| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第17-25页 |
| 1.1 L-苹果酸的性质与用途 | 第17-18页 |
| 1.1.1 L-苹果酸的性质 | 第17页 |
| 1.1.2 L-苹果酸的用途 | 第17-18页 |
| 1.2 L-苹果酸的生产途径 | 第18-20页 |
| 1.2.1 直接提取法 | 第19页 |
| 1.2.2 化学合成法 | 第19页 |
| 1.2.3 固定酶与固定化细胞转化法 | 第19页 |
| 1.2.4 发酵法 | 第19-20页 |
| 1.3 常见的L-苹果酸产生菌 | 第20页 |
| 1.4 L-苹果酸基本发酵过程分析与优化 | 第20-21页 |
| 1.5 L-苹果酸代谢途径解析 | 第21页 |
| 1.6 苹果酸合成途径中的重要酶 | 第21-22页 |
| 1.6.1 丙酮酸羧化酶 | 第21页 |
| 1.6.2 苹果酸脱氢酶 | 第21-22页 |
| 1.6.3 胡索酸酶 | 第22页 |
| 1.7 L-苹果酸高产菌株选育 | 第22-24页 |
| 1.7.1 诱变筛选 | 第22-23页 |
| 1.7.2 常见基因工程菌的构建 | 第23-24页 |
| 1.8 本课题研究的目的意义及主要内容 | 第24-25页 |
| 1.8.1 课题研究的目的意义 | 第24页 |
| 1.8.2 课题研究的主要研究内容 | 第24-25页 |
| 第二章 菌株的分离、鉴定及初步发酵 | 第25-34页 |
| 2.1 材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 试验试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.2 仪器与设备 | 第26页 |
| 2.1.3 培养基 | 第26页 |
| 2.2 试验方法 | 第26-31页 |
| 2.2.1 菌株来源 | 第26-27页 |
| 2.2.2 菌株分离 | 第27页 |
| 2.2.3 HPLC定性定量 | 第27-28页 |
| 2.2.4 DNA基因组提取 | 第28-29页 |
| 2.2.5 PCR扩增和ITS测序 | 第29页 |
| 2.2.6 初步发酵 | 第29页 |
| 2.2.7 产物含量测定计算 | 第29-30页 |
| 2.2.8 残糖检测 | 第30-31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-33页 |
| 2.3.1 分离与鉴别 | 第31-32页 |
| 2.3.2 ITS测序 | 第32页 |
| 2.3.3 初步发酵产L-苹果酸发酵进程曲线 | 第32-33页 |
| 2.4 本章结论 | 第33-34页 |
| 第三章 工艺优化及代谢初步分析 | 第34-54页 |
| 3.1 材料与方法 | 第34-35页 |
| 3.1.1 试剂 | 第34页 |
| 3.1.2 仪器与设备 | 第34-35页 |
| 3.1.3 菌种与培养基 | 第35页 |
| 3.2 试验方法 | 第35-36页 |
| 3.2.1 菌种活化 | 第35页 |
| 3.2.2 摇瓶基本发酵培养 | 第35-36页 |
| 3.2.3 孢子悬浮液培养 | 第36页 |
| 3.2.4 发酵罐发酵培养 | 第36页 |
| 3.3 产物含量测定计算 | 第36页 |
| 3.3.1 L-苹果酸的测定 | 第36页 |
| 3.3.2 生物量测定 | 第36页 |
| 3.3.3 富马酸含量的测定 | 第36页 |
| 3.4 优化试验 | 第36-38页 |
| 3.4.1 培养基配方单因素试验 | 第36-37页 |
| 3.4.2 响应面试验优化培养基配方 | 第37页 |
| 3.4.3 发酵工艺单因素试验 | 第37-38页 |
| 3.5 结果与分析 | 第38-52页 |
| 3.5.1 培养基配方的单因素试验 | 第38-42页 |
| 3.5.2 响应面试验 | 第42-47页 |
| 3.5.3 发酵工艺单因素试验结果 | 第47-51页 |
| 3.5.4 发酵产L-苹果酸发酵罐发酵进程曲线 | 第51-52页 |
| 3.6 本章小结 | 第52-54页 |
| 第四章 代谢调控及选育 | 第54-77页 |
| 4.1 材料与方法 | 第54-55页 |
| 4.1.1 菌株 | 第54页 |
| 4.1.2 试剂 | 第54-55页 |
| 4.1.3 仪器 | 第55页 |
| 4.1.4 培养基 | 第55页 |
| 4.2 菌株选育方案设计 | 第55-60页 |
| 4.2.1 L-苹果酸的测定 | 第55-56页 |
| 4.2.2 生物量测定 | 第56页 |
| 4.2.3 富马酸含量的测定 | 第56页 |
| 4.2.4 琥珀酸含量的测定 | 第56页 |
| 4.2.5 乙醇含量的测定 | 第56-57页 |
| 4.2.6 木糖质量浓度的测定 | 第57-58页 |
| 4.2.7 关键酶特性研究 | 第58-59页 |
| 4.2.8 紫外线诱变处理 | 第59页 |
| 4.2.9 乙醇抗性菌株筛选 | 第59-60页 |
| 4.2.10 氟乙酸抗性菌株筛选 | 第60页 |
| 4.3 结果与分析 | 第60-75页 |
| 4.3.1 Rhizopus delemar HF-119关键酶活分析 | 第60-61页 |
| 4.3.2 Rhizopus delemar HF-119简单代谢途径构建 | 第61-63页 |
| 4.3.3 Rhizopus delemar HF-119代谢网络构建 | 第63-69页 |
| 4.3.4 减少乙醇的代谢突变 | 第69页 |
| 4.3.5 HF-120突变菌株代谢通量分析 | 第69-71页 |
| 4.3.6 HF-120突变菌株关键酶及基因分析 | 第71-72页 |
| 4.3.7 减少杂酸的菌株选育(富马酸和琥珀酸) | 第72页 |
| 4.3.8 HF-121突变菌株代谢通量分析 | 第72-74页 |
| 4.3.9 HF-121突变菌株的相关酶及基因研究 | 第74-75页 |
| 4.4 本章小结 | 第75-77页 |
| 第五章 结论与展望 | 第77-79页 |
| 5.1 结论 | 第77-78页 |
| 5.2 展望 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-84页 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 | 第84页 |
