 | 第24-25页 |
| ·讨论 | 第25-27页 |
| 第三章 H3N2 SIV NP 基因真核表达载体的构建及体外表达 | 第27-32页 |
| ·材料和方法 | 第27-29页 |
| ·病毒株、血清、细胞及质粒 | 第27页 |
| ·试剂、酶及仪器 | 第27页 |
| ·真核表达重组质粒pCAGGS-NP 的构建与鉴定 | 第27页 |
| ·真核表达重组质粒pCAGGS-NP 的中量提取 | 第27-28页 |
| ·空载体pCAGGS 的中量提取 | 第28页 |
| ·293T 细胞的培养 | 第28-29页 |
| ·NP 蛋白在293T 细胞中的体外瞬时表达 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-30页 |
| ·pCAGGS-NP 真核表达重组质粒的构建与鉴定 | 第29页 |
| ·质粒转染293T 细胞的IFA 检测 | 第29-30页 |
| ·NP 蛋白在293T 细胞的Western blot 检测 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 第四章 基因免疫制备抗H3N2 SIV NP 蛋白单克隆抗体 | 第32-41页 |
| ·材料与方法 | 第32-37页 |
| ·病毒株、细胞、实验动物等 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| ·免疫原DNA 的制备 | 第32-33页 |
| ·实验动物的免疫 | 第33页 |
| ·间接ELISA 筛选方法的建立 | 第33-34页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的建立 | 第34页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选与克隆 | 第34-35页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第35页 |
| ·单克隆抗体腹水制备 | 第35页 |
| ·单克隆抗体的生物学鉴定 | 第35-37页 |
| ·结果 | 第37-40页 |
| ·间接ELISA 筛选方法的建立 | 第37页 |
| ·杂交瘤细胞株的获得 | 第37页 |
| ·单抗亚类鉴定及效价的测定 | 第37-38页 |
| ·特异性鉴定 | 第38页 |
| ·单抗的纯化 | 第38页 |
| ·单抗Western blot 检测结果 | 第38-39页 |
| ·单抗亲和力测定结果 | 第39页 |
| ·抗原结合活性的检测 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 作者简介 | 第50页 |
