大豆磷酸吡哆醛磷酸酶基因的克隆与酶学分析
| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 文献综述 | 第11-19页 |
| 引言 | 第19-21页 |
| 1.材料与方法 | 第21-33页 |
| 1.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 1.1.1 实验植株 | 第21页 |
| 1.1.2 主要实验设备 | 第21页 |
| 1.1.3 质粒与菌株 | 第21页 |
| 1.1.4 主要试剂 | 第21-24页 |
| 1.2 实验方法 | 第24-33页 |
| 1.2.1 引物设计 | 第24页 |
| 1.2.2 大豆GmPLPP基因克隆 | 第24-26页 |
| 1.2.3 原核表达的重组质粒构建 | 第26-27页 |
| 1.2.4 原核表达和纯化 | 第27-29页 |
| 1.2.5 酶学性质分析 | 第29-31页 |
| 1.2.6 RNAi载体的构建 | 第31-33页 |
| 2.结果与分析 | 第33-47页 |
| 2.1 大豆GmPLPPcDNA序列分析 | 第33-35页 |
| 2.2 大豆GmPLPP基因克隆 | 第35-36页 |
| 2.2.1 大豆cDNA的获得 | 第35页 |
| 2.2.2 大豆GmPLPP基因的克隆 | 第35-36页 |
| 2.3 大豆GmPLPP的原核表达 | 第36-38页 |
| 2.3.1 大豆GmPLPP原核表达载体的构建 | 第36页 |
| 2.3.2 大豆GmPLPP原核表达及纯化 | 第36-37页 |
| 2.3.3 蛋白浓度测定 | 第37-38页 |
| 2.4 酶的部分性质研究 | 第38-43页 |
| 2.4.1 磷酸基团浓度测定 | 第38页 |
| 2.4.2 最适pH值 | 第38页 |
| 2.4.3 酶促反应的最适温度 | 第38-39页 |
| 2.4.4 酶促反应时间 | 第39页 |
| 2.4.5 金属离子对酶活性影响 | 第39-40页 |
| 2.4.6 对不同底物的催化活性比较 | 第40页 |
| 2.4.7 米氏常数Km | 第40-42页 |
| 2.4.8 不同化合物对酶促活性的作用 | 第42-43页 |
| 2.5 RNAi载体的构建 | 第43-47页 |
| 2.5.1 沉默片段的PCR扩增 | 第43-44页 |
| 2.5.2 GmPLPP正反向沉默片段载体构建 | 第44-47页 |
| 3.讨论 | 第47-51页 |
| 3.1 大豆GmPLPP基因序列分析 | 第47-48页 |
| 3.2 大豆水解酶的最适反应条件 | 第48页 |
| 3.3 金属离子对酶活性的影响 | 第48-49页 |
| 3.4 米氏常数测定和特异性分析 | 第49-51页 |
| 3.4.1 米氏常数测定结果分析 | 第49页 |
| 3.4.2 底物特异性分析 | 第49-51页 |
| 4.结论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
