| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-34页 |
| 1.1 植物对病原菌的免疫机制 | 第14-15页 |
| 1.2 SA介导的抗病反应 | 第15-19页 |
| 1.2.1 SA结合蛋白 | 第15-16页 |
| 1.2.2 NPR1在SA信号通路中起关键作用 | 第16-17页 |
| 1.2.3 NPR3与NPR4在植物抗病中的功能 | 第17页 |
| 1.2.4 NPR3和NPR4是SA受体蛋白 | 第17-19页 |
| 1.3 活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)信号 | 第19-24页 |
| 1.3.0 ROS的检测方式 | 第19-20页 |
| 1.3.1 ROS在病原菌侵染过程中的功能研究 | 第20-21页 |
| 1.3.2 ROS在信号传导中的功能 | 第21页 |
| 1.3.3 ROS在细胞壁修饰中的功能 | 第21页 |
| 1.3.4 ROS在细胞程序性死亡中的功能 | 第21-22页 |
| 1.3.5 ROS在翻译后修饰中的功能 | 第22页 |
| 1.3.6 ROS在植物抗病中的功能 | 第22-24页 |
| 1.4 钙离子信号 | 第24-25页 |
| 1.4.1 钙信号在植物免疫中的功能 | 第24-25页 |
| 1.4.2 钙信号在植物-微生物共生作用中的功能 | 第25页 |
| 1.5 植物钙调神经磷酸酶B类蛋白与CBL互作蛋白激酶 | 第25-30页 |
| 1.5.1 CIPK的互作靶标 | 第26页 |
| 1.5.2 CBL-CIPK在非生物胁迫中的功能 | 第26-28页 |
| 1.5.3 CBL-CIPK在ABA信号通路中的功能 | 第28-29页 |
| 1.5.4 CBL-CIPK在生物胁迫和ROS信号中的功能 | 第29-30页 |
| 1.6 条锈病的危害及研究现状 | 第30-32页 |
| 1.6.1 条锈病的危害 | 第30页 |
| 1.6.2 小麦条锈病的研究现状 | 第30-32页 |
| 1.7 本研究的目的意义 | 第32-34页 |
| 1.7.1 目的意义 | 第32-33页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第33-34页 |
| 第二章 小麦TaCBL与TaCIPK基因家族的鉴定 | 第34-47页 |
| 2.1 引言 | 第34页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第34-35页 |
| 2.3 试验方法 | 第35-37页 |
| 2.3.1 小麦基因组中CBL与CIPK基因的鉴定 | 第35页 |
| 2.3.2 小麦CBL与CIPK蛋白序列分析 | 第35页 |
| 2.3.3 小麦CBL与CIPK蛋白系统进化分析 | 第35-36页 |
| 2.3.4 小麦CBL与CIPK亚细胞定位 | 第36-37页 |
| 2.4 实验结果和分析 | 第37-44页 |
| 2.4.1 小麦CBL和CIPK基因的鉴定 | 第37页 |
| 2.4.2 小麦CBL和CIPK序列分析 | 第37-38页 |
| 2.4.3 小麦CBL和CIPK系统进化分析 | 第38-43页 |
| 2.4.4 小麦CBL和CIPK亚细胞定位分析 | 第43-44页 |
| 2.5 结论与讨论 | 第44-47页 |
| 第三章 小麦TaCBL4-TaCIPK5蛋白复合体功能分析 | 第47-77页 |
| 3.1 前言 | 第47页 |
| 3.2 材料、试剂及仪器 | 第47-48页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第48页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第48页 |
| 3.3 实验方法 | 第48-57页 |
| 3.3.1 小麦的培养与小麦条锈菌的繁殖 | 第48-49页 |
| 3.3.2 总RNA提取与cDNA第一链合成 | 第49页 |
| 3.3.3 Quantitative Real-TimePCR分析 | 第49-50页 |
| 3.3.4 小麦TaCBL4、TaCIPK5和TaRbohi基因的克隆及序列分析。 | 第50-51页 |
