| 摘要 | 第10-11页 |
| ABSTRACT | 第11页 |
| 第一章 前言 | 第12-31页 |
| 1.1 AXIN相关研究进展 | 第12-17页 |
| 1.1.1 引言 | 第12-13页 |
| 1.1.2 AXIN蛋白结构域 | 第13-14页 |
| 1.1.3 AXIN调控及其生物学功能 | 第14-17页 |
| 1.2 AMPK相关研究进展 | 第17-25页 |
| 1.2.1 AMPK简介 | 第17-19页 |
| 1.2.2 AMPK结构及功能域 | 第19-21页 |
| 1.2.3 AMPK活力调节机制 | 第21-23页 |
| 1.2.4 AMPK在细胞中增殖,自噬和代谢中的作用 | 第23-24页 |
| 1.2.5 AMPK与AXIN的相互联系 | 第24-25页 |
| 1.3 LAMTOR1 | 第25-31页 |
| 1.3.1 LAMTOR1简介 | 第25-26页 |
| 1.3.2 LAMTOR1与胞内体动态变化相关 | 第26-27页 |
| 1.3.3 LAMTOR1研究进展 | 第27-31页 |
| 第二章 材料和方法 | 第31-55页 |
| 2.1 常用试剂、耗材及仪器 | 第31-33页 |
| 2.2 DNA相关实验方法 | 第33-38页 |
| 2.2.1 pCMV5质粒 | 第33页 |
| 2.2.2 pShuttle质粒 | 第33-34页 |
| 2.2.3 pAdEasy质粒 | 第34-35页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| 2.2.5 DNA转化 | 第36页 |
| 2.2.6 质粒DNA的提取 | 第36-38页 |
| 2.3 克隆方法及策略 | 第38-42页 |
| 2.3.1 DNA的限制性内切酶消化 | 第39页 |
| 2.3.2 PCR扩增片段 | 第39-40页 |
| 2.3.3 琼脂糖电泳分离DNA | 第40页 |
| 2.3.4 DNA的回收 | 第40-41页 |
| 2.3.5 LIC方法连接载体与片段 | 第41页 |
| 2.3.6 腺病毒重组克隆构建 | 第41-42页 |
| 2.4 基因型鉴定 | 第42-43页 |
| 2.5 细胞培养、转染及病毒包装 | 第43-45页 |
| 2.5.1 细胞培养 | 第43-44页 |
| 2.5.2 瞬时转染 | 第44页 |
| 2.5.3 腺病毒包装及扩增 | 第44-45页 |
| 2.6 蛋白质相关实验方法 | 第45-47页 |
| 2.6.1 免疫沉淀 | 第45-46页 |
| 2.6.2 蛋白质的浓度测定(Brad ford法) | 第46-47页 |
| 2.6.3 蛋白质的SDS-PAGE电泳与Western blotting分析 | 第47页 |
| 2.7 分离原代肝细胞 | 第47-49页 |
| 2.8. 肝脏甘油三酯测定 | 第49-50页 |
| 2.9 实时定量PCR | 第50-52页 |
| 2.10 晚期胞内体获取 | 第52页 |
| 2.11 脂滴积累实验(尼罗红染色) | 第52-53页 |
| 2.12 小鼠葡萄糖耐受性测定 | 第53页 |
| 2.13 小鼠胰岛素耐受性测定 | 第53-54页 |
| 2.14 小鼠丙酮酸耐受性测定 | 第54-55页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第55-77页 |
| 3.1 结果 | 第55-75页 |
| 3.1.1 LAMTOR1与AXIN的相互作用确定 | 第55-57页 |
| 3.1.2 LAMTOR1肝脏特异性敲除小鼠模型的建立 | 第57-60页 |
| 3.1.3 LAMTOR1~(LKO)小鼠生长曲线以及肝脏/体重测定 | 第60-61页 |
| 3.1.4 小鼠血糖测定 | 第61-62页 |
| 3.1.5 LAMTOR1~(LKO)小鼠GTT、ITT、PTT测定 | 第62-66页 |
| 3.1.6 LAMTOR1~(LKO)小鼠肝脏TAG测定 | 第66-67页 |
| 3.1.7 LAMTOR1~(LKO)原代肝细胞尼罗红染色 | 第67-68页 |
| 3.1.8 LAMTOR1~(LKO)小鼠肝脏AMPK第172位苏氨酸磷酸化水平检测 | 第68-70页 |
| 3.1.9 小鼠肝脏细胞中LAMTOR1对AMPK激活的作用 | 第70-72页 |
| 3.1.10 LAMTOR1~(LKO)小鼠肝脏组分分离 | 第72-75页 |
| 3.2 讨论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
