| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1. 黄曲霉 | 第12-14页 |
| 1.1 黄曲霉的生长环境及其分布 | 第12页 |
| 1.2 黄曲霉毒素 | 第12-13页 |
| 1.3 黄曲霉毒素的合成机制 | 第13-14页 |
| 2. 温度对黄曲霉的影响 | 第14-17页 |
| 2.1 温度对黄曲霉表型的影响 | 第15页 |
| 2.2 温度对黄曲霉转录组的影响 | 第15-16页 |
| 2.3 温度对黄曲霉蛋白组的影响 | 第16-17页 |
| 3. Spm1在黄曲霉中的作用 | 第17-19页 |
| 3.1 MAPK途径 | 第17页 |
| 3.2 细胞壁完整性通路 | 第17-18页 |
| 3.3 黄曲霉中的信号转导途径 | 第18-19页 |
| 4. 本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 温度对黄曲霉表型的影响 | 第20-30页 |
| 1. 引言 | 第20页 |
| 2. 材料 | 第20-21页 |
| 2.1 菌株 | 第20页 |
| 2.2 试剂 | 第20页 |
| 2.3 培养基 | 第20页 |
| 2.4 器材 | 第20-21页 |
| 3. 方法 | 第21-24页 |
| 3.1 孢子制备 | 第21页 |
| 3.2 孢子计数 | 第21页 |
| 3.3 菌株培养 | 第21-22页 |
| 3.3.1 用于测量生长的菌株培养 | 第21-22页 |
| 3.3.2 用于提取毒素的菌株培养 | 第22页 |
| 3.3.3 用于观察尖端和隔膜的菌株培养 | 第22页 |
| 3.4 生长测量 | 第22页 |
| 3.5 产毒分析 | 第22-23页 |
| 3.5.1 黄曲霉毒素的提取 | 第22页 |
| 3.5.2 黄曲霉毒素的检测 | 第22-23页 |
| 3.6 孢子数测量 | 第23页 |
| 3.7 尖端观察 | 第23页 |
| 3.8 隔膜观察 | 第23-24页 |
| 4. 结果与分析 | 第24-28页 |
| 4.1 温度对黄曲霉生长的影响 | 第24-25页 |
| 4.1.1 菌落形态的观察 | 第24页 |
| 4.1.2 菌落直径的测量 | 第24-25页 |
| 4.2 温度对黄曲霉产毒的影响 | 第25-26页 |
| 4.2.1 黄曲霉产毒的定性检测 | 第25-26页 |
| 4.2.2 黄曲霉产毒的定量分析 | 第26页 |
| 4.3 温度对黄曲霉产孢的影响 | 第26-27页 |
| 4.4 温度对黄曲霉尖端长度的影响 | 第27-28页 |
| 4.5 温度对黄曲霉隔膜长度的影响 | 第28页 |
| 5. 小结 | 第28-30页 |
| 第三章 温度对黄曲霉转录组和蛋白质组的影响 | 第30-41页 |
| 1. 引言 | 第30页 |
| 2. 材料 | 第30页 |
| 3. 方法 | 第30-34页 |
| 3.1 黄曲霉菌株的培养 | 第30页 |
| 3.2 RNA提取 | 第30-31页 |
| 3.3 转录组测序 | 第31页 |
| 3.4 蛋白质提取 | 第31-32页 |
| 3.5 蛋白组测序 | 第32-34页 |
| 3.5.1 蛋白浓度测定-Brandford法 | 第32页 |
| 3.5.2 SDS-PAGE检测 | 第32-33页 |
| 3.5.3 Trypsin酶解 | 第33页 |
| 3.5.4 iTRAQ标记肽段 | 第33页 |
| 3.5.5 强离子交换色谱 | 第33页 |
| 3.5.6 液相串联质谱 | 第33-34页 |
| 3.6 数据分析 | 第34页 |
| 4. 结果 | 第34-41页 |
| 4.1 菌株表型和产毒差异 | 第34-35页 |
| 4.2 转录组差异分析 | 第35-37页 |
| 4.2.1 数据质量分析 | 第35-36页 |
| 4.2.2 基因差异表达分析 | 第36页 |
| 4.2.3 GO分析 | 第36-37页 |
| 4.2.4 Pathway分析 | 第37页 |
| 4.3 蛋白质组差异分析 | 第37-39页 |
