| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-17页 |
| 1.1 白僵菌概述 | 第8-12页 |
| 1.1.1 白僵菌的分类 | 第8页 |
| 1.1.2 球孢白僵菌的生物学特性 | 第8页 |
| 1.1.3 白僵菌的应用 | 第8-10页 |
| 1.1.4 白僵菌的致病机理及相关研究进展 | 第10-12页 |
| 1.2 | 第12-13页 |
| 1.2.1 胆固醇氧化酶的生理功能 | 第12页 |
| 1.2.2 胆固醇氧化酶的来源 | 第12-13页 |
| 1.2.3 胆固醇氧化酶在生防中的应用 | 第13页 |
| 1.3 昆虫病原真菌遗传转化方法 | 第13-16页 |
| 1.3.1 电击转化法 | 第14页 |
| 1.3.2 醋酸锂转化法 | 第14页 |
| 1.3.3 基因枪转化法 | 第14页 |
| 1.3.4 农杆菌介导转化法 | 第14页 |
| 1.3.5 PEG介导的原生质体转化法 | 第14-16页 |
| 1.4 技术路线 | 第16-17页 |
| 第二章 链霉菌769胆固醇氧化酶基因克隆、表达及生物学活性分析 | 第17-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-21页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第17-18页 |
| 2.1.2 供试昆虫 | 第18页 |
| 2.1.3 本研究所用到的引物 | 第18页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第19页 |
| 2.1.6 培养基 | 第19-20页 |
| 2.1.7 常用溶液 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-29页 |
| 2.2.1 链霉菌769基因组DNA的提取 | 第21页 |
| 2.2.2 PCR获得 769_ChOA基因 | 第21-22页 |
| 2.2.3 原核表达载体的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.4 序列分析 | 第23页 |
| 2.2.5 重组 769_ChOA异源表达与纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.6 SDS-PAGE凝胶电泳鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.7 Western-blot法鉴定重组 769_ChOA蛋白 | 第25-26页 |
| 2.2.8 Bradford法测定蛋白质浓度 | 第26页 |
| 2.2.9 重组 769_ChOA酶学性质分析 | 第26-28页 |
| 2.2.10 重组 769_ChoA室内毒力的测定 | 第28页 |
| 2.2.11 重组 769_ChoA注射亚洲玉米螟幼虫的透射电镜观察 | 第28-29页 |
| 2.3 结果与分析 | 第29-41页 |
| 2.3.1 769_ChOA基因克隆 | 第29页 |
| 2.3.2 769_ChOA表达载体构建 | 第29-30页 |
| 2.3.3 链霉菌769胆固醇氧化酶基因序列分析 | 第30-31页 |
| 2.3.4 重组 769_ChOA异源表达与纯化 | 第31-32页 |
| 2.3.5 Western-blot法鉴定重组 769_ChOA蛋白 | 第32-33页 |
| 2.3.6 蛋白浓度的测定 | 第33页 |
| 2.3.7 重组 769_ChOA酶学性质分析 | 第33-35页 |
| 2.3.8 重组 769_ChoA室内毒力分析 | 第35-36页 |
| 2.3.9 重组 769_ChoA 注射亚洲玉米螟幼虫的透射电镜观察 | 第36-41页 |
| 第三章 转 769_ChOA球孢白僵菌工程菌株的构建及生物学功能验证 | 第41-58页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-43页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第41页 |
| 3.1.2 供试昆虫 | 第41页 |
| 3.1.3 引物 | 第41-42页 |
| 3.1.4 培养基 | 第42-43页 |
| 3.1.5 溶液 | 第43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-48页 |
| 3.2.1 pHD3-hsp70::769_ChOA过载体的构建 | 第43页 |
| 3.2.2 球孢白僵菌原生质体制备 | 第43页 |
| 3.2.3 PEG介导的原生质体遗传转化 | 第43-44页 |
| 3.2.4 继代培养稳定性检测 | 第44-45页 |
| 3.2.5 转化子RT-PCR检测 | 第45-46页 |
| 3.2.6 转化子胆固醇氧化酶活力的测定 | 第46-47页 |
| 3.2.7 转化子与出发菌株生物学性状变化研究 | 第47-48页 |
| 3.3 结果与分析 | 第48-58页 |
| 3.3.1 球孢白僵菌原生质体的获得 | 第48页 |
| 3.3.2 769_ChOA球孢白僵菌表达载体构建 | 第48-49页 |
| 3.3.3 PEG介导的原生质体遗传转化 | 第49-50页 |
| 3.3.4 继代培养稳定性检测 | 第50-51页 |
| 3.3.5 转化子RT-PCR检测 | 第51页 |
| 3.3.6 转化子酶活力的测定 | 第51-52页 |
| 3.3.7 转化子与出发菌株生物学性状变化研究 | 第52-58页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第58-60页 |
| 4.1 重组 769_ChoA的异源表达 | 第58页 |
| 4.2 重组 769_ChoA的毒力分析 | 第58页 |
| 4.3 PEG介导的原生质体遗传转化 | 第58-59页 |
| 4.4 导入细胞膜毒力基因提高白僵菌致病力 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 作者简介 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
