| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第1章 前言 | 第11-25页 |
| 1.1 免疫毒素 | 第11-15页 |
| 1.1.1 免疫毒素的研究背景 | 第11页 |
| 1.1.2 毒素蛋白 | 第11-12页 |
| 1.1.3 免疫毒素的发展 | 第12-14页 |
| 1.1.4 重组免疫毒素的现状和未来发展方向 | 第14-15页 |
| 1.2 白喉毒素 | 第15-17页 |
| 1.2.1 白喉毒素的结构和组成 | 第15-16页 |
| 1.2.2 白喉毒素诱导细胞凋亡和坏死机制 | 第16-17页 |
| 1.2.3 白喉毒素N端389个氨基酸(DAB389) | 第17页 |
| 1.3 人表皮生长因子受体-2 | 第17-19页 |
| 1.4 抗HER2/neu抗体单链可变区域4D5 scFv | 第19-20页 |
| 1.5 翻译起始区域密码子同义优化 | 第20-21页 |
| 1.6 癌细胞靶向穿膜肽 | 第21-22页 |
| 1.7 光控自我剪接内含肽 | 第22-23页 |
| 1.8 本课题研究目的、内容和意义 | 第23-25页 |
| 1.8.1 研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 1.8.2 研究内容 | 第24-25页 |
| 第2章 重组免疫毒素DAB389-4D5 scFv构建、表达优化和纯化 | 第25-51页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 材料与方法 | 第25-37页 |
| 2.2.1 宿主菌、质粒和基因 | 第25-26页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第27页 |
| 2.2.4 常用试剂的配制 | 第27-29页 |
| 2.2.5 实验策略 | 第29页 |
| 2.2.6 实验方法 | 第29-37页 |
| 2.3 结果和讨论 | 第37-49页 |
| 2.3.1 翻译起始区密码子同义优化 | 第37-38页 |
| 2.3.2 基因片段PCR扩增和融合 | 第38-40页 |
| 2.3.3 重组菌的构建和验证 | 第40页 |
| 2.3.4 蛋白的表达和纯化 | 第40-48页 |
| 2.3.5 蛋白浓度测定 | 第48-49页 |
| 2.4 本章小结 | 第49-51页 |
| 第3章 重组免疫毒素DAB389-4D5 scFv体外抗肿瘤活性研究 | 第51-64页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 材料与方法 | 第51-55页 |
| 3.2.1 细胞株 | 第51页 |
| 3.2.2 实验仪器设备 | 第51-52页 |
| 3.2.3 实验试剂和材料 | 第52页 |
| 3.2.4 常用试剂配制 | 第52-53页 |
| 3.2.5 实验方法 | 第53-55页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第55-62页 |
| 3.3.1 细胞增殖抑制MTT分析 | 第55-58页 |
| 3.3.2 DAB389-4D5 scFv靶向结合 | 第58-60页 |
| 3.3.3 4D5 scFv竞争性抑制 | 第60-61页 |
| 3.3.4 流式细胞仪细胞计数 | 第61-62页 |
| 3.4 本章小结 | 第62-64页 |
| 第4章 重组免疫毒素DAB389-4D5 scFv穿膜效率优化 | 第64-74页 |
| 4.1 引言 | 第64页 |
| 4.2 材料与方法 | 第64-66页 |
| 4.2.1 宿主和质粒 | 第64页 |
| 4.2.2 实验仪器和设备 | 第64页 |
| 4.2.3 实验试剂 | 第64页 |
| 4.2.4 常用实验试剂配制 | 第64页 |
| 4.2.5 实验方法 | 第64-66页 |
| 4.3 结果和讨论 | 第66-72页 |
| 4.3.1 基因PCR和菌株构建 | 第66-68页 |
| 4.3.2 蛋白的表达和纯化 | 第68-70页 |
| 4.3.3 细胞增殖抑制MTT分析 | 第70-72页 |
| 4.4 本章小结 | 第72-74页 |
| 第5章 重组免疫毒素DAB389-4D5 scFv生物活性光控研究 | 第74-82页 |
| 5.1 引言 | 第74页 |
| 5.2 材料和方法 | 第74-76页 |
| 5.2.1 宿主和质粒 | 第74页 |
| 5.2.2 实验仪器和设备 | 第74页 |
| 5.2.3 实验试剂和材料 | 第74-75页 |
| 5.2.4 常用试剂的配制 | 第75页 |
| 5.2.5 实验方法 | 第75-76页 |
| 5.3 结果和讨论 | 第76-81页 |
| 5.3.1 基因融合扩增 | 第76-77页 |
| 5.3.2 蛋白发酵表达和纯化(第73位氨基酸插入点为例) | 第77-79页 |
| 5.3.3 蛋白的蓝光照射自我剪接检测 | 第79-81页 |
| 5.4 本章小结 | 第81-82页 |
| 第6章 总结和展望 | 第82-85页 |
| 6.1 总结 | 第82-84页 |
| 6.1.1 DAB389-4D5 scFv构建、表达和纯化 | 第82页 |
| 6.1.2 DAB389-4D5 scFv抗肿瘤活性的体外检测 | 第82-83页 |
| 6.1.3 DAB389-4D5 scFv穿膜效率优化 | 第83页 |
| 6.1.4 DAB389-4D5 scFv的活性蓝光调控 | 第83-84页 |
| 6.2 展望 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 已发表论文 | 第91页 |