| 3.3.5 小麦TaRBOH基因家族的鉴定 | 第51页 |
| 3.3.6 TaCIPK5缺失突变体(TaCIPK5Δ)的构建 | 第51页 |
| 3.3.7 酵母双杂交实验 | 第51-52页 |
| 3.3.8 双分子荧光实验(Bimolecular fluorescence complementation,BiFC) | 第52-53页 |
| 3.3.9 免疫共沉淀实验(Co-immuno precipitation,Co-IP) | 第53-54页 |
| 3.3.10 植物蛋白提取和western blot分析 | 第54-55页 |
| 3.3.11 病毒介导的基因沉默技术 | 第55-57页 |
| 3.4 结果与分析 | 第57-74页 |
| 3.4.1 TaCBL4和TaCIPK5序列分析 | 第57-58页 |
| 3.4.2 TaCBL4与TaCIPK5在体内存在互作关系 | 第58-60页 |
| 3.4.3 TaCBL4和TaCIPK5可受到flg22和条锈菌效应蛋白的诱导表达 | 第60-62页 |
| 3.4.4 瞬时沉默TaCBL4能够显著降低小麦对条锈菌的抗病性 | 第62-64页 |
| 3.4.5 瞬时沉默TaCIPK5能够显著增强小麦对条锈菌的感病性 | 第64-69页 |
| 3.4.6 共沉默TaCBL4和TaCIPK5与单沉默的抗病表型一致 | 第69页 |
| 3.4.7 TaCIPK5可与小麦活性氧生成相关蛋白TaRBOHi互作 | 第69-74页 |
| 3.5 结论与讨论 | 第74-77页 |
| 第四章 TaCIPK10介导的抗病机理的研究 | 第77-107页 |
| 4.1 前言 | 第77-78页 |
| 4.2 材料、试剂及仪器 | 第78页 |
| 4.3 实验方法 | 第78-84页 |
| 4.3.0 小麦的培养与小麦条锈菌的繁殖 | 第78页 |
| 4.3.1 小麦水杨酸处理 | 第78页 |
| 4.3.2 总RNA提取与cDNA第一链合成 | 第78页 |
| 4.3.3 Quantitative Real-TimePCR分析 | 第78页 |
| 4.3.4 小麦TaIPK10基因序列分析 | 第78页 |
| 4.3.5 小麦NPR1基因家族的鉴定 | 第78页 |
| 4.3.6 TaCIPK10、TaNH2缺失突变体的构建 | 第78页 |
| 4.3.7 TaCIPK10、TaNH2定点突变体的构建 | 第78-79页 |
| 4.3.8 原核表达 | 第79-80页 |
| 4.3.9 蛋白体外磷酸化实验 | 第80-81页 |
| 4.3.10 酵母双杂交实验 | 第81页 |
| 4.3.11 免疫共沉淀实验(Co-immuno precipitation,Co-IP) | 第81页 |
| 4.3.12 GST-Pulldown实验 | 第81-82页 |
| 4.3.13 病毒介导的基因瞬时沉默 | 第82页 |
| 4.3.14 TaCIPK10过表达转基因材料的构建 | 第82-84页 |
| 4.3.15 组织学观察 | 第84页 |
| 4.4 结果与分析 | 第84-102页 |
| 4.4.1 条锈菌及水杨酸处理显著诱导TaCIPK10表达 | 第84-85页 |
| 4.4.2 TaCIPK10序列分析 | 第85页 |
| 4.4.3 TaCIPK10能够与多个小麦CBL蛋白互作 | 第85-88页 |
| 4.4.4 TaCIPK10的蛋白磷酸化能力受到TaCBL4和Ca~(2+)的调控 | 第88页 |
| 4.4.5 瞬时沉默TaCIPK10显著降低小麦对条锈菌的抗性 | 第88-90页 |
| 4.4.6 过表达TaCIPK10显著提高小麦对条锈病的抗性 | 第90-96页 |
| 4.4.7 TaCIPK10与TaNH2互作并磷酸化TaNH2 | 第96-99页 |
| 4.4.8 TaNH2在小麦对条锈病的抗性中起到正调控作用 | 第99-102页 |
| 4.5 结论与讨论 | 第102-107页 |
| 第五章 全文结论与展望 | 第107-110页 |
| 参考文献 | 第110-123页 |
| 附表 | 第123-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
| 作者简介 | 第136页 |
