| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 主要缩略词 | 第10-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-44页 |
| ·FEN1基本特性和功能的研究进展 | 第14-29页 |
| ·FEN1的生化特性和底物特异性 | 第14-17页 |
| ·底物结合和酶动力学的结构要素 | 第17-18页 |
| ·FEN1生化功能的研究进展 | 第18-23页 |
| ·FEN1的体内调节机制 | 第23-28页 |
| 小结 | 第28-29页 |
| ·FEN1与癌症发生机制 | 第29-31页 |
| 本文的理论依据和研究意义 | 第31-33页 |
| 参考文献 | 第33-44页 |
| 第2章 FEN1点突变蛋白库的构建 | 第44-59页 |
| 引言 | 第44-45页 |
| ·实验材料与方法 | 第45-50页 |
| ·材料和设备 | 第45页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第45页 |
| ·点突变引物设计 | 第45-46页 |
| ·点突变PCR及产物转化 | 第46-47页 |
| ·点突变的鉴定 | 第47页 |
| ·突变蛋白表达 | 第47页 |
| ·FPLC蛋白纯化 | 第47-49页 |
| ·试剂盒快速纯化蛋白 | 第49-50页 |
| ·实验结果 | 第50-54页 |
| ·点突变引物设计 | 第50页 |
| ·点突变鉴定 | 第50-51页 |
| ·点突变蛋白纯化 | 第51-52页 |
| ·FPLC系统蛋白纯化 | 第52-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| 第3章 FEN1点突变E160D相关生化活性分析 | 第59-74页 |
| 引言 | 第59-61页 |
| ·实验材料与方法 | 第61-66页 |
| ·材料和设备 | 第61页 |
| ·小鼠胚胎成纤维(MEF)细胞的富集 | 第61-62页 |
| ·MEF细胞的消化和传代 | 第62-63页 |
| ·MEF细胞的冻存 | 第63页 |
| ·MEF细胞的解冻和复苏 | 第63页 |
| ·MEF细胞核粗提物的提取 | 第63-64页 |
| ·寡核苷酸的纯化 | 第64页 |
| ·寡核苷酸链标记 | 第64-65页 |
| ·反应底物的准备 | 第65页 |
| ·纯蛋白核酸内切酶活性分析 | 第65-66页 |
| ·MEF细胞核粗提物核酸内切酶活性分析 | 第66页 |
| ·MEF细胞核粗提物或重组蛋白体外LP-BER分析 | 第66页 |
| ·实验结果 | 第66-72页 |
| ·FEN1野生型和突变蛋白对LP-BER中间产物活性的比较 | 第66-68页 |
| ·FEN1野生型和突变MEF细胞核粗提物对LP-BER中间产物活性的比较 | 第68-69页 |
| ·FEN1野生型和突变MEF细胞核粗提物体外LP-BER活性分析 | 第69-70页 |
| ·重组蛋白体外LP-BER活性分析 | 第70-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-74页 |
| 第4章 化学剂诱导下E160D突变细胞敏感性分析 | 第74-89页 |
| 引言 | 第74-75页 |
| ·实验材料和方法 | 第75-78页 |
| ·材料和设备 | 第75页 |
| ·DNA纤维涂片实验 | 第75-76页 |
| ·细胞计数 | 第76页 |
| ·免疫荧光显微检测 | 第76-77页 |
| ·Western-blotting | 第77页 |
| ·染色体涂片 | 第77页 |
| ·HPRT细胞克隆检测法 | 第77-78页 |
| ·实验结果 | 第78-86页 |
| ·化学剂诱导下MEF细胞复制叉损坏情况比较 | 第78-80页 |
| ·化学剂诱导下MEF细胞复制能力分析比较 | 第80-81页 |
| ·化学剂诱导下MEF细胞DSBs比较分析 | 第81-83页 |
| ·化学剂诱导下MEF细胞染色体数目与形态分析 | 第83-86页 |
| ·化学剂处理下MEF细胞突变率的初步观察 | 第86页 |
| ·讨论 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-89页 |
| 第5章 化学剂诱导下小鼠肿瘤发生情况分析 | 第89-96页 |
| 引言 | 第89-90页 |
| ·实验材料与方法 | 第90-91页 |
| ·实验材料 | 第90页 |
| ·诱发模型的建立 | 第90-91页 |
| ·实验结果 | 第91-95页 |
| ·基因改造小鼠在化学损伤剂处理后肿瘤发生率比较 | 第91-92页 |
| ·基因改造小鼠化学损伤剂处理后肿瘤数比较 | 第92页 |
| ·基因改造小鼠在化学损伤剂处理后肿瘤大小比较 | 第92-95页 |
| ·讨论 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-97页 |
| 总结与展望 | 第97-100页 |
| 附表 | 第100-107页 |
| 博士期间发表论文 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108-110页 |
| 个人简介 | 第110页 |
