| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 中英文缩写字母表 | 第16-17页 |
| 绪论 | 第17-25页 |
| 第一章 Notch受体在雄激素阻断治疗复发的前列腺癌中表达上调 | 第25-67页 |
| 1.1 引言 | 第25-26页 |
| 1.2 实验材料 | 第26-32页 |
| 1.2.1 仪器材料 | 第26-27页 |
| 1.2.2 试剂材料 | 第27-29页 |
| 1.2.3 生物材料 | 第29页 |
| 1.2.4 溶液配制 | 第29-32页 |
| 1.3 实验方法 | 第32-49页 |
| 1.3.1 细胞培养 | 第32-33页 |
| 1.3.2 RNA提取 | 第33-34页 |
| 1.3.3 实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR） | 第34-36页 |
| 1.3.4 蛋白免疫印迹 | 第36-38页 |
| 1.3.5 免疫组织化学染色 | 第38-40页 |
| 1.3.6 细胞免疫荧光染色 | 第40-41页 |
| 1.3.7 Notch报告系统质粒构建 | 第41-43页 |
| 1.3.8 质粒抽提 | 第43-45页 |
| 1.3.9 质粒转染 | 第45-46页 |
| 1.3.10 病毒包装 | 第46-47页 |
| 1.3.11 病毒转染 | 第47-48页 |
| 1.3.12 核质分离 | 第48-49页 |
| 1.3.13 数据统计方法 | 第49页 |
| 1.4 实验结果 | 第49-63页 |
| 1.4.1 Oncomine database分析Notch receptor在雄激素治疗复发后的前列腺肿瘤中的表达情况 | 第49-51页 |
| 1.4.2 Notch3受体在去势后的TRAMP小鼠前列腺肿瘤中高表达 | 第51-52页 |
| 1.4.3 激素非依赖性细胞系C4-2相比激素依赖性细胞系LNCaP,Notch3受体的表达水平明显升高 | 第52-54页 |
| 1.4.4 Notch受体在长增殖周期,去势抵抗的LNCaP亚群中高表达 | 第54-56页 |
| 1.4.5 构建Notch信号荧光报告系统pLVX-CSLP-AcGFP及HEK293T-NR,LNCaP-NR细胞系 | 第56-58页 |
| 1.4.6 活性炭去雄激素血清(CDSS)培养可通过活化Notch3激活LNCaP细胞Notch信号通路 | 第58-61页 |
| 1.4.7 Enzalutaminde可通过活化Notch3激活LNCaP细胞Notch信号通路 | 第61-63页 |
| 1.5 本章小结及讨论 | 第63-67页 |
| 第二章 激活的Notch信号诱导ADPC细胞静息表型并增强其对雄激素阻断治疗的抵抗 | 第67-84页 |
| 2.1 引言 | 第67-68页 |
| 2.2 实验材料 | 第68-70页 |
| 2.2.1 仪器材料 | 第68-69页 |
| 2.2.2 试剂材料 | 第69-70页 |
| 2.3 实验方法 | 第70-72页 |
| 2.3.1 实时荧光定量PCR | 第70页 |
| 2.3.2 蛋白免疫印迹 | 第70-71页 |
| 2.3.3 细胞增殖 | 第71页 |
| 2.3.4 Matrigel 3D克隆形成实验 | 第71页 |
| 2.3.5 细胞周期检测 | 第71-72页 |
| 2.4 实验结果 | 第72-82页 |
| 2.4.1 构建Notch1-4的核内片段诱导表达慢病毒载体,并建立LNCaP-NICD | 第72-73页 |
| 2.4.2 通过各Notch受体的核内活性片段激活Notch信号通路都抑制前列腺肿瘤细胞的增殖 | 第73-75页 |
| 2.4.3 Notch信号通路激活抑制LNCaP细胞增殖但不影响其克隆形成能力 | 第75-78页 |
| 2.4.4 激活的Notch信号通路通过上调p15,p57 抑制LNCaP-NICD1-4细胞进入细胞周期S期而抑制其增殖 | 第78-80页 |
| 2.4.5 激活Notch信号通路增强LNCaP细胞对雄激素剥夺的抵抗能力 | 第80-82页 |
| 2.5 本章小结及讨论 | 第82-84页 |
| 第三章 抑制Notch信号通路可以增强ADT的抗肿瘤效果 | 第84-97页 |
| 3.1 引言 | 第84页 |
| 3.2 实验材料 | 第84-86页 |
| 3.2.1 仪器材料 | 第84-85页 |
| 3.2.2 试剂材料 | 第85-86页 |
| 3.2.3 生物材料 | 第86页 |
| 3.3 实验方法 | 第86-88页 |
| 3.3.1 细胞增殖实验 | 第86页 |
| 3.3.2 Matrigel 3D克隆形成实验 | 第86页 |
| 3.3.3 细胞凋亡检测实验 | 第86页 |
| 3.3.4 蛋白免疫印迹 | 第86-87页 |
| 3.3.5 裸鼠移植瘤实验 | 第87-88页 |
| 3.3.6 冰冻切片 | 第88页 |
| 3.3.7 免疫组织化学染色 | 第88页 |
| 3.4 实验结果 | 第88-96页 |
| 3.4.1 在雄激素受体阳性细胞系中雄激素剥夺联合Notch信号抑制剂对前列腺肿瘤细胞的增殖的抑制作用更强 | 第88-89页 |
| 3.4.2 雄激素剥夺联合Notch信号抑制剂显著降低了前列腺肿瘤细胞的克隆形成能力 | 第89-91页 |
| 3.4.3 雄激素剥夺联合Notch信号抑制剂使前列腺肿瘤细胞的凋亡比例上升 | 第91-92页 |
| 3.4.4 Notch信号抑制剂在雄激素剥夺条件下下调磷酸化的p38MAPK和Bcl2/Bax的表达 | 第92-93页 |
| 3.4.5 抑制Notch信号通路可以抑制22Rv1在全雄阻断的裸鼠体内的生长 | 第93-96页 |
| 3.5 本章小结及讨论 | 第96-97页 |
| 第四章 miR-302/367通过靶向LATS2调控前列腺肿瘤细胞的ADT抵抗能力 | 第97-109页 |
| 4.1 引言 | 第97页 |
| 4.2 实验材料 | 第97-99页 |
| 4.2.1 仪器材料 | 第97-98页 |
| 4.2.2 试剂材料 | 第98-99页 |
| 4.3 实验方法 | 第99-102页 |
| 4.3.1 突变体构建 | 第99-100页 |
| 4.3.2 荧光素酶报告系统 | 第100-102页 |
| 4.4 实验结果 | 第102-108页 |
| 4.4.1 构建miR-302/367逆转录病毒过表达载体 | 第102-103页 |
| 4.4.2 miR-302/367靶向LASTmRNA3’UTR区域 | 第103-108页 |
| 4.5 本章小结及讨论 | 第108-109页 |
| 论文总结 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第121页 |