| 4.3.1 GO分析 | 第37-38页 |
| 4.3.2 蛋白差异表达分析 | 第38页 |
| 4.3.3 Pathway分析 | 第38-39页 |
| 4.3.4 产毒基因簇上差异蛋白分析 | 第39页 |
| 4.4 蛋白组与转录组关联分析 | 第39-40页 |
| 4.5 小结 | 第40-41页 |
| 第四章 Spm1基因在黄曲霉中的作用 | 第41-68页 |
| 1. 引言 | 第41页 |
| 2. 材料 | 第41-43页 |
| 2.1 菌株 | 第41页 |
| 2.2 试剂 | 第41-42页 |
| 2.3 仪器 | 第42页 |
| 2.4 培养基 | 第42-43页 |
| 3. 方法 | 第43-49页 |
| 3.1 Spm1蛋白序列分析 | 第43页 |
| 3.1.1 序列比对 | 第43页 |
| 3.1.2 构建进化树 | 第43页 |
| 3.2 黄曲霉基因组DNA提取 | 第43-44页 |
| 3.3 基因敲除 | 第44-46页 |
| 3.3.1 原理 | 第44-45页 |
| 3.3.2 引物 | 第45页 |
| 3.3.3 overlap步骤 | 第45-46页 |
| 3.4 原生质体制备与转化 | 第46-47页 |
| 3.4.1 原生质体制备 | 第46-47页 |
| 3.4.2 转化 | 第47页 |
| 3.5 转化子验证 | 第47-48页 |
| 3.5.1 转化子小提DNA | 第47页 |
| 3.5.2 PCR及RT-PCR验证 | 第47-48页 |
| 3.6 表型分析 | 第48页 |
| 3.6.1 孢子直径测量 | 第48页 |
| 3.6.2 孢子簇观察 | 第48页 |
| 3.7 花生侵染 | 第48-49页 |
| 4. 结果与分析 | 第49-66页 |
| 4.1 黄曲霉Spm1蛋白序列的分析 | 第49-50页 |
| 4.2 Spm1基因敲除菌的构建及验证 | 第50-52页 |
| 4.2.1 同源片段的扩增 | 第50-51页 |
| 4.2.2 敲除菌的PCR及RT-PCR验证 | 第51-52页 |
| 4.3 Spm1的缺失影响黄曲霉的生长 | 第52-56页 |
| 4.3.1 在28℃培养条件下对生长的影响 | 第52-54页 |
| 4.3.2 在37℃培养条件下对生长的影响 | 第54-56页 |
| 4.4 Spm1的缺失影响黄曲霉的产毒 | 第56-57页 |
| 4.4.1 黄曲霉产毒的TLC分析 | 第56页 |
| 4.4.2 黄曲霉产毒相关基因的荧光定量分析 | 第56-57页 |
| 4.5 Spm1的缺失影响黄曲霉的产孢 | 第57-59页 |
| 4.5.1 孢子形态 | 第57-58页 |
| 4.5.2 孢子数目 | 第58页 |
| 4.5.3 产孢相关基因的荧光定量分析 | 第58-59页 |
| 4.5.4 Spm1基因对黄曲霉产孢结构的作用 | 第59页 |
| 4.6 细胞壁稳定剂对敲除菌生长的影响 | 第59-61页 |
| 4.6.1 在28℃培养条件下细胞壁稳定剂对生长的影响 | 第59-60页 |
| 4.6.2 在37℃培养条件下细胞壁稳定剂对生长的影响 | 第60-61页 |
| 4.7 渗透压对敲除菌的影响 | 第61-63页 |
| 4.7.1 在28℃培养条件下渗透压对生长的影响 | 第61-62页 |
| 4.7.2 在37℃培养条件下渗透压对生长的影响 | 第62-63页 |
| 4.8 影响细胞壁稳定的试剂对敲除菌的影响 | 第63-65页 |
| 4.8.1 在28℃培养条件下影响细胞壁稳定的试剂对生长的影响 | 第63-64页 |
| 4.8.2 在37℃培养条件下影响细胞壁稳定的试剂对生长的影响 | 第64-65页 |
| 4.9 氧化压对敲除菌生长的影响 | 第65-66页 |
| 4.9.1 在28℃培养条件下氧化压对生长的影响 | 第65页 |
| 4.9.2 在37℃培养条件下氧化压对生长的影响 | 第65-66页 |
| 4.10 Spm1基因对花生侵染的影响 | 第66页 |
| 5. 小结 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
