| 中文摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-26页 |
| 1.1 重金属镉 | 第10-12页 |
| 1.1.1 镉的理化性质 | 第10页 |
| 1.1.2 镉的应用及危害 | 第10-11页 |
| 1.1.3 镉毒性机理的研究现状 | 第11-12页 |
| 1.2 镉对MAPK信号转导途径的影响 | 第12-15页 |
| 1.3 不同物种中镉的通道蛋白 | 第15-23页 |
| 1.3.1 金属硫蛋白 | 第15-16页 |
| 1.3.2 Zn~(2+)通道蛋白 | 第16-17页 |
| 1.3.3 Fe~(2+)通道蛋白 | 第17-19页 |
| 1.3.4 Ca~(2+)通道蛋白 | 第19-23页 |
| 1.4 酿酒酵母作为模式生物 | 第23页 |
| 1.5 本课题的研究目的和意义 | 第23-26页 |
| 第2章 镉胁迫下hog1,slt2菌株差异基因表达谱的构建 | 第26-54页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.2.1 实验用酵母菌株 | 第26-27页 |
| 2.2.2 实验用主要试剂 | 第27页 |
| 2.2.3 培养基的配制 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-33页 |
| 2.3.1 酵母菌株保存及培养 | 第28页 |
| 2.3.2 酿酒酵母细胞RNA提取 | 第28页 |
| 2.3.3 转录组测序流程 | 第28-29页 |
| 2.3.4 转录组数据生物信息学分析 | 第29-31页 |
| 2.3.5 实时荧光定量PCR | 第31-33页 |
| 2.4 实验结果 | 第33-50页 |
| 2.4.1 总RNA提取及质量检测 | 第33-34页 |
| 2.4.2 测序数据质量评估 | 第34-36页 |
| 2.4.3 差异表达基因筛选 | 第36-37页 |
| 2.4.4 RT-qPCR验证差异表达基因 | 第37页 |
| 2.4.5 野生型BY4741在镉胁迫下的转录应答 | 第37-40页 |
| 2.4.6 镉胁迫下酵母MAPKs缺失细胞的转录应答 | 第40-45页 |
| 2.4.7 MAPKs下游调控基因的挖掘 | 第45-50页 |
| 2.5 分析与讨论 | 第50-52页 |
| 2.5.1 菌株基因型和表型验证 | 第50页 |
| 2.5.2 镉胁迫下野生型酵母细胞的基因表达谱 | 第50-51页 |
| 2.5.3 蛋白互作研究 | 第51-52页 |
| 2.6 本章小结 | 第52-54页 |
| 第3章 Hog1p和 Sltp2调控通道蛋白的筛选 | 第54-68页 |
| 3.1 引言 | 第54页 |
| 3.2 实验材料 | 第54-58页 |
| 3.2.1 实验用酵母菌株、质粒和引物 | 第54-56页 |
| 3.2.2 实验用主要试剂 | 第56-57页 |
| 3.2.3 主要溶液和培养基配制 | 第57-58页 |
| 3.3 实验方法 | 第58-61页 |
| 3.3.1 酵母基因组提取 | 第58页 |
| 3.3.2 PCR反应体系 | 第58-60页 |
| 3.3.3 酶切反应体系 | 第60页 |
| 3.3.4 酵母转化 | 第60页 |
| 3.3.5 倍比稀释表型分析 | 第60-61页 |
| 3.3.6 原子吸收测定 | 第61页 |
| 3.4 实验结果 | 第61-66页 |
| 3.4.1 单基因缺失菌株的表型验证 | 第61-63页 |
| 3.4.2 双基因缺失菌株构建 | 第63-64页 |
| 3.4.3 双基因缺失菌株的表型分析 | 第64-66页 |
| 3.5 分析与讨论 | 第66-67页 |
| 3.5.1 多个基因的作用仍待探究 | 第66页 |
| 3.5.2 细胞内镉含量在一定范围内随外界镉浓度增加而增加 | 第66-67页 |
| 3.5.3 半胱氨酸转运蛋白可能参与镉胁迫应答 | 第67页 |
| 3.6 本章小结 | 第67-68页 |
| 第4章 通道蛋白Yct1p和Smf1p/2p的表达分析 | 第68-90页 |
| 4.1 引言 | 第68页 |
| 4.2 实验材料 | 第68-72页 |
| 4.2.1 实验用菌株和质粒 | 第68-69页 |
| 4.2.2 本部分实验试剂及酶制剂 | 第69-70页 |
| 4.2.3 主要溶液和培养基配制 | 第70-72页 |
| 4.3 实验方法 | 第72-79页 |
| 4.3.1 基因克隆 | 第72-75页 |
| 4.3.2 酵母质粒转化 | 第75页 |
| 4.3.3 β-半乳糖苷酶活力测定 | 第75-76页 |
| 4.3.4 酵母蛋白提取 | 第76页 |
| 4.3.5 Western Blot检测蛋白表达 | 第76-77页 |
| 4.3.6 荧光显微观察蛋白定位 | 第77页 |
| 4.3.7 GST beads使用方法 | 第77-78页 |
| 4.3.8 染色质免疫共沉淀 | 第78-79页 |
| 4.4 实验结果 | 第79-86页 |
| 4.4.1 重组质粒构建 | 第79-82页 |
| 4.4.2 转录因子Msn2p、Msn4p和Hot1p负调控Yct1p | 第82-83页 |
| 4.4.3 Hog1p对 Yct1p具有正调控作用 | 第83-84页 |
| 4.4.4 镉处理前后Yct1p均在细胞质表达 | 第84-85页 |
| 4.4.5 染色质免疫沉淀验证Swi6p对Smf1p/2p的调控位点 | 第85-86页 |
| 4.5 分析与讨论 | 第86-88页 |
| 4.5.1 YCT1启动子上具有Msn2p/4p的结合序列 | 第86-87页 |
| 4.5.2 Yct1p定位仍待确定 | 第87页 |
| 4.5.3 难以获得Smp1p的纯化蛋白 | 第87-88页 |
| 4.6 本章小结 | 第88-90页 |
| 第5章 结论与展望 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-102页 |
| 附录 | 第102-106页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第106-108页 |
| 致谢 | 第108页 |
