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拟南芥微丝结合蛋白SCAB1在调控保卫细胞开关中功能分析

摘要第4-5页
Abstract第5-6页
缩略语表第9-10页
第一章 文献综述第10-30页
    1.1 气孔的研究进展第10-24页
        1.1.1 气孔的发育第10-13页
        1.1.2 环境因子和内在激素对气孔运动的影响第13-15页
        1.1.3 磷酸肌醇途径对气孔运动的影响第15-19页
        1.1.4 微丝骨架与气孔运动第19-20页
        1.1.5 液泡形态变化与气孔运动第20-22页
        1.1.6 钙信号与气孔运动第22-23页
        1.1.7 保卫细胞内的离子通道与气孔运动第23-24页
    1.2 微丝骨架的特征与调节因子第24-28页
        1.2.1 微丝结构第25-26页
        1.2.2 微丝结合蛋白调控微丝排布及动态第26页
        1.2.3 几个独特的植物微丝结合蛋白第26-27页
        1.2.4 脂类信号调控微丝动态第27-28页
    1.3 本文的研究目的与意义第28-30页
第二章 材料和方法第30-43页
    2.1 实验材料第30-33页
        2.1.1 植物材料第30-33页
        2.1.2 植物培养材料以及培养条件第33页
        2.1.3 菌株及载体第33页
    2.2 实验试剂及溶液配置第33-35页
    2.3 仪器设备第35-36页
    2.4 实验方法第36-43页
        2.4.1 SCAB1的磷脂结合实验(PIP STRIP ASSAY)第36页
        2.4.2 GST蛋白的表达及纯化第36-37页
        2.4.3 兔骨骼肌肌球蛋白的纯化第37页
        2.4.4 蛋白序列相似度分析第37页
        2.4.5 微丝共沉淀实验第37-38页
        2.4.6 微丝稳定性实验第38页
        2.4.7 PI3K抑制剂处理第38页
        2.4.8 微丝解聚实验第38页
        2.4.9 气孔开度实验第38-39页
        2.4.10 提取保卫细胞原生质体第39页
        2.4.11 原生质体瞬时表达检测实验第39-40页
        2.4.12 表达荧光蛋白转基因材料的动态观察第40页
        2.4.13 液泡状态统计实验第40页
        2.4.14 RNA的提取和RT-PCR第40-41页
        2.4.15 制备感受态细胞第41页
        2.4.16 钙信号的测定第41-42页
        2.4.17 IP_3含量的测定第42-43页
第三章 PI3P参与SCAB1调控拟南芥气孔运动的机制第43-63页
    3.1 SCAB1与磷脂的结合第43-47页
        3.1.1 SCAB1体外特异结合PI3P第43-44页
        3.1.2 SCAB1的PI3P结合域第44-45页
        3.1.3 SCAB1的PI3P结合域的突变对SCAB1结合PI3P的影响第45-46页
        3.1.4 SCAB1的PI3P结合域的保守性第46-47页
    3.2 PI3P对SCAB1功能的影响第47-55页
        3.2.1 PI3P不影响SCAB1体外结合微丝第47-48页
        3.2.2 PI3P不影响SCAB1体外使微丝成束的能力第48-49页
        3.2.3 PI3P的结合会降低SCAB1体外稳定微丝的能力第49-50页
        3.2.4 突变SCAB1中的PI3P结合域,不影响SCAB1对微丝的功能第50-52页
        3.2.5 SCAB1不能结合PI3P时,体内微丝更稳定第52-54页
        3.2.6 降低拟南芥体内PI3P含量,体内微丝变稳定第54-55页
    3.3 SCAB1和PI3P在液泡动态过程中有关联第55-57页
        3.3.1 液泡动态与微丝之间关系第55-57页
        3.3.2 液泡动态中PI3P与微丝之间关系第57页
    3.4 PI3P与SCAB1的结合对液泡状态的影响第57-59页
    3.5 PI3P与SCAB1的结合参与气孔关闭过程第59-62页
    3.6 小结第62-63页
第四章 SCAB1与IP_3/IP_6结合参与调控钙信号途径第63-74页
    4.1 钙信号的测定第63-66页
        4.1.1 scab1突变体内的钙信号第63-64页
        4.1.2 回补株系以及过量表达株系内的钙信号第64-66页
    4.2 SCAB1可能通过影响IP_3/IP_6来调节拟南芥钙信号第66-67页
        4.2.1 SCAB1对植物体内IP_3含量的影响第66页
        4.2.2 IP_3/IP_6的结合突变体的表型第66-67页
    4.3 不能结合IP_3/IP_6的SCAB1对微丝的作用第67-70页
    4.4 钾电流的测定第70-73页
    4.5 小结第73-74页
第五章 结论第74-75页
第六章 讨论第75-80页
    6.1 SCAB1结合磷酸肌醇分子第75页
    6.2 SCAB1结合磷酸肌醇发挥的生物学功能第75-80页
        6.2.1 SCAB1结合PI3P发挥的生物学功能第76-77页
        6.2.2 SCAB1结合IP_3和IP_6发挥的生物学功能第77-80页
参考文献第80-94页
致谢第94-96页
作者简历第96页

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